Un método para probar la eficacia del lavado de manos para la eliminación de patógenos infecciosos emergentes

El objetivo general de este experimento es evaluar la eficacia comparativa de diferentes opciones de lavado de manos en manos que han sido inoculadas experimentalmente con un organismo de interés. Este método puede proporcionar información sobre preguntas clave para ayudar a prevenir enfermedades infecciosas, al permitir a los investigadores estudiar la eficacia del lavado de manos frente a organismos específicos de interés.

La principal ventaja de esta técnica es que es flexible y puede adaptarse para permitir la investigación de muchos organismos diferentes. Tuvimos la idea original de este método cuando nos dimos cuenta de que se estaban utilizando soluciones de cloro para el lavado de manos en contextos de ébola, y en ese momento no existía evidencia sobre su eficacia. Después de reclutar sujetos elegibles y preparar las soluciones para el lavado de manos según el protocolo descrito, prepare las bacterias realizando un aislamiento de una cepa no patógena de E. coli en placas de agar LB e incube los cultivos a 37 grados celsius durante 24 horas para obtener colonias individuales.

Un día antes del inicio del experimento, utilice un lubricante estéril para tomar una colonia individual de la placa e inocular 10 mililitros de caldo LB. Incube los cultivos a 37 grados Celsius, con agitación, durante la noche. Por la mañana del experimento, agregue un mililitro del cultivo nocturno a 20 mililitros de caldo LB fresco.

Incube los cultivos durante aproximadamente dos horas y media para alcanzar una densidad salina mayor a 10 a la octava UFC por mililitro. Luego, utilice un espectrofotómetro para estimar la concentración del cultivo. Inmediatamente antes de la prueba, prepare un inóculo compuesto por 68% de suspensión bacteriana o viral y 32% de cloruro de sodio o carga de suelo.

Agite girando o remueva suavemente mediante vórtex para mezclar. Después de preparar a los voluntarios según el protocolo descrito en el texto, pruebe el pH de la piel de cada voluntario colocando una sonda plana para medir el pH cutáneo en el espacio interdigital entre el dedo índice y el medio. Asegúrese de que el electrodo esté bien apoyado contra la piel y registre la lectura de pH.

A continuación, pida al voluntario que junte ambas manos formando un cuenco. Luego, pipetee cuidadosamente 750 microlitros del inóculo en cada palma para contaminar las manos. Al contaminar las manos de los voluntarios, es importante que no se derrame ningún inóculo.

Recuérdeles a los voluntarios que esto es importante y déles la oportunidad de practicar con agua antes de comenzar el procedimiento. Pida a los voluntarios que froten suavemente sus manos una contra la otra hasta que todas las superficies de las manos estén cubiertas con el inóculo, ejerciendo la menor fricción posible. Instruya a los voluntarios a mantener las manos quietas y alejadas del cuerpo durante 30 segundos adicionales para permitir que el inóculo se seque.

Luego, lávese las manos utilizando uno de los métodos descritos en el protocolo escrito. Para el lavado de manos con jabón, use 10 mililitros de agua ultrapura para humedecer las manos. Pida a los voluntarios que enjabonen sus manos y luego las frunzan juntas durante 20 segundos adicionales.

Lave las manos del voluntario vertiendo 500 mililitros de agua ultrapura a temperatura ambiente a través de un embudo con un caudal de 1,5 litros por minuto en una bolsa grande para recolección de muestras, y procese la muestra dentro de las dos horas siguientes. Para todas las soluciones de cloro, vierta 200 mililitros de solución de cloro sobre las manos del voluntario a través de un embudo con un caudal de 1,5 litros por minuto y pida al voluntario que se frota bien las manos. Como otro método de lavado de manos, pida a los voluntarios que usen un desinfectante para manos para limpiarse las manos.

Es importante frotar suavemente todas las superficies de la mano; instruya a los participantes a concentrarse en cada parte: palmas, uñas y entre los dedos mientras frotan, y luego asegúrese de que toda la mano haya sido enjuagada. Para el control A, después de la inoculación, no realice el paso de lavado de manos. Para el control B, utilice únicamente agua ultrapura a temperatura ambiente para realizar el lavado de manos a través de un embudo con un caudal conocido.

Después de lavarse las manos, coloque inmediatamente la mano seleccionada para la prueba de cada voluntario en una bolsa de muestra que contenga 75 mililitros de Leeuwen hasta la muñeca. Sujete firmemente la parte superior de la bolsa alrededor de la muñeca. Pida a los voluntarios que froten suavemente la mano en la solución durante 30 segundos, teniendo cuidado de llegar entre los dedos y debajo de las uñas.

Masajee suavemente la mano desde el exterior de la bolsa durante 30 segundos para asegurar que toda la mano quede bien enjuagada en el Leeuwin, hasta la muñeca. Cierre la bolsa y procésela según el ensayo correspondiente. Antes de repetir el proceso con cada método de lavado de manos, pida a los voluntarios que usen jabón con agua tibia para lavarse bien las manos en el lavabo.

Finalmente, utilice etanol al 70 % para rociar las manos del voluntario hasta que queden cubiertas por ambos lados y permita que sequen. Para analizar las muestras, prepare una llama y un sistema de filtración con embudos de filtración estériles y una conexión al vacío. Esterilice la pinza sumergiéndola en etanol y pasándola por la llama.

Utilice la pinza para colocar un filtro de 0,45 micrones sobre el manifold de filtración con la rejilla hacia arriba. Luego, use una pequeña cantidad de PBS estéril para humedecer el filtro. Coloque el embudo sobre la base y pipetee o vierta la muestra directamente sobre el filtro.

Conecte el vacío hasta que toda la muestra haya pasado a través de la membrana. A continuación, use PBS estéril para enjuagar las paredes del embudo y conecte el vacío nuevamente. A continuación, retire el embudo, esterilice la pinza con la llama y levante el filtro de la base.

Luego, coloque suavemente el filtro sobre el medio en una placa de Petri con la cuadrícula hacia arriba, asegurándose de que el filtro quede bien ajustado contra la superficie. Invierta las placas e incube a 37 grados celsius durante 24 horas. Después de la incubación, cuente las colonias de E. coli y registre los datos.

Realice el análisis de datos según el protocolo descrito en el texto. El protocolo descrito en este video se completó con 18 voluntarios evaluados con E. coli y Phi6; para E. coli sin carga de suciedad, el lavado de manos con HTH, NaDCC y NaOCl estabilizado dio como resultado reducciones logarítmicas significativamente mayores que el lavado de manos solo con agua. Con carga de suciedad, el HTH produjo una reducción logarítmica significativamente mayor de E. coli que el lavado de manos solo con agua, con jabón y con antisépticos a base de alcohol (ABHS).

No hubo una diferencia significativa entre los métodos para Phi6 sin carga de suelo. Sin embargo, para Phi6 con carga de suelo, el agua sola produjo una mayor reducción logarítmica que ABHS o NaOCl estabilizado, y el lavado de manos con jabón produjo una mayor reducción logarítmica que ABHS, NaOCl estabilizado y NaOCl generado. HTH también tuvo una mayor reducción logarítmica que ABHS y NaOCl estabilizado, y NaDCC produjo una mayor reducción logarítmica que NaOCl estabilizado y ABHS.

Como se demostró en estas gráficas, el cloro produjo una reducción logarítmica significativamente mayor de E. coli persistente en el agua de enjuague en comparación con el lavado de manos con jabón. Finalmente, se encontró el mismo patrón en Phi6 sin carga de suciedad, con todas las soluciones de cloro que resultaron en una reducción significativamente mayor de Phi6 en el agua de enjuague que el lavado de manos con jabón. No hubo disminuciones significativas en el agua de enjuague con Phi6 y carga de suciedad.

Al realizar este procedimiento, es importante recordar que los resultados de eficacia para cada condición se calculan comparando los resultados de los dos controles. Esto significa que es muy importante realizar los pasos de manera consistente para cada opción de lavado de manos.