Prueba de las barreras fisiológicas a la transmisión del virus en los áfidos con microinyección

Si son transmisores eficaces de virus vegetales, si la microinyección de virus, el procedimiento que les mostraremos hoy es una técnica que permite a los investigadores inyectar directamente el virus en la célula hemática del AFib, evitando el intestino, una de las dos barreras principales para la transmisión del virus de forma circulativa. Hola, soy Cecilia Tamrin Dehi, posdoctorado en el departamento de patología vegetal de la Universidad de Cornell. Hoy les mostraré cómo inyectar virus en la célula hemática del AFI, virus que luego puede transmitirse a diferentes especies vegetales.

Por ejemplo, esta planta de espinaca está infectada con el virus del enrollamiento de la hoja de la papa (PLRV). Puede observarse la diferencia entre una planta sana y una infectada. El síntoma más notable es la esclerosis taven.

PLRV es un virus tipo luteovirus que es transportado por APHIS en su hemolinfa, el equivalente insectoide de la sangre de los mamíferos. Cuando un AFI no infectado se alimenta de una planta infectada, contrae el virus a través del fluido de la planta, que se puede observar aquí. Una vez ingerido, el virus debe pasar desde el intestino del insecto a la hemolinfa y luego atravesar la glándula salival para poder ser transmitido nuevamente a la planta ESE.

Y si al alimentarse de una planta ESE podría requerir muchos virus, sin embargo, solo una fracción mayor pasará a través del intestino y la glándula salival. Las dos barreras principales para la transmisión que permiten infectar más plantas se someten a prueba. Si un AFI está incapacitado para transmitir un virus, alimentamos a los AFI con tejido infectado durante dos días, luego permitimos que se alimenten en una planta sana durante cinco días.

Luego se fumiga la planta y, tras tres semanas, comenzamos a buscar síntomas. Cuando encontramos un AFib que no puede transmitir un virus, podemos evaluar cuál de las dos barreras está impidiendo la transmisión del virus mediante el procedimiento de microinyección, que voy a mostrarles hoy. En este procedimiento, el virus se inyecta directamente en la hemo celula, evitando así la barrera de transmisión intestinal.

Así que comencemos y voy a mostrarle cómo microinyectar algunos ápices. Estas son las agujas de vidrio que utilizamos. Extraemos las agujas de vidrio de estos cilindros de vidrio usando APU apu.

Entonces, esto es el microinyector. Para realizar la microinyección de un virus, comenzaré a colocar la aguja en el portaagujas.

Así que simplemente coloco la aguja y la pongo en su lugar. Ahora voy a cargar el virus en la aguja hasta la parte superior de este vástago. Ahora necesitamos posicionar el AFI para la microinyección.

Así que voy a tomar un AFI con la presión del dolor y lo voy a colocar en el soporte para AFI. Idealmente, intentaré colocar la parte posterior del áfido contra el soporte para tener acceso a la parte abdominal del AFib. Muy bien, excelente.

Ahora podemos proceder con la microinyección. Bien, ahora voy a posicionar la aguja y la acercaré al AFib. Ahora voy a poner la aguja en contacto con el AFib y perforar el exoesqueleto; lo mejor es intentar perforar entre los segmentos en la base de las patas.

Así que voy a inyectar. Ahora estoy tomando el AFI con el pincel y lo estoy colocando en el papel de recuperación, donde lo dejaré reposar por un momento. Por lo tanto, también necesitamos microinyectar el AFI de control.

Esta microinyección de control se realiza únicamente con el tampón sin el virus. El tampón que utilizamos es tampón fosfato 0,1 M, pH 7. Así que voy a colocar el afi en una planta sana, donde lo dejaré durante cinco días; después, infectaré la planta y esperaré al desarrollo de los síntomas tras la microinyección del ARN de cadena negativa. Durante una semana, cada día se medirá el nivel de expresión del gen diana en el afi.

Entonces, acabamos de microinyectar un AFI que era incapaz de transmitir el virus. Si después de la microinyección, el AFI es capaz de transmitir el virus, significará que este AFI tiene una barrera intestinal que bloqueaba al virus. Si, por el contrario, no se desarrollan síntomas, significará que este AFI tiene una barrera fuerte en las glándulas salivales.

Así que acabamos de mostrar cómo microinyectar virus en los áfidos. Este mismo procedimiento se utiliza para microinyectar ARN de cadena simple en los áfidos y realizar interferencia por ARNi, una técnica interesante que ayuda a estudiar la función génica en áfidos. Eso es todo respecto a la microinyección.

Espero que lo disfrute y que le sea útil para sus experimentos. Gracias.