Détermination de la réactivité et le titre du sérum en utilisant un dosage d'hémagglutination

Détermination de la réactivité et du titre du sérum à l'aide d'un dosage d'hémagglutinine. Une réaction de précipitation est une réaction qui se produit entre des anticorps solubles et des antigènes particulaires. Ceux-ci peuvent inclure des cellules ou des molécules supportées.

Les épitopes présents à la surface du vecteur permettent à un anticorps de se lier et d'agréger les vecteurs entre eux, conduisant à la formation d'un réseau complexe appelé complexe antigène-anticorps. L'hémagglutination est une forme spécifique d'agglutination dans laquelle les anticorps se lient aux globules rouges, qui agissent comme antigène particulé. Les globules rouges constituent des cibles utiles car ils sont facilement disponibles et les résultats peuvent être observés facilement à l'œil nu.

Les échantillons de sérum sont dilués en série, puis placés dans une plaque 96 puits en forme de U. Une suspension de globules rouges, les cellules Riva, est ensuite ajoutée. Lorsque des anticorps présents à une concentration élevée se lient aux globules rouges, cela entraîne la formation d'un réseau important.

Alors que ce réseau sédimente sous l'effet de la gravité, il épouse la forme de la plaque ubo. Vu d’en haut, on observe une couche étendue de globules rouges. Il s'agit d'une réaction d'hémagglutination positive.

Lorsque les taux d'anticorps sont faibles, aucun réseau ne peut se former et les globules rouges épousent la forme de la plaque UBO, en se concentrant à la base et en formant un petit culot. Il s'agit d'une réaction négative d'hémagglutination. Ce schéma illustre une réaction positive.

Les cellules forment un réseau lorsqu'elles se déposent et s'adaptent à la forme de la plaque à fond rond. À gauche et à droite, on observe la vue de dessus où une large couche de globules rouges est visible. Si une quantité intermédiaire d'anticorps est présente, on observera une certaine formation de lettres.

L'agglutination hématique permet également de tester la réactivité de différents échantillons sériques contre un antigène connu. Le titre de l'échantillon sérique peut aussi être déterminé. Le titre correspond à la dernière dilution à laquelle une réaction positive a été observée.

Normalement, plus la concentration en anticorps dans l'échantillon de sérum est élevée, plus le titre est élevé. Ce schéma montre une réaction négative d'hémagglutination. Il n'y a pas suffisamment d'anticorps présents pour réticuler les globules rouges.

Alors que les cellules se déposent par gravité, elles glissent le long de la paroi du puits en formant un culot compact au fond. Le schéma à droite montre les globules rouges vus de dessus. Pour cette expérience, vous aurez besoin d'une plaque de 96 puits à fond rond.

Il est essentiel d'utiliser une plaque en U car les plaques à fond plat n'autorisent pas la sédimentation des cellules en culot, rendant ainsi l'interprétation impossible. Un distributeur capable de délivrer 50 microlitres teste le sérum avec une suspension à 1 % de cellules Riva et une solution tampon saline de verone dans chaque puits de la rangée. D'un puits 1 à 12, ajouter 50 microlitres de tampon saline roal.

Ceci est utilisé comme diluant. Placez maintenant 50 microlitres de sérum dans le puits A1. Il s'agit de votre première dilution au demi.

À l'aide du pipeteur, assurez-vous que l'échantillon de sérum est bien mélangé. Une fois homogénéisé, prélève 50 microlitres de la cavité A1 et transfère-les dans la cavité A2. Il s'agit de ta deuxième dilution au demi, ce qui te donne une dilution quadruple.

Continuez cette série de dilutions en utilisant les puits trois à onze. Ne placez aucun sérum dans le puit 12, car il s'agit de votre témoin négatif au tampon salin physiologique. Prélevez maintenant votre suspension à 1 % de cellules de Riva, soigneusement mélangée, et transférez 50 microlitres du puit A1 au puit A12.

Une fois les cellules ajoutées, couvrez la plaque et tapez doucement sur celle-ci pour vous assurer que les échantillons et les cellules sont bien mélangés. Incubez maintenant à 37 degrés pendant 60 minutes. Un incubateur humidifié est approprié.

Pendant la période d'incubation de 60 minutes, des interactions entre l'antigène et l'anticorps auront lieu et les cellules commenceront à se déposer. Les images que vous visionnez constituent une photographie accélérée de l'ensemble de la période de 60 minutes. Il s'agit d'un agrandissement des puits cinq à dix.

Nous avons déjà examiné, eh bien, le puits 12, qui constituait votre témoin VBS dans cet essai. Les cellules avaient formé un culot compact, indiquant que le test avait fonctionné correctement. Les puits cinq et six sont des exemples d'hémagglutination positive.

Eh bien, le puits sept est un exemple de résultat d'agglutination intermédiaire, tandis que les puits huit, neuf et dix sont négatifs pour l'hémagglutination. Sur la base de ce résultat, le titre serait déterminé d'après la dilution du puits sept, car il s'agit du dernier puits dans lequel une réaction positive a été observée.