L'énucléation des yeux de souris à distance pour le phénotypage à haut débit

Ce vidéo montrera l'œil de la souris et la désinsertion, ou l'ablation du globe oculaire de la cavité orbitaire. Le globe oculaire est délimité par la marge de la paupière inférieure. Voici le canthus médial ou nasal.

À l’arrière se trouve le canthus temporal ou latéral. Au-dessus se situe la marge de la paupière supérieure. Voici un spécimen chirurgical.

L'aiguille pointe vers la cornée transparente. On peut voir un peu du cristallin qui dépasse au-delà de l'iris. L'iris est ici en marron, recouvrant le cristallin.

Le repère chirurgical le plus important est cette ligne blanche, ou le limbe, où sera réalisée une brèche juste en arrière. La moitié postérieure du globe se situe en arrière du limbe, et nous indiquons ici une insertion musculaire. On peut voir le muscle appliqué contre le globe à cet endroit, puis le tissu conjonctif qui remplit l’orbite et comprend la glande d’Airant.

Et enfin, ceci est la longue bande blanche du nerf optique provenant d'une dissection émoussée. À l'aide d'une pince à pansement courbe, modifiée avec une pointe aiguë, commencez par écarter les paupières. Cela a tendance à faire ressortir l'œil vers l'extérieur.

Utilisez soigneusement votre pince pour pénétrer dans l’orbite et passer derrière le globe oculaire, comprimez délicatement la zone située à l’arrière du globe sans l’écraser, puis tirez vers l’avant. Vous devriez avoir saisi le tissu conjonctif et non le globe oculaire. Si vous déplacez le globe oculaire sur le côté, vous pouvez observer le tissu orbital ainsi que le nerf optique blanc.

Cette deuxième dissection a pour but de montrer à nouveau que l'on pénètre au niveau du canthus, que l'on introduit la pince derrière le globe oculaire, que l'on saisit le tissu conjonctif, puis que l'on tire vers l'avant sans appuyer directement sur le globe oculaire lui-même. On peut encore observer le tissu conjonctif dans la longue bande blanche du nerf optique. Pour créer une plaie perforante, saisissez le globe oculaire par une insertion musculaire et insérez une aiguille derrière le limbe, juste à côté de l'endroit où vous tenez l'œil afin de le stabiliser.

Cela permettra au fixatif d'entrer dans l'œil. Si vous effectuez la perforation loin de l'endroit où vous tenez l'œil, le globe oculaire sera très instable, et il sera difficile de réaliser cette incision aussi longtemps que vous n'écrasez pas l'œil ou n'appliquez pas une pression excessive. Vous pouvez également saisir tous les tissus conjonctifs situés juste derrière le globe oculaire lui-même.

Certains fixateurs ne nécessitent pas de plaie par ponction. En général, on place l’œil dans un flacon de scintillation de cinq cm³ contenant au moins trois cm³ de fixateur afin de s’assurer que l’œil est complètement immergé. Pour les animaux fixés par perfusion, une dissection fine est nécessaire.

Nous utilisons une pince courbe en calibri et des ciseaux courbes de Wescott. Saisissez la paupière inférieure avec la pince en calibri. Insérez vos ciseaux contre l'os orbital, puis commencez à couper le tissu conjonctif.

Nous utilisons la courbe en s'éloignant du globe oculaire et évitons le calibrage. N'importe quelle partie de l'œil convient tout le long de la marge de la paupière inférieure, d'un canthus à l'autre. À un certain endroit, la majeure partie du tissu conjonctif sera retirée, et vous pourrez glisser vos ciseaux derrière le globe et l'écarter.

Voici un autre exemple, où l'on insère les ciseaux dans l'orbite, mais contre l'os orbital plutôt que contre le globe oculaire, en sectionnant délicatement les tissus conjonctifs. Cela commence à libérer le globe oculaire, qui ressemble à un ballon de basket dans son panier. Utilisez la pince pour écarter les paupières et effectuez de légers petits incisions tout autour du globe oculaire.

Ici, nous saisissons le tissu conjonctif ou une insertion musculaire avec le Collibra et terminons en détachant le globe oculaire du tissu conjonctif orbitaire. Une fois les globes oculaires correctement fixés, et s'ils doivent être transportés, nous plaçons un film parafilm autour du flacon de stockage.

L'emballage doit être conforme aux réglementations de votre université et du gouvernement. Nous plaçons généralement ceux-ci dans un récipient contenant un peu de coton pour retenir tout liquide ; ce récipient doit être hermétiquement scellé. Ce contenant d'expédition est ensuite placé dans un sac en papier bulle.

Ceci est placé dans un emballage de transport pour liquides en laboratoire, accompagné de tous les documents nécessaires.