Le test de natation forcée souris
29 janvier 2012
Le test de la nage forcée est validée comme une approche expérimentale pour évaluer le potentiel d'efficacité des antidépresseurs chez les rongeurs. Les animaux de laboratoire sont placés dans une cuve d'eau et d'évasion liés à des comportements de mobilité est quantifié. Les procédures communes pour la version la souris de ce test sont décrits.
Le test de nage forcée chez la souris est un test courant utilisé pour prédire l'efficacité des antidépresseurs. Cette vidéo montre les procédures du test de nage forcée chez la souris. La version souris diffère de la version humaine et ne doit pas être utilisée de manière interchangeable.
Dans le test de nage forcée, des souris sont placées dans un réservoir rempli d'eau. La souris reste dans le réservoir pendant six minutes. Les comportements du sujet sont enregistrés pendant cette période.
À la fin de la période de test de six minutes, le sujet est sorti de l'eau. Une fois le test terminé, les enregistrements vidéo sont transférés sur un ordinateur ou un moniteur vidéo. Pour l'analyse des mesures effectuées par l'observateur, on mesure le temps pendant lequel une souris passe à lutter au cours des quatre dernières minutes de la session de six minutes.
Les médicaments antidépresseurs augmentent la durée pendant laquelle l'individu lutte activement. Ceci se traduit par des périodes d'immobilité plus courtes. Bonjour, je m'appelle Sean et je travaille au laboratoire du Dr Todd Gould à la faculté de médecine de l'Université du Maryland.
Bonjour, je suis Chantelle du même laboratoire. Dans cette vidéo, nous allons vous montrer comment réaliser et évaluer la version murine du test de nage forcée. Le test de nage forcée chez la souris sert à évaluer l'efficacité potentielle de traitements antidépresseurs.
Alors, plongeons-y, voulez-vous ? Nous utilisons des réservoirs cylindriques transparents fabriqués dans un matériau solide, tel que du plexiglas ; les dimensions du réservoir sont choisies de manière à empêcher les souris de s'échapper et de toucher le fond avec leurs pattes ou leur queue. Remplissez le réservoir avec de l'eau du robinet jusqu'au niveau prédéterminé et marqué, puis ajustez la température de l'eau.
Il devrait être compris entre 23 et 25 degrés Celsius. Les réservoirs d'eau doivent être disposés de manière à permettre l'enregistrement vidéo. Dans notre laboratoire, nous effectuons le test de nage forcée avec quatre à cinq sujets simultanément entre les réservoirs.
Nous plaçons des séparateurs pour empêcher les sujets d'observer les autres. Ces séparateurs offrent également un contraste d'arrière-plan avec les souris. Pour les souris albinos, le noir fournit un bon contraste pour les enregistrements vidéo.
Pour les souches de souris aux couleurs plus foncées, un fond blanc ou crème est approprié. Avant de commencer l'expérience, mettez en marche la machine à bruit blanc. Assurez-vous qu'elle n'est pas trop forte.
Il ne doit masquer que les bruits intermittents. Faites entrer les sujets dans la salle d'expérience. Cette période d'acclimatation est généralement d'au moins une heure.
Les conditions dans la salle d'expérience doivent être maintenues constantes et exemptes de bruits, de variations de l'intensité lumineuse et d'autres perturbations possibles. Une fois la période d'habituation terminée, le test peut commencer. Il est important d'enregistrer le nom de la session. Tout d'abord, tenez les souris par la queue et placez-les délicatement dans le réservoir.
Il est important de procéder lentement afin que les animaux puissent s'orienter lorsqu'ils touchent la surface de l'eau. À la fin de la période de test de six minutes, enregistrez en vidéo l'identification des animaux et arrêtez l'enregistrement. Retirez les souris dans le même ordre qu'au départ et séchez-les délicatement avec des serviettes en papier avant de les remettre dans la cage.
L'eau des réservoirs ne doit pas être réutilisée. Maintenant que les tests sont terminés, passons à l'évaluation des comportements dans le test de nage en force imposée. La variable principale mesurée est la durée pendant laquelle les animaux restent immobiles au cours de l'essai.
En général, dans le test de nage forcée chez la souris, on évalue les quatre dernières minutes de la session totale de six minutes. La raison en est que la plupart des souris, quel que soit le traitement, sont continuellement actives au cours des premières phases du test. Cette activité masque tout effet potentiel du traitement.
Comme vous pouvez le voir dans cette vidéo, les souris sont très actives pendant les phases initiales du test. Cette activité diminuera après les deux premières minutes pour chaque souris. La mobilité est mesurée à l’aide d’un chronomètre à l’écran contrôlé par une manette de jeu.
L'autre chronomètre décompte les 240 secondes. La mobilité pendant le temps d'essai est définie comme tout mouvement autre que ceux nécessaires pour maintenir l'équilibre du corps et garder la tête au-dessus de l'eau. Voyons maintenant un exemple de notation d'un essai.
Nous couvrons d'abord les autres souris qui ne sont pas évaluées afin d'éviter toute confusion. Les souris flottent généralement facilement dans l'eau. Toutefois, elles effectuent encore de petits mouvements pour équilibrer leur corps et maintenir leur tête hors de l'eau.
Ces comportements ne constituent pas une tentative d'échappement et ne doivent pas être comptabilisés comme une mobilité. De plus, après un épisode unique de mobilité, les souris, même essentiellement immobiles, peuvent encore dériver dans l'eau en raison du momentum acquis précédemment ; ces mouvements ne doivent pas non plus être comptabilisés comme une mobilité. Passons maintenant à une autre vidéo.
La souris dans cette vidéo présente des périodes de mobilité et d'immobilité, telles qu'indiquées à l'écran ; un observateur enregistrera la durée de mobilité. Bien qu'il soit théoriquement possible de mesurer directement le temps d'immobilité, il est plus facile de détecter et de mesurer les mouvements actifs plutôt que leur absence. Traditionnellement, c'est le temps d'immobilité qui est rapporté.
Le temps d'immobilité est déterminé en soustrayant le temps de mobilité de 240 secondes. L'analyse du quatrième test de nage nécessite beaucoup d'entraînement et de pratique. Afin d'atteindre des niveaux élevés de fiabilité, il est important d'établir une norme interne et de former chaque nouvel observateur jusqu'à ce qu'il atteigne des niveaux élevés de fiabilité.
Dans cette vidéo, nous expliquons la version murine du test de nage forcée. Bonne chance dans vos futures expériences.
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Aperçu
Le test de nage forcée est une méthode validée permettant d'évaluer l'efficacité potentielle d'agents antidépresseurs chez les rongeurs. Ce test consiste à placer des souris dans un réservoir d'eau et à quantifier leur comportement moteur lié à l'évasion.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Sciences du comportement
- Psychopharmacologie
Contexte
- Le test de nage forcée est couramment utilisé dans la recherche préclinique.
- Il permet de prédire l'efficacité des traitements antidépresseurs.
- Les souris sont utilisées en raison de leurs similitudes comportementales avec les humains.
- Différentes versions de ce test existent, notamment celles utilisant la souris et le rat.
Objectif de l'étude
- Démontrer les procédures de la version murine du test de nage forcée.
- Mettre en évidence les différences entre les versions murine et rat.
- Fournir un guide visuel aux chercheurs réalisant le test.
Méthodes utilisées
- Les souris sont placées dans un réservoir rempli d'eau pendant six minutes.
- Des observations comportementales sont enregistrées pendant la durée du test.
- La mobilité liée à l'échappement est quantifiée pour évaluer l'efficacité antidépressive.
- Les procédures sont standardisées afin de garantir la reproductibilité.
Résultats principaux
- Le test fournit des informations sur les réponses comportementales des souris.
- Les résultats peuvent indiquer l'efficacité potentielle des antidépresseurs.
- La variabilité du comportement peut renseigner sur les mécanismes sous-jacents de la dépression.
- Des procédures standardisées améliorent la fiabilité des résultats.
Conclusions
- Le test de nage forcée est un outil précieux dans la recherche sur les antidépresseurs.
- La compréhension du comportement de la souris dans ce contexte peut conduire à de meilleurs traitements.
- De futures études pourront s'appuyer sur ces résultats pour explorer de nouvelles voies thérapeutiques.
Questions fréquemment posées
Pertinence industrielle pour les cadres
Le test de nage forcée chez la souris est un test comportemental préclinique largement utilisé pour évaluer l'efficacité des antidépresseurs, fournissant une mesure quantitative de la mobilité liée à l'échappement qui contribue à la validation des cibles et à la réduction des risques mécanistiques en phase précoce de découverte. Sa procédure standardisée permet une évaluation reproductible des effets des composés sur les états de type dépressif, orientant les décisions d'aller ou de ne pas aller de l'avant dans la priorisation des pipelines d'antidépresseurs. La simplicité du test et ses exigences minimales en équipement facilitent sa mise en œuvre à grande échelle dans les flux de travail de découverte.
Applications stratégiques en R-D biopharmaceutique
Découverte précoce et validation de cibles
- Valeur scientifique : Interroge des hypothèses thérapeutiques en mesurant les modifications du comportement locomoteur induites par les antidépresseurs, soutenant ainsi la validation de l'engagement du cible.
- Valeur opérationnelle : Permet la validation fonctionnelle de cibles du SNC grâce à l'évaluation de la relation dose-réponse des composés antidépresseurs.
- Valeur prédictive : Contribue à la confiance préclinique en établissant une corrélation entre l'augmentation du temps de lutte et l'efficacité clinique potentielle.
Élaboration de tests et criblage
- Prêt-à-l’usage du test : Produit des mesures quantifiables de la mobilité au cours des quatre dernières minutes d'une session de six minutes, permettant un criblage standardisé de composés.
- Reproductibilité : Une température d’eau standardisée (23–25 °C), des dimensions fixes de l’aquarium et une formation uniforme des observateurs garantissent des résultats cohérents entre différents laboratoires.
- Extensibilité : Compatible avec le test parallèle de quatre à cinq sujets à l’aide de séparateurs empêchant les interférences sociales, permettant ainsi une évaluation à débit moyen.
Recherche translationnelle et préclinique
- Pertinence pathologique : Modélise des états de type dépressif par le biais du comportement d'immobilité, permettant l'évaluation de candidats antidépresseurs fondés sur des mécanismes spécifiques.
- Continuité translationnelle : La cotation de la mobilité s'aligne sur les critères cliniques en quantifiant les comportements d'adaptation active prédictifs de la réponse au traitement.
- Progression ajustée au risque : Des données fiables sur l'immobilité soutiennent les décisions précliniques de poursuite ou d'arrêt en réduisant la progression des faux positifs.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Le test du nage forcé chez la souris fonctionne comme un test comportemental de découverte qui fait le lien entre la validation de la cible et l'identification du composé candidat, fournissant des éclairages mécanistiques avant de passer à des études précliniques d'efficacité.
- Biologie de la découverte : Soutient la vérification d'hypothèses en isolant l'effet de composés sur le comportement lié à l'évasion, précisant ainsi le rôle des voies dans la régulation de l'humeur.
- Tri : Fournit des données quantitatives sur la mobilité permettant de comparer les composés testés à des témoins et à des antidépresseurs de référence.
- Analyse : La mesure du temps de mobilité, obtenue par détection des mouvements actifs, fournit un indicateur fiable dépendant de l'observateur pour les comparaisons entre groupes.
- Recherche translationnelle : S'inscrit dans la validation préclinique en offrant un indicateur comportemental de la réponse aux antidépresseurs, éclairant ainsi les études sur le mécanisme d'action.
- Réutilisation en entreprise : Met en place une plateforme comportementale réutilisable pour l'évaluation de cibles du système nerveux central dans plusieurs campagnes de découverte.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive dans la validation des cibles en réduisant l'ambiguïté mécanistique lors du criblage d'antidépresseurs.
- Valeur opérationnelle : Garantit la standardisation des tests grâce à une durée fixe, un contrôle de la température et des protocoles d'évaluation en aveugle.
- Valeur stratégique : Améliore l'efficacité du capital en permettant l'élimination précoce des candidats antidépresseurs avant des études exigeant des ressources importantes.
- Impact sur le portefeuille : Favorise une priorisation ajustée au risque en identifiant les composés présentant des effets robustes d'amélioration de la mobilité.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en neurosciences comportementales en matière de manipulation des rongeurs et d'évaluation éthologique.
- Dépend d'un équipement environnemental contrôlé, notamment des cuves à eau thermostatées et des systèmes d'enregistrement vidéo.
- Exige une standardisation inter-équipes de la formation des observateurs afin d'obtenir une fiabilité inter-juges dans l'évaluation de la mobilité.
- Implique des adaptations selon les souches de souris, notamment l'optimisation du contraste de fond pour le suivi vidéo.
- Est limité par des facteurs de confusion potentiels tels que la réactivité au stress et les troubles moteurs, qui doivent être contrôlés à l'aide de tests complémentaires.
