Modèle endocardite expérimentale de résistant à la méthicilline

L'objectif général de cette procédure est de mettre en place un modèle expérimental d'endocardite infectieuse chez le rat. Cela est réalisé en cultivant d'abord Staphylococcus aureus et en préparant des cathéters chirurgicaux en vue de l'infection. Ensuite, la zone chirurgicale est préparée et l'animal est anesthésié.

Une fois l'animal anesthésié, un cathéter est inséré par l'artère carotide droite en direction du cœur. La dernière étape consiste à infecter les animaux avec aureus par injection intraveineuse dans la veine de la queue. Enfin, les tissus cibles sont disséqués et préparés pour une culture quantitative.

L'avantage principal de cette technique par rapport aux méthodes existantes, comme le modèle de l'endocardite rapide, est que le modèle d'endocardite rouge peut être utilisé avec le système d'imagerie in vivo, Ivus. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la pathogenèse orale, telles que la virulence et l'efficacité des agents antimicrobiens. Généralement, les personnes novices dans cette technique éprouveront des difficultés, car la procédure chirurgicale est délicate.

Prélevez tout d'abord une boucle pleine de culture M SSA à partir d'une souche congelée et ensemencez-la sur une boîte de gélose au sang de mouton. Incubez la culture toute la nuit à 37 degrés Celsius après vous être assuré qu'il n'y a aucune contamination. Choisissez une colonie sur la boîte et utilisez-la pour ensemencer cinq millilitres de bouillon tryptiquease-soja dans un tube de 15 millilitres à bouchon vissable.

Incuber l'inoculum à 37 degrés Celsius pendant la nuit dans un incubateur agité. Régler à 200 tr/min pour préparer d'abord les cathéters. Couper des tubes en polyéthylène en segments de 10 centimètres et stériliser les cathéters dans une solution désinfectante cex pendant 30 minutes.

Ensuite, faites fondre une extrémité d'un tube stérilisé en appuyant sur l'extrémité avec des pinces stériles chauffées afin de créer un cathéter qui passera de l'artère carotide droite vers le ventricule gauche et provoquera des lésions de l'endocarde lorsque le cœur battra. Puis anesthésiez le rat en le plaçant dans une chambre contenant un mélange isoflurane-oxygène en proportion égale jusqu'à ce que l'anesthésie fasse effet. Vérifiez l'anesthésie en contrôlant le relâchement musculaire et l'absence des réflexes plantaires.

Et maintenir un état anesthésié pendant l’intervention chirurgicale à l’aide d’un embout nasal relié au mélange gazeux. Nettoyer la zone chirurgicale avec du Bétadine et de l’éthanol à 70 % en utilisant une technique stérile tout au long de l’intervention. Placer le rat en position dorsale et pratiquer une incision verticale à travers la couche cutanée du cou au-dessus du sternum en utilisant une dissection émoussée.

Séparez le fascia afin d'exposer l'artère carotide droite. L'artère carotide droite se situe légèrement à droite de la ligne médiane, au-dessus des clavicules. Extrayez délicatement l'artère de la cavité du cou et placez deux longueurs de 10 centimètres de soie sous l'artère pour la ligaturer à l'extrémité céphalique exposée.

Ensuite, placer une pince sur l'artère pour prévenir les saignements. Faire un petit trou dans le haut de l'artère à l'aide d'un introduciteur de cathéter et de forceps. Insérer l'extrémité non scellée du cathéter à travers le trou dans l'artère.

Retirez le clip et poussez le cathéter vers le cœur. Tant qu'une résistance n'est pas rencontrée, le cathéter doit être inséré correctement de quatre à cinq centimètres dans l'artère et doit pulser au rythme des battements cardiaques du rat. Une fois le cathéter en place, faites un nœud lâche avec le fil de suture autour de l'extrémité du cathéter et fixez-le solidement.

Avec un fil de suture en soie, couper l'excès de suture et les extrémités du cathéter, puis replier les extrémités sous la peau du cou. Fermer la peau à l'aide de clips cutanés. Placer le rat dans une cage propre et le maintenir dans un endroit chaud jusqu'à son réveil de l'anesthésie.

Fournir de la nourriture et de l'eau et vérifier fréquemment le rat, tant pendant qu'après la récupération. L'infection peut être réalisée entre un et sept jours après la chirurgie, mais le délai doit rester constant au sein des expériences. Nettoyer la queue du rat avec de l'éthanol à 70 % et injecter 0,5 millilitre de la culture de MRSA à la cellule souhaitée.

Effectuer le comptage par voie veineuse caudale. À l’aide d’une aiguille de calibre 27 de demi-pouce, appliquer une pression sur le site d’injection jusqu’à l’arrêt de tout saignement avant de replacer le rat dans sa cage. Après l’euthanasie du rat, nettoyer la poitrine avec de l’éthanol à 70 %, puis pratiquer une incision en forme de V dans la poitrine sous le sternum.

Coupez le cartilage des côtes de chaque côté du sternum. Pour exposer le cœur, tirez doucement sur le cœur vers le haut et sectionnez les tissus près de l'aorte, puis disséquez vers le haut afin de libérer le cœur. Placez le cœur dans une boîte de Pétri stérile tapissée d'un morceau de gaze de quatre pouces sur quatre pouces, puis effectuez une incision dans la paroi interne du ventricule gauche et ouvrez la chambre située à gauche.

Vérifiez le bon positionnement du cathéter, puis retirez-le. Examinez et retirez les végétations valvulaires à l’aide de ciseaux et de pinces. Retirez également les reins et la rate, puis, après avoir pesé et homogénéisé les tissus et les végétations, effectuez des dilutions sériées dans du PBS pour la culture quantitative.

On observe ici un cathéter correctement positionné, comme l'indique la flèche la plus à gauche. Il s'étend au-delà de la valve aortique et pénètre dans la chambre cardiaque gauche, et de nombreuses végétations sont visibles autour des valves aortiques, comme indiqué par les flèches centrale et de droite. Ce tableau fournit un exemple de la virulence d'une souche ssus dans le modèle de rat d'endocardite.

Tous les animaux ayant reçu une inoculation de 10 à la puissance 5 et de 10 à la puissance 6 UFC ont développé une endocardite avec des densités bactériennes élevées dans les végétations cardiaques ainsi que dans les reins et la rate. Une fois maîtrisée, cette procédure chirurgicale peut être réalisée en moins de 10 minutes si elle est effectuée correctement.

Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de se rappeler de maintenir l'animal en état d'évaluation pendant l'intervention chirurgicale suivant cette méthode. D'autres approches, telles que l'IVUS, peuvent être réalisées afin de répondre à des questions supplémentaires, comme la surveillance en temps réel de l'efficacité des agents antimicrobiens et l'expression génique in vivo après son développement. Cette technique ouvre la voie aux chercheurs dans le domaine de *S. epidermidis* et de la fiction pour explorer son facteur de virulence pathogène dans l'infection endovasculaire.

Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment établir un modèle expérimental d'endocardite chez le rat. N'oubliez pas que le travail avec le MRA peut être extrêmement dangereux et que des précautions, telles que le port d'une blouse et de gants de laboratoire, doivent être prises lors de la réalisation de cette procédure.