Essai de préférence la lumière pour étudier innée et circadien Photobehavior Réglementé Drosophila Les larves

L’objectif général de l’expérience suivante est de tester le comportement inné et circadien de la lave de drosophile au moyen d’un test de préférence pour la lumière et l’obscurité. Ceci est réalisé en élevant d’abord les larves expérimentales dans des conditions définies de lumière et d’obscurité afin d’établir une horloge circadienne initiale chez les larves. Ensuite, les larves passent à l’obscurité constante, ce qui permet à l’horloge circadienne larvaire de fonctionner librement.

Une fois au stade d’alimentation L trois, la lave est triée en groupes pour tester leur préférence pour la lumière à différents points du temps circadien. On obtient des résultats qui montrent la préférence pour la lumière innée et circadienne sur la base du calcul d’un indice de préférence et de la comparaison entre les points temporels et les groupes expérimentaux. Bien que cette méthode puisse donner un aperçu de la régulation innée et circadienne de la détection de la lumière et du traitement du comportement photo, elle peut également être appliquée à d’autres systèmes tels que l’olfaction, la cassation, la chimiothérapie, les thermotaxis.

De même, il peut être modifié pour les tests d’apprentissage et de mémoire. Pour faire la démonstration de la procédure, Alina et BMA Pour les étudiants diplômés de mon laboratoire Pour collecter les œufs, permettre aux mouches adultes accouplées de pondre pendant 12 heures sur des limes fraîches et les transférer dans de nouveaux flacons. Continuez à transférer les adultes toutes les 12 heures pour un cycle de 12 heures de lumière et 12 heures d’obscurité.

Conservez les collections d’œufs de 12 heures dans l’incubateur. Pour l’expérience, élevez les animaux au stade larvaire L trois. Ce sont des lae d’alimentation disponibles 84 à 108 heures à partir de l’œuf.

La mise en scène correcte de LAE est essentielle au succès de l’expérience. Depuis la fin de L trois, LAE a changé le comportement photo pour tester les composantes circadiennes du comportement visuel. 48 heures avant le test et juste avant que les larves subjectives, à l’aube, mettent les larves collectées dans une boîte en carton.

Transférez ensuite la boîte dans un incubateur à obscurité constante pendant 48 heures jusqu’à ce que l’expérience permette à ces larves de rester intactes dans leur espace dédié. Préparez le couvercle d’une boîte de Pétri de neuf centimètres à l’aide d’un carré de 20 centimètres divisé en quatre quadrants. En tant que guide.

Collez des carrés de 10 centimètres de papier d’aluminium sur les quadrants opposés et recouvrez-les de ruban adhésif noir. Assurez-vous de couvrir le bord du couvercle. Ensuite, collez, un carré de 20 centimètres divisé en quatre quadrants sous la source lumineuse sur la table.

Marquez la circonférence d’une parabole d’essai sur la feuille pour servir de guide pour un déplacement constant. Installez une lampe LED au-dessus de la boîte de Pétri à l’aide d’un support en fer. Ajustez la hauteur de manière à ce que l’ensemble de la plaque de test soit éclairé de manière homogène.

Ajustez l’intensité lumineuse sur un site d’essai entre 350 et 760 luxe en ajustant davantage la hauteur de la lampe ou en utilisant une alimentation réglable. La salle d’expérimentation a besoin d’un éclairage rouge et doit avoir la même température que celle d’où les animaux sont élevés. Les flacons ont surgi deux jours dans l’obscurité constante.

Récupérez la lave dans leur nourriture avec une spatule dans les cinq premiers millimètres de la nourriture. Étalez les aliments sur le côté extérieur du couvercle d’une boîte de Pétri. Ajoutez un peu d’eau à la nourriture et mélangez-la doucement avec la spatule.

Ajoutez une goutte d’eau du robinet dans un nouveau plat à l’aide d’un pinceau. Transférez les larves dans la goutte d’eau pour les laver. Ensuite, utilisez un pinceau humide pour recueillir les larves à l’aide du pinceau humide.

Ne choisissez que les larves L trois qui se nourrissent tôt et évitez les larves L trois qui se déplacent tardivement. Transférez les larves sélectionnées au centre d’une plaque d’essai. Les trois larves ont des sphères antérieures ouvertes et saillantes vers l’extérieur.

Sous la forme d’un doigt. Les sphères postérieures ont chacune trois ouvertures et quatre groupes de gros poils ramifiés. Les glandes salivaires s’étendent jusqu’au deuxième segment abdominal.

Une fois que 30 larves ont été placées au centre de la plaque d’essai, couvrez-la avec le couvercle préparé. Allumez la lampe LED. Démarrez une minuterie et laissez les larves se déplacer librement sur la plaque pendant cinq minutes.

Retirez ensuite rapidement le couvercle et comptez le nombre de larves dans l’obscurité et dans les quadrants clairs. Marquer la position de chaque lave peut faciliter le comptage. Une photographie rapide peut également aider les larves montrant une préférence lumineuse peu claire, comme les larves rampant sur les murs ou empruntant à la gélose, devraient être comptées comme une préférence neutre et ajoutées au nombre total de larves lorsque l’indice de préférence lumineuse est calculé.

Après avoir compté les larves, jetez la plaque et utilisez une nouvelle plaque de test pour la prochaine expérience. Après avoir réalisé 10 à 15 essais par génotype, procéder à l’analyse selon le protocole. La préférence pour la lumière et l’obscurité de la lave de Canton ES a été comparée à deux moments circadiens différents.

CT zéro et CT 12, subjectivement, les larves ou gémissent à l’aube et au crépuscule pendant 48 heures dans des conditions standard, puis passent à l’obscurité constante pendant trois jours. Les tests de lumière sombre sous 350 luxe ont révélé que la photosensibilité à la lumière était plus élevée chez les larves testées à CT zéro par rapport aux larves testées à CT 12. En utilisant cette formule, la préférence d’obscurité de la lave zéro CT était de 0,52 contre 0,36.

Les larves de CT 12 comparant les indices à l’aide d’un test de Wilcoxon produisent une valeur P significative de 0,023. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de tester la préférence de lumière de la larve trophée à différents circuits et points temporels pour atteindre cet objectif. Vous devriez être capable d’entraîner au stade F trois larves d’ophos, de tester leur comportement photophobe et de calculer l’indice de préférence à la lumière pour une comparaison statistique.