Thérapie à base de cellules pour l'insuffisance cardiaque chez le rat: Double thoracotomie pour infarctus du myocarde et épicardique implantation de cellules et Biomatrice

Le but de cette procédure est d’effectuer une double thoracotomie sur des rats afin de réaliser une ligature coronaire et une application épicardique. Ceci est accompli en effectuant d’abord une thoracotomie au quatrième espace intercostal. Ensuite, l’artère coronaire descendante antérieure gauche ou DAL est ligaturée.

Ensuite, une deuxième thoracotomie est réalisée deux semaines plus tard au cinquième espace intercostal. Enfin, les cellules et la matrice sont appliquées à la surface du cœur battant infarctus. En fin de compte, l’échocardiographie est effectuée pour évaluer la fonction cardiaque et l’histologie est effectuée par des mesures de la taille de l’infarctus.

Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes comme la sternotomie est qu’il s’agit d’une approche peu invasive démontrant que la procédure sera et ine Lopez a envoyé des collaborateurs de notre laboratoire. Tous les animaux ont été traités dans le respect des recommandations de la F-E-L-A-S-A et de la loi suisse sur la protection des animaux. Après avoir exsangné un rat et isolé et nettoyé les os du fémur selon le protocole textuel, utilisez des ciseaux pour couper les deux pointes des os.

Ensuite, pour rincer la moelle osseuse, injectez du PBS stérile dans le cœur de l’os et recueillez la moelle dans un tube de 15 millilitres. Centrifugez la moelle osseuse prélevée pendant sept minutes à 300 fois G.Retirez le supinate avec trois millilitres de tampon de lyse des globules rouges. Mettez la pastille en suspension, incubez la suspension pendant une minute à température ambiante avant de la faire tourner à nouveau pendant sept minutes à 300 fois G après la réanimation.

Suspension de la pastille dans un milieu de culture stérile. Ajouter un milieu de culture cellulaire supplémentaire dans une fiole de culture de 150 millilitres et ensemencer les cellules le deuxième jour d’incubation. Changez le milieu pour éliminer les cellules qui ne respectent pas la peau et continuez à remplacer le milieu tous les deux jours pendant deux à trois semaines jusqu’à ce que la densité cellulaire souhaitée soit atteinte.

Pour réaliser la première thoracotomie T, commencez par peser le rat et réglez les paramètres du ventilateur en conséquence. Le débit de ventilation est défini automatiquement. Ensuite, rasez la partie gauche du thorax, allumez un coussin chauffant et réglez-le à 37 degrés Celsius.

Après avoir anesthésié le rat conformément au protocole textuel, effectuez un pincement de l’orteil ou de la queue avant de placer le rat sur le coussin chauffant en position couchée à l’aide d’un cathéter IV de calibre 14, intubez l’animal, puis connectez le cathéter d’intubation à un ventilateur pour rongeurs. Programmé pour 2,5 litres par minute d’oxygène, 2,5 % de fluor, un volume courant de deux millilitres et une fréquence respiratoire de 90 respirations par minute. Après avoir préparé une seringue avec de la buprénorphine 0,1 milligramme par kilogramme par voie sous-cutanée, injectez un tiers de la solution, puis utilisez une solution de bétadine à 1 % pour désinfecter la zone.

Ensuite, incisez la peau perpendiculairement au sternum du quatrième espace intercostal et séparez les trois couches de muscle thoracique. Ouvrez ensuite le quatrième espace intercostal entre les côtes quatre et cinq. Utilisez un petit écarteur pour écarter les côtes et exposer le cœur.

Ensuite, ouvrez soigneusement le péricarde et localisez l’artère coronaire descendante antérieure gauche ou LAD, et utilisez une suture 7.0 pour la ligaturer à quatre millimètres sous l’oreillette. Ensuite, contrôlez le changement de couleur de la zone ischémique avec trois sutures zéro positionnées approximativement et distalement du sternum. Faites deux points de suture à utiliser pour fermer l’espace intercostal.

Serrez la suture distale. Serrez la tubulure d’évacuation du ventilateur pendant deux secondes afin de gonfler la poitrine et d’éviter le pneumothorax. Serrez ensuite la deuxième suture.

Remettez les couches musculaires en place. Ensuite, utilisez cinq points de suture zéro pour fermer la peau avec une solution de bétadine à 1 %. Désinfectez la suture et injectez le reste de la solution de buprénorphine.

Éteignez le système d’anesthésie et retirez le cathéter d’intubation. Gardez le rat dans une cage sous une lampe chaude pendant une à deux heures avant de le remettre dans une unité IVC. Deux semaines après la première thoracotomie, la cicatrisation est terminée et une cicatrice est à peine visible.

En suivant la procédure décrite plus haut dans cette vidéo pour préparer le rat à la chirurgie, incisez la peau perpendiculairement au sternum au cinquième espace intercostal. Séparez les trois couches de muscle et ouvrez le cinquième espace intercostal entre les côtes cinq et six. Utilisez un petit écarteur pour écarter les côtes et exposer le cœur.

S’il y a une certaine adhérence, utilisez des pinces fines pour la soulager soigneusement. Ensuite, localisez la zone de l’infarctus qui apparaît sous la forme d’une zone pâle sous la ligature. Si nécessaire, insérez un morceau de 10 centimètres de sept sutures zéro à l’apex et tirez doucement dessus pour mieux visualiser le ventricule gauche.

Ensuite, appliquer des cellules et une matrice à la surface de la zone ischémique du cœur. Après la granulation, quatre fois 10 sur les six cellules comme indiqué dans le protocole de texte, déposez la palette sur le cœur avant d’utiliser un scellant à base de fibrine pour la couvrir. La couche de colle fixe les cellules à la surface du cœur.

Après avoir retiré le morceau de suture de la position apexale, le muscle se remet en place pour suturer et désinfecter l’animal. Comme démontré plus tôt dans la vidéo, comme montré ici. Après une intervention chirurgicale, les animaux ont perdu du poids et se sont rétablis rapidement avant de prendre du poids indépendamment du traitement appliqué Comme le montre ce graphique de Kaplan, le taux de survie est élevé après la première thoracotomie T, les animaux traités avec de la fibrine et/ou des cellules ont présenté des taux de survie inférieurs à ceux des autres groupes, comme le montre ce graphique.

Néanmoins, les taux de survie globaux sont restés élevés après une seconde. La fonction cardiaque de la thoracotomie et du traitement a été évaluée par échocardiographie. Ces images représentatives du mode M pour des animaux sains et infarctus illustrent que la contractilité de la paroi VG est abolie deux semaines après la ligature LAD ; un raccourcissement fractionnel a été enregistré deux semaines après la lation LAD sur un total de 104 animaux.

La distribution de fréquence montre des méthodes raisonnablement reproductibles avec un coefficient de variation de 17 %Cette figure illustre une représentation graphique de la fonction cardiaque par la fraction d’éjection mesurée deux et six semaines après la DLA La fonction cardiaque continue de diminuer au cours de cette période. Le remodelage cardiaque se produit également au cours de cette période et est représenté ici par une augmentation des volumes VG enregistrée à la fois dans la soeur et la diastole. Enfin, une coloration dorée sur des coupes cardiaques a révélé que du tissu fibreux et éventuellement une cicatrice transmurale se sont développés six semaines après la ligature LAD. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 30 à 40 minutes si elle est correctement réalisée.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de réaliser une double thoracotomie mini-invasive.