Une méthode simple pour l'extraction des échantillons d'eau automatisée en phase solide pour immunologique analyse des petits polluants

L’objectif global de cette méthode de préparation d’échantillons est de préconcentrer de petits polluants organiques à partir d’échantillons d’eau, de manière conviviale, rentable et automatisée. Cette méthode peut remplacer les processus SPE standard lors de l’étude de la contamination d’échantillons d’eau à l’aide de méthodes d’immunodétection, telles que les immunodosages sur plaque ou les biocapteurs. Les principaux avantages de cette technique sont que la procédure SPE est automatisée tandis que l’encombrement et le coût des instruments sont faibles par rapport aux approches traditionnelles.

De plus, les performances du procédé d’enrichissement correspondent à l’exigence d’analyse des immunodosages tant en termes de faible teneur en solvant que d’efficacité de pré-concentration. Tout d’abord, filtrez un échantillon d’eau de 100 millimètres avec un filtre à point zéro de deux micromètres. Placez l’échantillon filtré dans une bouteille en verre avec filetage GL 45.

Préparez 300 microlitres d’éluant en diluant le méthanol dans de l’eau déminéralisée, à 50 % du volume dans un tube étanche. Ensuite, préparez une suspension de 20 milligrammes par millilitre de particules de sorbant de silice octadécyle en ajoutant 1 600 microlitres de méthanol suivis de 400 microlitres d’eau désionisée à 40 milligrammes de sorbant en phase inverse dans une capsule de verre. Fermez bien le couvercle et agitez avec un mélangeur vortex.

Placez une membrane en nylon avec des pores de 11 micromètres sur une double couche de tissu anti-poussière. Découpez deux petites pièces dans la membrane avec un poinçon de trois millimètres de diamètre. Ensuite, saisissez l’une des petites membranes à l’aide d’une pince à filtre à extrémité plate et placez-la sur un côté de la colonne.

Ensuite, vissez le connecteur à fond plat avec le tube et serrez. Ensuite, dessinez une flèche sur le corps de la colonne, pointant vers l’extrémité où la membrane a été placée. À ce stade, fixez la colonne sur le support avec la flèche pointant vers le bas.

Fixez une seringue jetable vide de 10 millilitres à l’extrémité du tube de la colonne à l’aide des connecteurs de verrouillage inférieurs. Agitez la suspension sorbante avec le mélangeur vortex, et pipetez rapidement 100 microlitres au centre de la colonne. Pendant l’injection, aspirez doucement la solution pipetée à travers la membrane à l’aide de la seringue avec l’autre main.

La préparation de la colonne SPE est très importante. Vous devez vous assurer que vous aspirez correctement la solution à travers la membrane à l’aide de la seringue tout en injectant la suspension de particules dans la colonne. Sinon, les particules ne seront pas densément tassées.

Répétez le processus précédent deux fois de plus, en agitant la suspension mère entre toutes les étapes de pipetage, pour assurer une suspension homogène des particules dans la solution. Une fois que toute la suspension a été chargée et séchée à l’aide d’une seringue, maintenez la seringue en position et placez la deuxième membrane en nylon sur le dessus à l’aide de la pince avec l’autre main. Ensuite, vissez le deuxième connecteur avec un tube et jetez la seringue.

À ce stade, serrez la colonne de l’appareil SPE à l’aide des connecteurs de verrouillage inférieurs. Connectez le flacon contenant l’échantillon à l’appareil en vissant dessus le capuchon de sécurité GL 45 fourni. Chargez 200 microlitres d’éluant dans le réservoir d’éluant.

Ensuite, chargez 800 microlitres d’eau déminéralisée dans le réservoir de dilution. Vérifiez que le régulateur de pression est en position fermée en le tournant dans le sens inverse des aiguilles d’une montre jusqu’à ce qu’il ne soit plus possible de le déplacer. Après avoir allumé le prototype, entrez les valeurs 580 pour pset et 30 pour delta pset.

Pour régler le régulateur de pression, démarrez la pompe. Ensuite, tournez manuellement le régulateur de pression jusqu’à ce que la valeur lue pour preg soit inférieure mais proche de 320 millibars. Après avoir arrêté la pompe, démarrez la procédure SPE en appuyant sur start dans le coin du mode automatisé.

Une fois la procédure SPE terminée, fermez la petite bouteille d’échantillon et stockez-la à quatre à cinq degrés Celsius dans l’obscurité, jusqu’à l’analyse ELISA. Pour nettoyer le système, préparez une solution de 10 millilitres de méthanol à 70 % en volume dans une bouteille en verre avec un filetage GL 45. Débranchez la colonne SPE et branchez le tube avec des connecteurs.

En mode automatisé, sélectionnez le fichier de nettoyage et démarrez-le avec les mêmes paramètres de pression que ceux précédemment utilisés pour pset, delta pet et preg. La reproductibilité de l’emballage du sorbant a été évaluée par séchage et pesée du sorbant pipeté dans des viles de verre. La reproductibilité du temps d’injection a été testée pour les échantillons de 100 millilitres.

Les concentrations des échantillons enrichis initiaux et préconcentrés ont été déterminées à l’aide d’un kit ELISA commercial de 17 bêta-œstradiol. Il ressort clairement des courbes d’étalonnage que le rapport de méthanol de l’échantillon enrichi n’affecte pas la sensibilité de l’immunoessai. Des taux de récupération de 128, plus ou moins 22 %, et de 107 plus ou moins six pour cent, ont été calculés pour l’eau désionisée et l’eau de mer artificielle, respectivement.

Une fois maîtrisée, la préparation d’une colonne SPE peut se faire en moins de cinq minutes, si elle est bien réalisée. L’ensemble de la procédure SPE peut être réalisée en moins d’une heure. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine des sciences de l’environnement pour explorer le développement de méthodes d’immunodétection pour la surveillance des petits polluants organiques.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la préparation d’échantillons d’eau à l’aide de notre instrument automatisé rentable pour l’analyse des polluants par immunoessais. N’oubliez pas que travailler avec des polluants organiques et des solvants peut être dangereux, et que des précautions telles que le port de gants et de lunettes de protection appropriés doivent toujours être prises lors de l’exécution de ce processus.