Une méthode d'évaluation de l'efficacité des insecticides contre les punaises de lit, Cimex lectularius, Les œufs et les premiers stades
15 mars 2017
Les évaluations d'insecticides sont souvent ciblés contre les insectes adultes, plutôt que les stades immatures. Ici, nous présentons un protocole d'évaluation des insecticides contre lit les œufs de bugs avec une comparaison à la première étape de la punaise de lit nymphal. Ces protocoles pourraient être ajustés pour d'autres insectes pour évaluer l'efficacité des insecticides dans les stades de la vie non-adultes.
L’objectif général de cette expérience est d’évaluer l’efficacité des insecticides pour tuer les œufs et les premiers stades des punaises de lit. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l’entomologie, telles que les effets des tests toxicologiques sur les œufs de punaises de lit et les petites nymphes. Le principal avantage de cette technique est qu’elle est conçue pour traiter un stade de vie difficile des insectes avec des insecticides, en particulier le stade de l’œuf.
Pour commencer l’expérience, retirez cinq à dix punaises de lit femelles adultes accouplées et bien nourries d’une colonie et placez les femelles dans une boîte de Pétri avec du papier filtre. Préparez 10 répétitions pour vous assurer qu’il y aura suffisamment d’œufs pour le dosage de l’insecticide. Vérifiez les plats tous les jours pour voir si les femelles ont pondu des œufs.
Une fois que les femelles ont pondu des œufs, sortez-les de la boîte de Pétri et mettez-les dans de nouvelles boîtes de Pétri avec un nouveau papier filtre tous les jours. Enregistrez les données sur l’ancienne et la nouvelle boîte de Pétri. Laissez les œufs vieillir quatre à cinq jours avant de commencer le test.
Une fois que les œufs ont bien vieilli, retirez délicatement les œufs de punaises de lit des papiers filtres à l’aide d’une pince à pointe souple. Raclez doucement le fond de l’œuf fixé au papier filtre à l’aide de la pince, puis saisissez doucement l’œuf sans appliquer trop de pression pour éviter de jeter les œufs de punaises de lit. Placez les œufs de punaises de lit retirés dans leurs groupes respectifs à l’intérieur des boîtes de Pétri en plastique.
Frottez le fond de chaque boîte de Pétri à l’extérieur avec une feuille d’assouplissant pour limiter l’électricité statique provenant des œufs de punaises de lit. Ensuite, préparez des dilutions en série d’insecticides pour obtenir une gamme de cinq concentrations différentes et une solution témoin avec de l’eau du robinet seulement jusqu’à un volume de 20 mL. Prenez des tubes à centrifuger de 50 ml prédécoupés à la ligne de mL, puis coupez les mailles fines en carrés suffisamment grands pour s’adapter au bouchon.
Vissez fermement le treillis en éliminant toute bosse dans les tubes de centrifugation à l’aide du capuchon du tube de centrifugation. Ensuite, à l’aide d’un pinceau, placez un groupe d’œufs de punaises de lit sur le grillage à l’intérieur d’un tube de centrifugation. Trempez le groupe d’œufs de punaises de lit à l’intérieur du tube de centrifugation coupé dans une concentration d’insecticide pendant cinq secondes.
Retirez le tube à centrifuger de la solution insecticide. Placez le tube de centrifugation directement sur le tissu de laboratoire pour sécher le grillage avec les œufs à l’intérieur. Après séchage, retirez le groupe d’œufs du tube de centrifugation à l’aide d’un petit pinceau à poils fins et placez-les dans une boîte de Pétri propre avec un papier filtre propre.
Enregistrez la mortalité des œufs pendant 14 jours pour vous assurer que tous les œufs ont eu suffisamment de temps pour éclore. Corriger la mortalité dans le traitement témoin à l’aide de la formule d’Abbott. Insérer la mortalité enregistrée avec les concentrations correspondantes dans le logiciel d’analyse pour calculer les valeurs CL50.
Séparez un groupe de cinq punaises de lit mâles adultes et de cinq punaises de lit femelles adultes nourries la veille et placez-les dans une boîte de Pétri avec du papier filtre. Laissez les punaises de lit adultes s’accoupler et pondre des œufs pendant huit jours. Ensuite, retirez les adultes des boîtes de Pétri et laissez les œufs éclore dans les premiers stades dans les boîtes de Pétri
.Récupérez les premiers stades non nourris du même âge à l’aide d’un pinceau, puis placez-les dans de nouvelles boîtes de Pétri propres jusqu’à l’analyse de l’insecticide. Pipeter des aliquotes de 150 microlitres de chacune des cinq dilutions précédentes préparées d’insecticide et d’eau pour le groupe témoin sur des papiers filtres individuels. Répartissez uniformément l’insecticide en appliquant des gouttelettes sur tout le bord et le centre du papier filtre.
Placez les papiers filtres traités individuellement sur les panneaux durs individuels. Libérez des groupes de premiers stades sur les papiers filtres individuels pendant qu’ils sont encore mouillés d’insecticide et couvrez les premiers stades avec le fond d’une boîte de Pétri inversé et placez un poids sur la boîte de Pétri pour empêcher les punaises de lit du premier stade de s’échapper. Consigner la mortalité des punaises de lit du premier stade après 24 heures d’exposition à toutes les concentrations d’insecticide.
Corriger la mortalité dans le traitement témoin à l’aide de la formule d’Abbott. Insérer la mortalité et les concentrations enregistrées dans le logiciel d’analyse pour calculer les valeurs CL50. Le pourcentage de réponse ou de mortalité des œufs de punaises de lit de la souche Harlin à cinq concentrations différentes de métoclopride bêta-cyfluthrine augmentait à mesure que la dose augmentait.
La mortalité a atteint 100 % à la concentration la plus élevée testée. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez mieux comprendre comment évaluer l’efficacité des insecticides contre les œufs et les premiers stades des punaises de lit.
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Aperçu
Cette étude présente un protocole permettant d'évaluer l'efficacité des insecticides contre les œufs et les premiers stades larvaires des punaises de lit. La méthode vise à répondre aux difficultés liées à l'évaluation de l'efficacité des insecticides sur les stades larvaires non adultes, souvent négligés dans les évaluations traditionnelles.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Entomologie
- Efficacité des insecticides
- Stades de développement des insectes
Contexte
- Les évaluations d'insecticides se concentrent généralement sur les insectes adultes.
- Les stades immatures, tels que les œufs et les nymphes, sont cruciaux pour la lutte antiparasitaire.
- Comprendre les effets des insecticides sur ces stades peut améliorer les stratégies de gestion des ravageurs.
- Cette étude propose une méthode adaptée pour évaluer les insecticides sur les œufs de punaises de lit.
Objectif de l'étude
- Évaluer l'efficacité des insecticides sur les œufs et les premiers stades larvaires des punaises de lit.
- Développer un protocole pouvant être adapté à d'autres espèces d'insectes.
- Approfondir les connaissances en entomologie concernant les effets des insecticides sur les stades non adultes des insectes.
Méthodes utilisées
- Prélevez 5 à 10 femelles adultes de punaises de lit accouplées et bien nourries.
- Placez les femelles dans une boîte de Pétri contenant du papier filtre.
- Préparez 10 réplicats afin de garantir une production d'œufs suffisante.
- Surveillez quotidiennement les boîtes pour détecter la ponte d'œufs.
Résultats principaux
- Le protocole évalue avec succès l'efficacité des insecticides sur les œufs de punaises de lit.
- Les premiers stades larvaires ont également été évalués afin de comparer la sensibilité.
- Les résultats indiquent l'importance de cibler les stades immatures dans la lutte antiparasitaire.
- Cette méthode peut être adaptée à d'autres espèces d'insectes.
Conclusions
- L'évaluation des insecticides sur les stades non adultes est essentielle pour une gestion efficace des ravageurs.
- L'étude fournit un protocole précieux pour les recherches futures.
- Des études supplémentaires sont nécessaires pour explorer les implications pour d'autres ravageurs insectes.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle pour l'industrie
L'évaluation de l'efficacité des insecticides sur l'ensemble des stades de développement, y compris les œufs et les jeunes stades larvaires, est essentielle pour élaborer des stratégies complètes de lutte antiparasitaire dans les domaines de la bio-industrie pharmaceutique et de la santé publique. Cette méthode permet une évaluation quantitative de l'impact toxicologique sur les stades immatures de punaises de lit, contribuant ainsi à la validation des cibles et à la réduction des risques mécanistiques dans les programmes de contrôle des vecteurs. En générant des données concentration-réponse et des valeurs de CL50 pour les stades non adultes, cette approche améliore la fiabilité prédictive lors des phases précoces de découverte et de priorisation des portefeuilles de composés insecticides novateurs.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Découverte précoce et validation de cibles
- Valeur scientifique : Permet d'étudier les mécanismes insecticides à travers les stades de développement vulnérables, en précisant l'interaction avec la cible chez les œufs et les premiers stades larvaires.
- Valeur opérationnelle : Contribue à la réduction des risques biologiques en confirmant l'activité là où les tests traditionnels axés sur les adultes peuvent échouer.
- Valeur prédictive : Renforce la confiance dans la cible grâce à un profil d'efficacité spécifique à chaque stade, orientant les décisions de poursuite ou d'abandon lors de l'identification des candidats prometteurs.
Développement de criblages et de tests
- Valeur scientifique : Produit des courbes concentration-réponse standardisées et reproductibles pour quantifier la CL50 chez les œufs et les premiers stades larvaires de punaises de lit.
- Valeur opérationnelle : Permet une préparation évolutive et à haut débit de dilutions d'insecticides et de protocoles d'exposition utilisant des tests par immersion et par contact.
- Préparation des tests : Génère des données de mortalité quantitatives adaptées au criblage de composés et à l'analyse des relations structure-activité.
Recherche translationnelle et préclinique
- Valeur scientifique : Soutient la modélisation de systèmes pertinents pour les maladies en évaluant l'efficacité aux stades précoces du développement qui contribuent à la résilience des populations.
- Valeur opérationnelle : Garantit une continuité translationnelle, de la découverte à la validation préclinique, en tenant compte de la sensibilité sur l'ensemble du cycle de vie.
- Progression ajustée au risque : Éclaire les décisions précliniques de poursuite ou d'arrêt du développement en révélant des profils de résistance ou de tolérance spécifiques à chaque stade.
Intégration des pipelines et des flux de travail
La méthode s'intègre dans le continuum de découverte, depuis la validation précoce de la cible jusqu'à l'identification des composés candidats et l'évaluation préclinique, en particulier pour le contrôle des vecteurs et le développement d'insecticides en santé publique.
- Biologie de la découverte : Facilite la vérification d'hypothèses sur les mécanismes insecticides en permettant l'évaluation de l'efficacité sur les stades de développement non adultes, souvent ignorés dans les criblages standards.
- Criblage : Assure la préparation des tests grâce à des protocoles standardisés de trempage et de contact, produisant des données quantitatives reproductibles sur la mortalité.
- Analytique : Fournit des calculs de LC50 et des modélisations dose-réponse permettant la comparaison entre composés et le classement selon leur puissance.
- Recherche translationnelle : Relie les résultats préliminaires à la continuité préclinique en évaluant l'efficacité à tous les stades du cycle de vie de la punaise de lit, un facteur clé dans la gestion de la résistance.
- Réutilisation institutionnelle : Met en place une plateforme réutilisable pour évaluer de nouveaux composés insecticides contre les stades de développement difficiles à traiter, réduisant ainsi le développement redondant de tests.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive en révélant la sensibilité spécifique à chaque stade et en réduisant l'ambiguïté mécanistique de l'action des insecticides.
- Valeur opérationnelle : Fournit des protocoles normalisés et reproductibles pour les tests sur les œufs et les larves de premier stade, minimisant ainsi la variabilité entre laboratoires.
- Valeur stratégique : Améliore l'efficacité du capital en permettant l'élimination précoce des composés inefficaces contre les stades immatures, évitant ainsi les échecs en phase avancée.
- Impact sur le portefeuille : Favorise une priorisation ajustée au risque en identifiant les composés présentant une activité large sur l'ensemble du cycle de vie, améliorant ainsi les décisions d'avancement.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en manipulation entomologique, en élevage d'insectes et en micro-manipulation des œufs et des jeunes stades larvaires.
- Dépend d'une préparation précise des dilutions, d'un chronométrage exact de l'exposition et de contrôles environnementaux afin de garantir la validité du test.
- Implique une évaluation standardisée de la mortalité et une correction à l'aide de la formule d'Abbott pour une analyse ajustée au témoin.
- Suppose de prendre en compte des adaptations lors de l'application du protocole à d'autres espèces d'insectes présentant une morphologie des œufs ou un comportement des stades larvaires différents.
- Les limites pratiques incluent le caractère laborieux de la collecte, du vieillissement et de la manipulation individuelle des œufs, ce qui peut restreindre le débit en l'absence d'automatisation.
