Explorer le potentiel des cellules souches mésenchymateuses feuille sur le développement du carcinome hépatocellulaire In Vivo

Bonjour, je suis le Dr Alaa Alshareeda du Centre international de recherche médicale du roi Abdallah au Département des cellules souches et de la médecine régénérative. Aujourd’hui, nous allons démontrer l’effet des cellules souches mésenchymateuses sur le développement du carcinome hépatocellulaire sur un modèle de rat en utilisant la technologie des feuilles cellulaires. Bonjour, je suis Abdullah Almubarak.

Je travaille en chirurgie expérimentale et en laboratoire animalier à l’Université King Saoud. Nous utilisons le rat nu pour éviter tout rejet après la transplantation de la feuille cellulaire. Ce schéma montre la procédure de transplantation de feuilles cellulaires sur des rats nus.

Des rats nus âgés de huit à 12 semaines seront utilisés dans cette étude. Tout d’abord, entaillez les rats et faites une coupe de sept à dix centimètres entre la peau et les muscles sous-jacents à l’aide d’un scalpel afin d’exposer le foie. Pour transférer la feuille de cellule, utilisez une membrane stérile.

Placez la membrane sur la feuille de cellule pour la recueillir. Ensuite, placez la feuille cellulaire avec la membrane sur un lobe du foie. Construction en feuille de cellule.

Avant d’ensemencer les cellules, enduire des boîtes de culture UpCell sensibles à la température de 3,5 centimètres de FBS non dilué. Le revêtement des boîtes avec du FBS favorise la croissance des cellules dans la couche membranaire et empêche la dégradation des cellules. Assurez-vous de couvrir toute la surface de la vaisselle.

Incuber les plats pendant 24 heures à 37 degrés Celsius dans une atmosphère humidifiée contenant 5 % de dioxyde de carbone et 95 % d’air. Le lendemain, retirez l’excédent de FBS et laissez la vaisselle sécher à température ambiante pendant au moins une heure. Ensemencer au moins un million de cellules cancéreuses de l’hépatite G2 seules ou en co-culture avec des cellules souches mésenchymateuses dans un milieu de culture DMEM.

Le milieu a été complété par 10 % de FBS et 1 % de pénicilline-streptomycine. Le rapport utilisé entre les cellules cancéreuses et les cellules souches mésenchymateuses dans cette étude est de 4:1. Après avoir ajouté les cellules, secouez doucement les plats.

Incuber les cellules à 37 degrés Celsius dans une atmosphère humidifiée contenant 5 % de dioxyde de carbone et 95 % d’air. Détachement de la feuille de cellule. À 100 % de la confluence cellulaire, sortez les plats de l’incubateur à 37 degrés Celsius.

Maintenant, incubez la feuille de cellules cancéreuses de l’HepG2 pendant une heure à température ambiante, tandis que l’incubation de l’HepG2 co-cultivée avec des cellules souches mésenchymateuses pendant 30 à 40 minutes à 20 degrés Celsius dans une atmosphère humidifiée contenant 5 % de dioxyde de carbone pour 95 % d’air. Pendant le temps d’incubation pour le détachement de la feuille cellulaire, commencez la procédure animale. Toutes les études sur les animaux ont été approuvées par le comité d’éthique de l’Université du Roi Saoud.

Réalisation de l’intervention chirurgicale. Vérifiez la profondeur de l’anesthésie en testant le réflexe de retrait de la pédale. Désinfectez la zone chirurgicale avec de l’iode.

Maintenant, appliquez un deuxième gommage à l’iode. Couvrez l’animal avec un champ stérilisé pour éviter la contamination de l’incision. À l’aide d’un scalpel stérilisé, faites une incision entre la peau et les muscles sous-jacents, d’une taille d’environ sept à dix centimètres, pour exposer le foie.

Séparez le muscle abdominal de la peau avec le bord arrière plat du scalpel. Poignardez soigneusement la linea alba à l’aide d’un scalpel et étendez la coupe avec des ciseaux bien aiguisés. Greffe de feuille cellulaire sur le foie de rat.

Tapotez doucement la boîte de culture sur le banc pour détacher la feuille de sa surface. Séparez la feuille de cellule de la surface du plat en raclant les bords de la feuille en demi-cercle. Maintenant, retirez délicatement tout le milieu de culture du plat.

Assurez-vous que la feuille est intacte sans aucun dommage, sinon elle ne peut pas être utilisée. Préparez une membrane stérile pour récolter et transférer la feuille cellulaire. Donc, tout d’abord, trempez la membrane avec une solution saline normale, puis retirez l’excès de solution saline avec un coton-tige stérile.

Placez la membrane humide sur la feuille cellulaire, tout en évitant les bulles d’air entre la membrane et la feuille cellulaire. Ajoutez quelques gouttes de solution saline normale sur la membrane et la feuille cellulaire pour recueillir le matériau. Laissez la membrane pendant quelques secondes pour vous assurer que la feuille de cellule est correctement fixée sur la membrane, puis récupérez-la.

Maintenant, préparez le foie pour la transplantation. Assurez-vous que la surface du foie est sèche. Placez la membrane avec la feuille cellulaire sur un seul lobe du foie du rat.

Ajoutez quelques gouttes de solution saline stérilisée pour détacher la feuille cellulaire de la membrane. Attendez cinq minutes avant de retirer soigneusement la membrane. La feuille cellulaire peut être vue attachée sur le foie dans cette vidéo.

Enfin, fermez les muscles sous-jacents et les incisions cutanées avec cinq points de suture en nylon. Après avoir fermé l’incision, désinfectez la zone chirurgicale avec de la bétadine. Le temps entre l’anesthésie et la tête haute est variable, mais se situe généralement entre cinq et 20 minutes.

Cette figure montre la tumeur développée sur le foie du rat après un mois de greffe de feuille cellulaire HepG2. Ici, la tumeur a été développée après la transplantation de cellules cancéreuses HepG2 fabriquées par feuille de cellules et de cellules souches mésenchymateuses de la moelle osseuse. Alors que celle-ci montre, la plus petite tumeur développée sur le foie de rat après la transplantation d’une feuille cellulaire fabriquée à partir de cellules cancéreuses HepG2 et de cellules souches mésenchymateuses de la corde obilicale, Cette figure montre la coloration H et E du foie de rat après un mois de transplantation de feuille cellulaire.

Où A représente les cellules hépatiques normales du rat et B montre les cellules hépatiques cancéreuses du rat. Conclusion. Donc, après avoir regardé cette vidéo, vous devriez être en mesure de développer un modèle de carcinome hépatocellulaire sur un rat nu en utilisant la technologie des feuilles cellulaires. Merci d’avoir regardé.