Évaluation d’un analyseur de test au point de service pour la mesure des leucocytes du sang périphérique
22 mars 2022
Un protocole pour mesurer les leucocytes du sang périphérique à l’aide d’un analyseur de leucocytes basé sur une carte POCT est présenté ici. Les mêmes échantillons de sang ont été analysés par deux analyseurs d’hématologie automatisés pour évaluer la cohérence et l’exactitude des résultats. Les résultats ont montré que l’analyseur évalué avait une bonne corrélation avec le système de référence.
Une description détaillée du fonctionnement normalisé de l’analyseur dans le protocole peut aider une personne qui n’a jamais utilisé l’analyseur à compléter les expériences les plus importantes, précises et avec des résultats fiables. L’utilisation de la technologie innovante de Jove présente des avantages tels que la disponibilité d’un kit de détection d’une seule personne, l’absence de déchets liquides, la rapidité, la gratuité de la maintenance de routine et un fonctionnement convivial. Il faut d’abord comprendre le principe de détection de l’analyseur, puis se familiariser avec plusieurs étapes critiques du protocole telles que la collecte de sang, le levage de réactifs, etc.
Pour commencer, démarrez l’analyseur en éteignant ou en appuyant l’interrupteur à l’arrière de l’analyseur et assurez-vous que le voyant lumineux de l’analyseur est allumé. Entrez le nom d’utilisateur et le mot de passe dans la boîte de dialogue de connexion et cliquez sur connexion. Le système doit effectuer une auto-vérification et démarrer l’initialisation automatiquement et afficher la page d’analyse de l’échantillon.
Commencez la préparation du test en cliquant sur l’échantillon suivant, puis entrez correctement le sexe, le nom et d’autres informations cliniques et sélectionnez le groupe de référence approprié. Plus tard, cliquez sur OK pour enregistrer les informations. Déchirez le film mince du module de détection de cellules sanguines, appuyez sur le bouton d’entrée de sortie de l’entrepôt et placez correctement le module de détection de cellules sanguines dans l’entrepôt de machines, avec son orifice tourné vers l’extérieur.
Perforez le film de plafond réactif hémolytique avec la pointe d’une pipette quantitative. Pour la collecte de sang capillaire, désinfectez l’annulaire gauche une fois avec un coton-tige trempé dans de l’alcool dans un sens. Une fois que l’alcool s’est naturellement desséché, utilisez une lancette de sang pour percer la peau de l’annulaire gauche.
Pressez doucement la première goutte de sang et essuyez-la avec un coton-tige. Pressez suffisamment de sang pour former une goutte d’eau complète et prélevez cinq microlitres de l’échantillon de sang à l’aide du tube capillaire à l’intérieur de la pipette quantitative. Pour le mélange de réactif, insérez la pipette quantitative dans le réactif hémolytique et appuyez fermement dessus pour libérer l’échantillon de sang du tube capillaire.
Mélanger le sang dans le tube capillaire et le réactif hémolytique en le retournant 15 à 20 fois à une vitesse constante jusqu’à ce qu’il ne reste plus de sang rouge dans le tube capillaire. Commencez l’analyse de l’échantillon en ouvrant le couvercle et en pressant la solution dans le module de détection des cellules sanguines. Ensuite, appuyez sur le bouton d’entrée sortie de l’entrepôt.
Une fois que le module de détection des cellules sanguines est entré dans l’entrepôt, appuyez sur le bouton de comptage. Sur l’interface de l’analyseur, cliquez deux fois sur le bouton OK pour confirmer que le module de détection des cellules sanguines a été retiré. Sur l’interface de l’analyseur, cliquez sur le bouton d’impression pour imprimer les résultats du test.
Pour éteindre l’analyseur, cliquez sur le bouton d’arrêt de l’interface de l’analyseur et sélectionnez oui dans la boîte de dialogue qui apparaît sur l’interface. Vérifiez que le système commence à exécuter la séquence d’arrêt. Réglez l’interrupteur d’arrêt ou d’entrée à l’arrière du mainframe sur une fois la séquence d’arrêt terminée.
La figure montre le nuage de points et l’analyse de corrélation de Spearman des systèmes évalués et de référence. Le nombre de globules blancs et le nombre de granulocytes présentent la corrélation la plus forte. Alors que le nombre de lymphocytes présente la corrélation la plus faible entre les systèmes évalués et de référence.
Un diagramme de Bland-Altman a été obtenu pour visualiser l’analyse de cohérence. Les résultats des globules blancs détectés par le système évalué concordent avec le système de référence. Les valeurs moyennes des différences dans les indices leucocytaires sont supérieures à zéro, ce qui indique que les résultats des tests du système évalué sont légèrement supérieurs à ceux du système de référence.
Au cours de l’expérience, nous devrions faire de notre mieux pour nous assurer que le sang que nous avons recueilli est exactement de 5 microlitres et que le côté dans la pièce est complètement dissous par le réactif hémolytique.
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Aperçu
Cet article présente un protocole de mesure des leucocytes du sang périphérique à l'aide d'un analyseur de leucocytes basé sur une carte de diagnostic de proximité (POCT). La précision et la reproductibilité de cet analyseur ont été évaluées par rapport à deux analyseurs hématologiques automatisés.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Hématologie
- Diagnostic clinique
- Tests au point d'intervention
Contexte
- L'analyse des leucocytes est essentielle pour diagnostiquer diverses affections médicales.
- Les analyseurs automatisés fournissent des résultats rapides et précis.
- Les dispositifs de test au point d’intervention améliorent l’accessibilité et la commodité des analyses.
- Comprendre le fonctionnement de ces dispositifs est essentiel pour obtenir des résultats fiables.
Objectif de l'étude
- Évaluer les performances d'un nouvel analyseur de leucocytes.
- Comparer les résultats avec ceux d'analyseurs automatisés d'hématologie établis.
- Fournir un protocole détaillé pour utiliser efficacement l'analyseur.
Méthodes utilisées
- Fonctionnement normalisé de l'analyseur de leucocytes.
- Prélèvement et préparation de l'échantillon sanguin.
- Analyse des échantillons sur le nouvel analyseur et sur les analyseurs de référence.
- Analyse statistique pour évaluer la corrélation et la précision.
Résultats principaux
- Le nouvel analyseur a démontré une bonne corrélation avec les systèmes de référence.
- Les résultats étaient cohérents entre différentes méthodes d'essai.
- L'efficacité opérationnelle a été soulignée comme un avantage clé.
- Des fonctionnalités conviviales ont facilité l'utilisation.
Conclusions
- L'analyseur de leucocytes en POCT est un outil fiable pour l'analyse sanguine.
- Il offre des avantages significatifs en termes de rapidité et de facilité d'utilisation.
- Une validation supplémentaire en milieu clinique est recommandée.
Questions fréquemment posées
Pertinence industrielle pour les cadres
Les analyseurs de leucocytes en soins de première ligne comblent des lacunes critiques dans le diagnostic des soins de santé primaires en fournissant une différenciation rapide et précise des globules blancs, sans nécessiter d'infrastructure de laboratoire centralisée. Cette capacité permet une triage précoce des infections et une utilisation responsable des antimicrobiens dans les contextes à ressources limitées, influant directement sur les protocoles de validation préclinique des biomarqueurs, où les modifications hématologiques corrélées informent sur la pertinence des modèles de maladie. La corrélation démontrée avec les analyseurs hématologiques de référence établit une confiance prédictive pour les applications translationnelles dans les modèles de maladies inflammatoires.
Applications stratégiques en recherche et développement biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Valeur scientifique : Permet l'analyse des voies inflammatoires médiées par les leucocytes dans les modèles de maladie grâce à des variations quantifiables des populations de neutrophiles, de lymphocytes et de cellules intermédiaires.
- Valeur opérationnelle : Fournit des résultats hématologiques reproductibles pour les études de validation ciblée dans lesquelles l'infiltration de cellules immunitaires constitue un biomarqueur pharmacodynamique.
Développement de tests et criblage
- Valeur scientifique : Génère des données normalisées de formule leucocytaire essentielles pour le criblage de préparation aux tests de composés immunomodulateurs dans des systèmes de sang total.
- Valeur opérationnelle : Élimine les déchets liquides et les préparations d'échantillons complexes, permettant une compatibilité avec le criblage à haut débit avec un minimum de compétences techniques.
Recherche translationnelle et préclinique
- Valeur scientifique : Soutient la validation de systèmes pertinents pour les maladies en corrélant la dynamique des leucocytes périphériques avec des paramètres inflammatoires spécifiques aux tissus dans les modèles précliniques.
- Valeur opérationnelle : Facilite la surveillance longitudinale dans les études précliniques grâce à des besoins minimes en volume sanguin (prélèvement capillaire de 5 µL) et à une génération rapide des résultats.
Intégration des pipelines et des flux de travail
L'analyseur fonctionne comme un outil assurant la continuité entre la découverte et le développement préclinique, en positionnant le profilage des leucocytes entre les phases initiales de test de l'hypothèse ciblée et celle d'optimisation du composé candidat, où la modulation immunitaire représente un mécanisme d'action clé.
- Découverte biologique : Soutient la dé-risquisation mécanistique en quantifiant les réponses des cellules immunitaires aux modulateurs de voies, réduisant ainsi les faux positifs dans les cascades de validation ciblée.
- Écrantage : Fournit des résultats quantitatifs et corrélés concernant les leucocytes (GB, granulocytes, lymphocytes) permettant la comparaison des effets des composés entre différents groupes de traitement.
- Analytique : Offre des mesures validées par corrélation de Spearman (rs = 0,972 pour GB/granulocytes, rs = 0,851 pour les lymphocytes), garantissant une comparabilité fiable entre systèmes pour une prise de décision fondée sur les données.
- Recherche translationnelle : Relie le profilage des leucocytes en phase de découverte à la continuité préclinique grâce à une cohérence confirmée par la méthode de Bland-Altman avec des systèmes d’hématologie de référence.
- Réutilisation institutionnelle : Constitue une capacité déployable dans plusieurs domaines thérapeutiques nécessitant une surveillance immunitaire, réduisant les efforts de validation redondants.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Confiance prédictive dans le mécanisme d'action médié par les leucocytes, réduction de l'ambiguïté mécanistique dans le criblage des immunomodulateurs.
- Valeur opérationnelle : Standardisation grâce à un fonctionnement sans maintenance, reproductibilité via des limites d'accord à 95 %, et évolutivité par des kits de détection utilisables par une seule personne.
- Valeur stratégique : Meilleures décisions d'aller ou de ne pas aller de l'avant dans les programmes d'immunomodulation, efficacité du capital en évitant la dépendance aux laboratoires centraux, et réduction du risque biologique en phase avancée grâce à un profilage immunitaire précoce.
- Impact sur le portefeuille : Priorisation ajustée au risque des composés selon leurs profils de réponse leucocytaire, permettant des décisions d'avancement fondées sur des biomarqueurs hématologiques transposables.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite des connaissances de base en hématologie pour l'interprétation précise des formules leucocytaires (neutrophiles, lymphocytes, cellules intermédiaires).
- Exige une formation à la collecte de sang capillaire et une maîtrise du pipetage quantitatif afin d'obtenir un volume d'échantillon précis de 5 µL.
- Implique une standardisation commune entre les équipes concernant le choix du groupe de référence (normes ajustées selon l'âge et le sexe) pour un suivi longitudinal cohérent.
- Requiert une validation d'adaptation lors de l'extension de la méthode au-delà du sang total humain à des modèles précliniques (par exemple, murins, primates non humains).
- Limite pratique : la corrélation plus faible pour les lymphocytes (rs = 0,851) impose une validation parallèle dans le cas des immunothérapies ciblant spécifiquement les lymphocytes.
