Visualisation peropératoire de l’injection sous-rétinienne et du décollement de la rétine chez le rat
7 mars 2025
Cet article décrit les méthodes d’injection sous-rétinienne chez le rat, en utilisant la visualisation peropératoire pour contrôler à la fois le site d’injection et la zone de décollement de la rétine.
J’explore les mécanismes de mort cellulaire dans les décollements de rétine, et mon objectif est d’assurer la traçabilité des données in vitro jusqu’aux expériences in vivo. Dans notre équipe, nous avons démontré l’implication de différents mécanismes de mort cellulaire lors de la dégénérescence des photorécepteurs. Il existe de nombreuses façons qui ont été décrites pour induire le décollement de la rétine chez les rongeurs.
Ce protocole a été conçu pour répondre à deux enjeux, la reproductibilité et la sécurité. Fournir un protocole reproductible et sûr dans le décollement de la rétine garantira l’efficacité dans ce type de recherche. Pour commencer, montez une pointe métallique de canule métallique de calibre 30 de 10 millimètres non biseautée cimentée sur une seringue de 25 microlitres sur un micro-injecteur.
Pour induire un décollement de la rétine à long terme, utilisez de l’hydroxypropylméthylcellulose à 2 % ou de l’hyaluronate de sodium à 1 à 5 %. Chargez la solution préparée dans la seringue. Ensuite, appliquez une goutte de tropicamide à 0,5 % sur un œil d’un rat anesthésié pour obtenir une mydriase.
Appliquez une goutte d’oxybuprocaïne dans l’œil à opérer. Utilisez un microscope ophtalmique connecté à une pédale pour effectuer l’opération. Pour exposer la sclère, ancrez deux sutures de traction des paupières au quart externe du bord palpébral au niveau des paupières supérieures et inférieures.
Tirez sur les sutures pour obtenir un renflement doux de l’œil. À l’aide d’une aiguille de calibre 30, créez un canal scléral à travers la conjonctive bulbaire temporale à environ un à deux millimètres du limbe cornéen. Appliquez du gel lacrymal comme interface œil-lentille tout au long de la procédure.
Pour visualiser la plaque rétinienne, placez une lentille de contact plate de huit millimètres de diamètre à la surface de l’œil. Utilisez la pédale du microscope pour faire la mise au point sur le plan rétinien. Maintenant, insérez la canule verticalement à travers le canal scléral préformé.
Approchez-vous lentement de la rétine et appuyez doucement dessus jusqu’à ce qu’un blanchiment rétinien soit observé. Maintenez la stabilité de l’embout pendant l’injection à travers la rétinotomie formée par le flux d’injection Après l’injection, retirez l’embout de la rétinotomie. Ensuite, retirez doucement toute la canule de la cavité vitrée, en veillant à ce que le cristallin ne soit pas touché.
Assurez-vous que le réflexe rouge pupillaire est altéré par le décollement de la rétine sans observer le flux sanguin dans la cavité vitréenne. Retirez les sutures des paupières, puis écouvillonnez soigneusement tout saignement. Évaluez brièvement la pression intraoculaire manuellement.
Pour les soins postopératoires, appliquez la pommade oculaire au chloramphénicol et au rétinol sur l’œil opéré. Ensuite, administrez un millilitre de glucose monohydrate à 5 % par voie intrapéritonéale. Injecter 0,9 milligramme par kilogramme d’atipamézole par voie sous-cutanée.
Enfin, transférez l’animal dans une chambre à température contrôlée et surveillez-le jusqu’à ce qu’il se réveille. L’efficacité de l’injection sous-rétinienne a été vérifiée par le liquide sous-rétinien clair en tomographie par cohérence optique, et l’absence d’hémorragie sous-rétinienne en photographie du fond d’œil. Et un décollement distinct de la rétine a été observé dans les deux modalités.
Des hémorragies intravitréennes mineures ont été observées à l’occasion, principalement près du site d’injection, mais ne se sont pas étendues à l’espace sous-rétinien.
Aperçu
Cet article décrit des méthodes d'injection sous-rétinienne chez le rat, utilisant une visualisation peropératoire pour contrôler à la fois le site d'injection et la zone de détachement rétinien. Le protocole vise à améliorer la reproductibilité et la sécurité dans la recherche sur le détachement de la rétine.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Recherche sur la rétine
- Protocoles expérimentaux
Contexte
- Comprendre les mécanismes de mort cellulaire dans les détachements de la rétine.
- Importance de la traçabilité des données in vitro vers les données in vivo.
- Difficultés à assurer la reproductibilité et la sécurité dans les procédures expérimentales.
- Diverses méthodes pour induire un détachement de la rétine chez les rongeurs.
Objectif de l'étude
- Proposer un protocole reproductible et sûr de détachement rétinien.
- Faciliter des recherches efficaces sur la dégénérescence rétinienne.
- Garantir des techniques chirurgicales précises pour les injections sous-rétiennes.
Méthodes utilisées
- Monter une canule non biseautée sur un micro-injecteur.
- Utiliser de l'hydroxypropylméthylcellulose ou de l'hyaluronate de sodium pour la détachement rétinien.
- Réaliser la chirurgie sous un microscope ophtalmique.
- Injecter par un canal scléral préformé et évaluer les résultats par tomographie en cohérence optique.
Résultats principaux
- Injection sous-rétinienne réussie, vérifiée par la présence d'un liquide sous-rétinien clair.
- Absence d'hémorragie sous-rétinienne observée lors de la photographie du fond d'œil.
- Détachement rétinien net confirmé par les modalités d'imagerie.
- De petites hémorragies intravitréennes notées, sans extension dans l'espace sous-rétinien.
Conclusions
- Le protocole améliore la sécurité et la reproductibilité des études sur le détachement de la rétine.
- La confirmation visuelle des injections réussies est essentielle à la validité de la recherche.
- Les soins postopératoires sont indispensables au bien-être et à la récupération des animaux.
Questions fréquemment posées
Pertinence industrielle pour les cadres
La visualisation peropératoire de l'injection sous-rétinienne et du détachement rétinien chez le rat répond à un besoin critique en matière de délivrance reproductible et contrôlée de thérapeutiques, ainsi qu'en modélisation de maladies dans le cadre de la découverte de médicaments ophtalmologiques. Ce protocole permet une manipulation et une surveillance précises du détachement rétinien, soutenant ainsi la continuité translationnelle entre les modèles précliniques et les procédés pertinents pour l'humain. Une reproductibilité et une sécurité améliorées ont un impact direct sur la fiabilité prédictive des programmes thérapeutiques précoces ciblant la rétine.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Permet une induction contrôlée du décollement de la rétine pour des études mécanistiques de la dégénérescence des photorécepteurs.
- Permet la validation fonctionnelle de cibles thérapeutiques dans l’espace sous-rétinien.
- Facilite la modélisation reproductible de maladies pour des recherches fondées sur des hypothèses.
Développement de tests et criblage
- Fournit un système in vivo validé pour évaluer la distribution sous-rétinienne de composés candidats.
- Permet une évaluation quantitative du succès de l'injection par des modalités d'imagerie.
- Standardise la procédure afin d'obtenir des résultats d'analyse cohérents d'une étude à l'autre.
Recherche translationnelle et préclinique
- Aligne les modèles précliniques de détachement de la rétine avec les procédures cliniques afin d'assurer une pertinence translationnelle.
- Permet l'évaluation de l'efficacité thérapeutique et de la sécurité dans un cadre contrôlé et reproductible.
- Facilite le développement de thérapies rétiniennes ajusté aux risques, sur la base de données solides obtenues in vivo.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Cette méthode s'intègre dans la continuité découverte-préclinique pour la recherche sur les maladies de la rétine, en reliant les résultats in vitro à la validation in vivo et en soutenant l'identification et l'optimisation des candidats thérapeutiques.
- Biologie de la découverte : Permet la vérification d'hypothèses sur les mécanismes de mort cellulaire et l'engagement des cibles dans le tissu rétinien.
- Criblage : Fournit des lectures reproductibles et quantifiables pour l'évaluation de composés dans un modèle pertinent pour la maladie.
- Analytique : Utilise la photographie du fond d'œil et la tomographie en cohérence optique pour mesurer objectivement les résultats des injections et des détachements.
- Recherche translationnelle : Assure une continuité entre les modèles rongeurs et les procédures chirurgicales humaines pour la délivrance sous-rétinienne.
- Réutilisation en entreprise : Établit un protocole standardisé adaptable à divers programmes de recherche rétinienne et modalités thérapeutiques.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive et réduit l'ambiguïté mécanistique dans la validation des cibles rétiniennes.
- Valeur opérationnelle : Améliore la reproductibilité, la sécurité et la standardisation des procédures rétiniennes in vivo.
- Valeur stratégique : Renforce la qualité de la prise de décision « aller/ne pas aller » et l'efficacité du capital dans les portefeuilles de recherche et développement ophtalmologiques.
- Impact sur le portefeuille : Permet une priorisation et une avancée ajustées au risque des candidats thérapeutiques rétiniens.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en microchirurgie ophtalmique et en anesthésie des rongeurs.
- Exige un accès à des microscopes ophtalmiques, des microinjecteurs et des plateformes d'imagerie.
- Implique une standardisation interéquipes pour assurer la reproductibilité et la comparabilité des données.
- Peut être adapté à diverses durées de détachement rétinien et viscosités de solutions selon les objectifs de recherche spécifiques.
- Les limites potentielles incluent le risque de dommages au cristallin, d'hémorragie ou d'échec du détachement, nécessitant un strict respect de la procédure.
