Techniques efficaces pour l’échantillonnage complet des tissus accessibles chez le xénope adulte

Ce travail vise à créer une méthode reproductible pour collecter rapidement le ventricule cardiaque du xénope, le tronc artériel, le lobe hépatique gauche, la vésicule biliaire, le poumon, le pancréas, la rate, le larynx, l’œsophage, l’estomac, les intestins, les testicules, le corps adipeux, l’oviducte, les reins appariés, le plexus sciatique, la peau, le thymus et l’œil entier en moins d’une heure. L’optimisation de la fraîcheur des tissus constitue un défi expérimental. Pour cette raison, le protocole a été conçu pour être complété en moins d’une heure. En privilégiant la fraîcheur des tissus, ces derniers peuvent être utilisés pour effectuer des analyses biochimiques de haute qualité telles que la protéomique, tout en minimisant le nombre d’animaux utilisés. À l’avenir, nous rédigerons un protocole sur les tissus plus difficiles d’accès, tels que le cerveau, les muscles et les os.

[Instructeur] Pour commencer, positionnez la grenouille euthanasiée pour la procédure de dissection et épinglez les membres. À l’aide de ciseaux de dissection, coupez la peau le long de la ligne médiane, puis latéralement pour créer deux lambeaux de peau. À l’aide d’une pince, saisissez la linea alba et retirez-la de la cavité cœlomique. Coupez soigneusement la musculature vers la tête et créez deux rabats de la paroi de la cavité. Réduire les os coracoïdes pour mieux accéder au cœur. Étirez le péricarde, perforez-le et retirez-le pour exposer les trois cavités cardiaques. Coupez maintenant les oracles à la jonction où ils rencontrent le ventricule et le tronc artériel. À l’aide d’une pince, saisissez l’apex du ventricule et coupez-le juste en dessous de sa jonction avec le tronc artériel, en laissant une marge. En observant la bifurcation du tronc artériel, tirez le tronc tendu et coupez les troncs aortiques juste après les points où ils se divisent en arcs. Ensuite, saisissez la lèvre du lobe gauche du foie et soulevez-la doucement pour exposer les canaux hépatiques et kystiques. Prélevez un échantillon des deux tiers inférieurs du lobe gauche sous ces attaches. Après avoir identifié la vésicule biliaire, saisissez-la et éloignez-la du lobe hépatique droit et sectionnez son attache. Saisissez ensuite l’apex du poumon et tirez-le vers le tendre. Coupez le poumon à la limite où il passe à la bronche. Retirez la bronche du larynx. Pour l’ablation des ovaires, déplacez les lobes ovariens sur leurs côtés respectifs pour visualiser les sites d’attache ventrals aux reins. À l’aide de ciseaux, retirez les ovaires près des reins sans causer de dommages. Ensuite, inspectez le lobe antérieur du foie, également connu sous le nom de lobe médian, et observez sa connexion au duodénum à travers le mésentaire. Utilisez des ciseaux d’iridectomie pour sectionner le ligament mésentaire et le ligament hépatoduodénal. La masse charnue restante est le pancréas et le canal cholédoque. Sectionnez la connexion du pancréas et du canal cholédoque du lobe antérieur du foie, en laissant une marge. Saisissez l’estomac avec une pince dentée et une extrémité du pancréas avec une pince à tissus. Sous grossissement, éloignez doucement le pancréas de l’estomac. Ensuite, identifiez la rate et prélevez-la en coupant son attache au péritoine. Saisissez le larynx par son extrémité inférieure et commencez à le soulever de la cavité, en coupant toutes les attaches péritonéales au fur et à mesure qu’elles sont rencontrées. Comme le larynx est surélevé, utilisez des ciseaux d’iridectomie incurvés pour séparer et couper soigneusement le tissu œsophagien du larynx. Ensuite, tirez le larynx vers le bas et coupez-le de la cavité buccale tout en sectionnant les attaches visibles restantes. Observez la courbure de l’estomac, qui le distingue de l’œsophage et la restriction pylorique marquant le début de l’intestin. Coupez le tube digestif juste en avant de la courbure de l’estomac pour le séparer de l’œsophage. Ouvrez la bouche et localisez l’ouverture partagée des trompes d’Eustache sur son toit. Tout en gardant la bouche ouverte, tirez sur l’œsophage pour observer son attachement. Ensuite, coupez l’œsophage de la cavité buccale juste en dessous de l’ouverture eustache. Retirez ensuite l’œsophage. Maintenant, saisissez l’estomac et coupez-le au niveau de la restriction pylorique où il se connecte au duodénum. Tirez le côlon tendu et coupez-le aussi près que possible du cloaque. Retirez les intestins, en coupant toutes les attaches péritonéales visibles en cours de route. Si la grenouille est un mâle, identifiez les testicules et retirez-en un à l’aide de ciseaux d’iridectomie, en vous assurant que le rein reste intact. Séparez les corps adipeux et positionnez-les sur leurs côtés respectifs pour exposer l’attache péritonéale près du rein. Saisissez la base d’un corps gras et coupez-le du péritoine, en laissant une marge. Pour enlever la vessie, coupez le plus près possible du cloaque. Si la grenouille est une femelle ou a un oviducte vestigial visible, saisissez l’extrémité inférieure de l’oviducte et éloignez-la du cloaque. Coupez l’oviducte près du cloaque, puis retirez-le de la cavité cœlomique, en sectionnant toutes les attaches péritonéales. À l’aide d’une pince, saisissez les reins rétropéritonéaux appariés et sectionnez le péritoine à leur base. Soulevez les reins hors de la cavité, en sectionnant toutes les attaches péritonéales. Ensuite, saisissez le faisceau nerveux au niveau du plexus sciatique avec une pince et coupez les nerfs à l’endroit où ils sortent de la cavité cœlomique. Soulevez le faisceau nerveux et coupez-le à nouveau au niveau de sa connexion à la colonne vertébrale. Retirez maintenant les goupilles et retournez l’animal sur sa face ventrale. Épinglez à nouveau les membres et sélectionnez un membre postérieur pour l’échantillonnage, en épinglant son pied. Exciser une section de peau en forme d’amande au-dessus de la région gastrocnémien et tibio-fibulaire. Saisissez la peau dorsale et faites une incision latérale autour de la section médiane de l’animal. Pour créer une coupe circulaire continue. Retirez les goupilles, fixez les jambes d’une main et utilisez des pinces à dents de rat pour saisir la peau dorsale antérieure. Écorchez l’animal en tirant avec force la peau dorsale sur la tête et les bras. Pour prélever un échantillon de thymus, identifiez la masse graisseuse recouvrant l’articulation de la mâchoire et coupez le bord postérieur de la masse où elle fusionne avec le tissu musculaire rose. Utilisez des ciseaux d’iridectomie pour couper la masse de l’os, révélant des amas de mélanophores, le cas échéant. Ensuite, coupez le tissu pour éliminer tout muscle ou cartilage. Ensuite, épinglez l’animal et sélectionnez un œil. Insérez des ciseaux d’iridectomie incurvés dans l’orbite et coupez doucement autour de la courbure de l’œil pour libérer les attaches musculaires. Enfin, glissez les ciseaux plus profondément dans l’orbite et coupez le nerf optique derrière l’œil. Délogez l’œil de son orbite et coupez tout muscle restant. En suivant cette procédure, tous les organes principaux ont été extraits, rincés et coupés dans l’heure qui a suivi l’euthanasie.