מאמר שיטה

סינתזה ירוקה של ננו-חלקיקי מגנזיום מצמחי סוואנה ניאוטרופיים מקומיים לנוסחאות ננו-פיטוקוסמטיות ניתנות להרחבה

DOI:

10.3791/70521

⸱

29 במאי 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1S-Inova Biotech, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Universidade Católica Dom Bosco, 2Centro de Análises Proteômicas e Bioquímicas, Programa de Pós-graduação em Ciências Genômicas e Biotecnologia, Universidade Católica de Brasília

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו מתארת פרוטוקול לסינתזה ירוקה של ננו-חלקיקי מגנזיום באמצעות תמצית הצמח Stryphnodendron adstringens , מין מהסוואנה הניאוטרופית המקומית, ולאחר מכן שילובם והערכתם בנוסחת סרום קוסמטית.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה מתאר פרוטוקול לסינתזה ירוקה של ננו-חלקיקים מבוססי מגנזיום באמצעות תמציות אתנול של Stryphnodendron adstringens, מין צמח יליד הסוואנה הניאוטרופית, ושילובם בנוסחאות ננו-פיטוקוסמטיות. ההליך כולל איסוף והכנת חומר מהצומח, ואחריו הפקת אתנול, שבה פיטוכימיקלים פועלים כסוכני חיזור ומייצבים ליוני מגנזיום. ננו-חלקיקים מסונתזים בתנאים מבוקרים באמצעות מגנזיום כלוריד ותמציות צמחים, מה שמאפשר תהליך ידידותי לסביבה ללא חומרים מפחיתים רעילים. תכונות ננו-חלקיקים מאופיינות באמצעות פיזור אור דינמי ומיקרוסקופ כוח אטומי להערכת התפלגות הגודל, המורפולוגיה וההתנהגות הקולואידית. הפרוטוקול מתאר עוד את שילוב הננו-חלקיקים המסונתזים בנוסחת סרום קוסמטית. היציבות מוערכת בתנאי אחסון מבוקרים על ידי ניטור תכונות אורגנולפטיות, pH וצמיגות. שיטה זו מספקת גישה ניתנת לשחזור וברת קיימא לייצור ננו-חלקיקי מגנזיום המתווכים על ידי צמחים ולהערכת יישומם בפורמולציות קוסמטיות.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תחום הפיטוגאוגרפיה של סראדו, שמרכיב את תצורת הסוואנה הניאוטרופית הגדולה ביותר בדרום אמריקה, מייצג את אזור הסוואנה הטרופית המגוון ביותר בעולם. מערכת אקולוגית זו מכילה אלפי מיני צמחים עשירים במטבוליטים משניים כגון פלבונואידים, פוליפנולים, טרפנים וחומצות פנוליות, שרבים מהם מתועדים על פעילויות נוגדי חמצון, אנטי-דלקתיות ופוטופרוטקטיביות המעניינות את תעשיות הקוסמטיקה והתרופות 1,2,3,4 . פיטוכימיקלים אלו משולבים באופן נרחב כמרכיבים פעילים בעלי ערך גבוה בנוסחאות קוסמטיות פונקציונליות. בנוסף לפעילותם הביולוגית, קבוצות הפונקציונליות של הידרוקסיל וקרבוניל הקיימות בפוליפנולים ופלבונואידים רבים מאפשרות להן לפעול כסוכני חיזור ומייצב טבעיים ליוני מתכת בתמיסה 5,6. תכונה כימית זו נחקרת יותר ויותר בננוטכנולוגיה ירוקה לסינתזה של ננו-חלקיקי מתכת, ומייצגת הזדמנות מבטיחה אך לא נחקרה לפיתוח פורמולות קוסמטיות ברות קיימא שמקורן במגוון ביולוגי ניאוטרופי 2,3,4,5,6.

באופן מסורתי, ננו-חלקיקים (NPs) יוצרו בשיטות מלמעלה למטה, שבהן חומרים בתפזורת מפורקים לחלקיקים בגודל ננומטרי באמצעות שיטות פיזיקליות כמו אבלציה בלייזר או ספטרינג, ושיטות מלמטה למעלה, שבהן NPs נבנים מיחידות קטנות יותר באמצעות מסלולים כימיים או ביולוגיים7. בעוד ששיטות כימיות ופיזיקליות יעילות, הן לעיתים קרובות מתבססות על תגובות רעילות, צריכת אנרגיה גבוהה וציוד מורכב. דבר זה הוביל לעליית גישות כימיה ירוקה, המדגישות קיימות, ידידותיות לסביבה ובטיחותבייצור ננו-חומרים.

במסגרת זו, סינתזה ירוקה של NPs זכתה לתשומת לב רבה. היכולת של פיטוכימיקלים צמחיים לפעול בו-זמנית כסוכנים מפחיתים, מייצבים ומכבידים, המאפשרת סינתזה יעילה של NPs של מתכות ומתכת אוקסיד, בשילוב עם מגבלות שיטות קונבנציונליות, הדורשות ציוד מיוחד, תנאים קיצוניים ומייצרות פסולת רעילה, מצדיקה פיתוח פרוטוקול סינתזה ירוק הפועל בתנאים מתונים, היא ניתנת להרחבה. ואינו מייצר תוצרי לוואימסוכנים 6,7,8,9. מבין חלקיקי חמצת המתכת שנחקרו באסטרטגיה זו, ננו-חלקיקי מגנזיום (MgNPs) מציגים יתרונות משמעותיים על פני ננו-חלקיקי כסף (AgNPs) וננו-חלקיקי תחמוצת אבץ (ZnO NPs), שכן MgNPs אינם מראים נטייה להצטברות ביולוגית, מציגים ציטוטוקסיות נמוכה יותר בתאים אנושיים, ומוכרים על ידי מנהל המזון והתרופות של ארצות הברית (FDA) כחומרים בטוחים בדרך כלל ליישומים אנושיים10. 11. בנוסף, MgNPs המסונתזים באמצעות תמציות צמח Cerrado צפויים לשלב את התכונות נוגדי החמצון והאנטיבקטריאליות של מגנזיום עם הפיטוכימיקלים הביואקטיביים הנמצאים בתמצית, ובכך לשפר את ערכם הפונקציונלי האסתטי בהשוואה למקבילות מסונתזות קונבנציונליות10.

בתעשיית הקוסמטיקה, יישום הננוטכנולוגיה חולל מהפכה בפיתוח מוצרים על ידי שיפור אספקת המוצרים, היציבות והיעילות של הרכיבים הפעילים11. NPs יכולים לחדור עמוק יותר לעור, לספק שחרור מבוקר ולהגן על תרכובות רגישות מפני התפרקות, מה שהופך אותם לבעלי ערך רב לנוסחאות המתמקדות בהזדקנות העור, פיגמנטציה, אקנהוהגנה מפני השמש. למרות היתרונות המתועדים הללו, הסינתזה הירוקה של MgNPs באמצעות צמחים מקומיים מסוואנות ניאוטרופיות כסוכני חיזור ליישומים קוסמטיים נותרה ברובה לא נחקרה וחסרה סטנדרטיזציה מתודולוגית, בניגוד למה שדווח רבות על צמחים מאסיה, אפריקה ואירופה 11,12,13,14. רוב המחקרים הקיימים מעניקים תשומת לב מוגבלת לשילוב NPs בנוסחאות קוסמטיות פונקציונליות וליציבותן בתנאי אחסון מבוקרים 11,14,15. הפרוטוקול הנוכחי מסייע למלא את הפער המתודולוגי הזה על ידי שילוב, בשיטה אחת וניתנת לשחזור, את הסינתזה הירוקה של MgNPs מצמחייה ניאוטרופית, את שילובם בסרום פנים ננו-פיטוקוסמטי, והערכה מקיפה של יציבותם הפיזיקוכימית והתפקודית.

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לתאר מתודולוגיה סטנדרטית, ניתנת לשחזור וניתנת להרחבה לסינתזה ירוקה של MgNPs באמצעות Stryphnodendron adstringens, צמח יליד הסוואנות הניאוטרופיות של סראדו, כסוכן מפחית ומייצב, ובכך לנצל את תכונותיו הביואקטיביות הפנימיות בנוסחת סרום פנים. פיתוח MgNPs מסונתזים מ-S. adstringens ליישומים מקומיים בבני אדם מהווה פורמולציה ננו-חדשה המוגנת כיום תחת בקשת פטנט ברזילאי (BR 10, 2025 015416 1). העיצוב הניסויי המוצע מייצג גישה בת-קיימא וביוקומפטיבית לייצור NP, תוך הימנעות משימוש בסוכנים מפחיתים רעילים הנפוצים בסינתזת NP קונבנציונלית, תוך הקלה על שילוב פיטוכימיקלים עם פעילות ביולוגית פוטנציאלית. פרוטוקול זה מתאים במיוחד לחוקרים המחפשים שיטות ידידותיות לסביבה לייצור ננו-חלקיקים ליישומים קוסמטיים, פרמצבטיים או ביו-רפואיים, במיוחד כאשר קיימות תמציות צמחיות עשירות בפלבנואידים ופוליפנולים. מכיוון שתרכובות אלו פועלות כסוכנים טבעיים להפחתת ומייצב, ניתן להתאים את הפרוטוקול בקלות למינים צמחיים אחרים עם פרופילים פיטוכימיים דומים, מה שמאפשר יישומו בצמחייה מקומית מאזורים ביוגאוגרפיים שונים בהתאם לזמינות המקומית של חומר צמחי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. חומר צמחי

  1. בחירה ותיעוד
    1. בחרו צמחים בריאים של S. adstringens הגדלים באזורים מייצגים של הסביבה הטבעית לאיסוף קליפות. רשמו את מיקום הדגימה, תאריך האיסוף, הקואורדינטות הגאוגרפיות באמצעות מכשיר GPS ותנאי הסביבה המקומיים בזמן האיסוף.
    2. לבצע זיהוי בוטני באמצעות ספרות טקסונומית מיוחדת למיני סוואנה ניאוטרופיים. אשר את הזיהוי על ידי התייעצות עם טקסונום מוסמך17.
    3. לאסוף ולהפריד חומר צמחי מייצג לתיעוד הרבריום, כולל מבנים וגטטיביים ורבייה (למשל, עלים, פרחים, פירות וענפים קטנים).
      הערה: לאסוף חומר הרבריום בנפרד מהקליפה המשמשת להליכים ניסיוניים. לחץ וייבש את חומר הצמח באמצעות טכניקות הרבריום סטנדרטיות, התקן דגימות שובר והפקיד אותן בהרבריום מוכר כדי להבטיח מעקב.
  2. אוסף קליפות
    1. אספו את הקליפה מגזע עץ S. adstringens בשלבים 31–39 (Biologische Bundesanstalt, Bundessortenamt ו-Chemische Industrie) (Biologische Bundesanstalt, Bundessortenamt and Chemische Industrie) בשלבים 31–39, התואמים לשלב הצמיחה הצמחית כפי שתואר במחקרים פנולוגיים קודמים16,17.
      הערה: אחסן את החומר שנאסף בשקית כהה כדי למנוע פירוק מטבוליטים משניים ולמנוע פירוק מטבוליטים משניים.
  3. קביעת לחות
    1. שקלו את דגימות הקליפה באמצעות איזון אנליטי. חלק את החומר לשלוש שכפולים ורשם את המשקלים ההתחלתיים.
    2. הניחו את דגימות הקליפה בתנור בטמפרטורה של 105 מעלות צלזיוס. ייבשו את הדגימות עד שהן מגיעות למשקל קבוע.
      הערה: משקל קבוע מושג כאשר שתי מדידות רצופות שונות לא יותר מ-1 מ"ג, מה שמעיד על הסרת לחות מלאה.
    3. הוציאו את הדגימות מהתנור, תנו להן להתקרר לטמפרטורת החדר, ותרשמו את המשקל הסופי. חשב את תכולת הלחות והחומר היבש באמצעות המשוואות הבאות:
      figure-protocol-1
      חומר יבש (%) = 100 - לחות (%)
      כאשר:
      W1 = משקל המיכל הריק
      W2 = משקל המיכל + הדגימה לפני הייבוש
      W3 = משקל המיכל + דגימה לאחר הייבוש

2. הכנת תמצית

הערה: כל ההליכים הכוללים חומרים מסוכנים בוצעו בהתאם להנחיות בטיחות כימיות מוכרות בינלאומית18.

  1. שטפו את הקליפה הטרייה שנאספה במים זורמים כדי להסיר אדמה, אבק וזיהומים על פני השטח.
  2. הניחו את דגימות הקליפה בתנור בטמפרטורה של 36°C למשך 72 שעות. טחנו את הקליפה המיובשת באמצעות טחנת סכין כדי לקבל אבקה דקה.
  3. שקלו 200 גרם של קליפה אבקתית והעבירו אותה לבקבוק ארלנמאייר. הוסף 1000 מ"ל של 98% אתנול.
    אזהרה: אתנול דליק מאוד. התנהל הרחק ממקורות ההצתה ועבוד באזור מאוורר היטב.
  4. אטום את הבקבוקון ושמור אותו בטמפרטורת החדר במשך 72 שעות, מוגן מאור. ערבבו את התערובת פעם ב-24 שעות.
  5. סנן את התמצית תחילה דרך רשת מתכת ואז דרך כותנה באמצעות משפך להסרת שאריות.

3. הערכת פעילות נוגדי חמצון

  1. הכינו תמיסת DPPH של 100 מ"מ (2,2-דיפניל-1-פיקרילהידרזיל) במתנול.
    אזהרה: מתנול הוא רעיל ודליק מאוד. תלבשו מכסה אדים ותלבשו ציוד מגן אישי מתאים. DPPH הוא מגרה ועלול להיות מזיק אם נשאף או נבלע. הימנעו ממגע ושאיפה ישירה.
    הערה: הגנו על התמיסה מאור על ידי ביצוע הבדיקה בתנאי תאורה חלשה, וזהירו בטיפול במתנול ו-DPPH, ותמיד יש לבצע זאת עם כפפות.
  2. מדלל את תמצית הקליפה האתנולית של S. adstringens במתנול כדי לקבל ריכוזים הנעים בין 0.1% ל-5% (v/v). הכינו תמיסות ויטמין C בריכוזים זהים לבדיקה חיובית.
  3. זרקו 100 מיקרוליטר תמיסת DPPH לכל באר של לוח עם 96 בארות.
  4. הוסיפו 50 מיקרו ליטר של תמצית או תמיסת ויטמין C לכל באר.
    הערה: השתמש ב-DPPH + מתנול כבקרה שלילית ובמתנול בלבד כבקרה השלילית. בצע את כל המדידות במצב מרובע.
  5. דגרו את הצלחת במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר בחושך.
  6. מדדו את הספיגה ב-515 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר.
  7. חשב פעילות איסוף רדיקלי באמצעות המשוואה הבאה:
    figure-protocol-2
    כאשר:
    בקרת ABS = ספיגת DPPH + מתנול
    דגימת ABS = ספיגת DPPH + תמצית

4. ניתוח קיום תאים

  1. תרבית פיברובלסטים עוריים אנושיים תקינים (NHDF) במדיום RPMI-1640, בתוספת 10% סרום בקר עוברי ו-1% פניצילין–סטרפטומיצין. שמור על תאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO₂.
  2. זרעו תאים לפלטות של 96 בארות ב-3 × 10תאים לבאר ודגרו במשך 24 שעות.
  3. החליפו את המדיום ב-100 מיקרוליטר של מדיום טרי והוסיפו 50 מיקרוליטר של תמצית. דגרה ל-24 שעות.
  4. הסר את המדיום והוסיף 10 מיקרוליטר של תמיסת MTT לכל באר. דגרו במשך 4 שעות כדי לאפשר היווצרות פורמזן.
    אזהרה: מגיב MTT הוא רעיל ויש לטפל בו עם כפפות וציוד מגן מתאים. הימנע מקשר עין ועור ועיניים.
  5. מוסיפים 60 מיקרוליטר של תמיסת מסיסות (HCl באיזופרופנול) כדי להמיס את הגבישים.
    אזהרה: חומצה כלורית היא קורוזית ועלולה לגרום לכוויות קשות. לטפל בציוד מגן מתאים ולעבוד עם מכסה אדים. איזופרופנול דליק ויש לטפל בו הרחק ממקורות ההצתה באזור מאוורר היטב.
  6. מדדו את הספיגה ב-540 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר.
    הערה: בדיקות קיום תאים בוצעו בקבוצות ביקורת מטופלות ולא מטופלות, כאשר כל מצב נותח בבארות מרובעות.
  7. חשב את כדאיות התאים באמצעות:
    חיוניות תא (%) = (תמצית דגימת ABS/בקרת תאים ABS) x 100
    כאשר:
    בקרת תאי ABS = ספיגת בארות בקרה לא מטופלות המכילות תאים ומדיום תרבית בלבד.
    ABS Sample Extract = ספיגת בארות המכילות תאים שטופלו בתמצית הצמח.

5. סינתזה ירוקה של ננו-חלקיקי מגנזיום

  1. הוסיפו 9890 מיקרוליטר מים מזוקקים לצינור תגובה סטרילי.
  2. הוסיפו 100 מיקרוליטר של תמצית צמחים.
  3. מוסיפים 10 מיקרוליטר של 1 M MgCl₂ כדי לקבל ריכוז סופי של 10 מ"מ.
    אזהרה: מגנזיום כלוריד עלול לגרום לגירוי. התנהגו עם ציוד מגן מתאים והימנעו ממגע עם עיניים ועור.
    הערה: תגובת הבסיס מורכבת מ-1% תמצית (v/v) + 10 mM MgCl₂ בנפח כולל של 10 מ"ל. כדי למקסם את היווצרות NP, ניתן להתאים את ריכוז התמצית תוך שמירה על הנפח הסופי וריכוז MgCl₂.
  4. מערבבים היטב כדי להומן את התמיסה.
  5. דגירה ב-75 מעלות צלזיוס למשך 18 שעות.
    אזהרה: טמפרטורות גבוהות עלולות לגרום לכוויות. השתמש בציוד מגן מתאים בעת טיפול בדגימות מחוממות.
    הערה: שינוי צבע עשוי להעיד על היווצרות ננו-חלקיקים.
  6. אפשר לתערובת להתקרר לטמפרטורת החדר לפני האפיון.

6. אפיון ננו-חלקיקים

  1. פיזור אור דינמי (DLS)
    1. העבר ~750 מיקרוליטר של השעיית ננו-חלקיקים לתא מדידה.
    2. הכניסו את התא לתוך המכשיר ובצעו מדידות בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס.
    3. רכישת נתוני גודל החלקיקים באמצעות מצב זיהוי מתאים.
    4. נתח כל דגימה בשלושה עותקים עם חמישה תת-ריצות לכל מדידה.
  2. מיקרוסקופיית כוח אטומי (AFM)
    1. הפקיד 10 מיקרוליטר של ננו-חלקיקים על מיקה שנחתכה זה עתה.
    2. ייבשו את הדגימה במייבש למשך 2 שעות.
    3. שטפו בעדינות את יריעת המיקה שלוש פעמים עם 20 מיקרוליטר מים מזוקקים מסוננים. החזירו את הדגימה למייבש ואפשרו לה להתייבש בטמפרטורת החדר למשך שעתיים נוספות.
      הערה: שטיפה מסירה מלחים עודפים ומשפרת את איכות התמונה.
    4. הגדר את מיקרוסקופ הכוח האטומי על ידי ביצוע הגדרת מכשירים ויישור לייזר בהתאם להוראות היצרן. לצלם תמונות שטח של ה-NPs עם שטח סריקה של 500 ×-500 ננומטר.
      הערה: AFM משמש להערכה איכותית של מחוספסות פני השטח ולהמחשת המאפיינים המורפולוגיים של MgNPs המסונתזים מ-S. adstringens, ליצירת תמונות תלת-ממדיות ברזולוציה גבוהה.

7. ניסוח ננו-פיטוקוסמטיקה

  1. פאזה מחוממת
    1. שקלו 29.7 גרם מים מטוהרים, 0.50 גרם הידרוקסיאתיל צלולוז (HEC), ו-3 גרם גליצרין במיכלים נפרדים.
    2. הניחו את המים במערבל מגנטי וחממו ל-70–75 מעלות צלזיוס עם ערבוב עדין.
    3. הוסיפו HEC בהדרגה למים המחוממים תוך כדי ערבוב כדי למנוע הצטברות.
      הערה: הידרציה עשויה לדרוש 15–30 דקות.
    4. מוסיפים גליצרין ומערבבים עד שהם הומוגניים.
  2. שלב הקירור
    1. בכוסות נפרדות, יש לשקול 30 גרם מים מטוהרים, 3 גרם ניאצינמיד, 33.3 גרם MgNPs מסונתזים מ-S. adstringens, 0.3 גרם חומצה היאלורונית במשקל מולקולרי נמוך, ו-0.2 גרם אלכוהול בנזיל וחומצה דהדרואצטית ליצירת שלב הקירור.
    2. המיס את הניאצינמיד לחלוטין במים בטמפרטורת החדר.
    3. הוסף חומצה היאלורונית וערבב עד לאחידות.
    4. הוסף S. adstringens MgNPs וערבב בעדינות.
    5. הוסף חומר משמר ומערבב.
  3. מיקסינג
    1. קרר את הפאזה המחוממת ל-~40 מעלות צלזיוס.
    2. הוסיפו את שלב הקירור לאט לשלב המחומם בזמן הערבוב.
    3. מדוד את ה-pH של הנוסחה. לנוסחאות סרום המכילות ניאצינמיד, pH יעד של 5.0–6.5 הוא מתאים.
      הערה: ניאצינמיד יציב סביב pH ניטרלי או מעט חומצי. השתמש בכמויות קטנות של חומצה ציטרית או נתרן הידרוקסיד כדי לכוון את ה-pH במידת הצורך.

8. הערכת יציבות קוסמטית

  1. יציבות ראשונית (12 ימים)
    1. הכינו ארבע דגימות משוכפלות של הסרום הקוסמטי במיכלים אטומים.
    2. חשוף את הדגימות לשישה מחזורי הקפאה-הפשרה רצופים. אחסון הדגימות ב-50 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות ואז בטמפרטורה של −5 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות, והשלים מחזור מלא אחד כל 48 שעות.
    3. לאחר כל מחזור, יש לתעד תכונות אורגנולפטיות על ידי בדיקה ויזואלית של הנוסחה לשינויים במראה, בצבע, בריח ובהפרדת פאזה.
    4. מדדו pH של ארבע הדגימות בטמפרטורת החדר, באמצעות מד pH דיגיטלי מכויל. קבעו צמיגות באמצעות ויסקומטר סיבובי בהתאם להוראות יצרן הציוד.
      הערה: וריאציות ≤10% הן מקובלות. שינויים העולים על סף זה עשויים להעיד על חוסר יציבות בנוסחה ויש לחקורם לעומק. אם הנוסחה עוברת את המחקר הראשוני, יש לבצע בדיקת יציבות מואצת.
  2. יציבות מואצת (90 ימים)
    1. הכינו שמונה דגימות מהפורמולה הקוסמטית. אחסן ארבע דגימות בטמפרטורה של 50 מעלות צלזיוס וארבע דגימות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
    2. הערכה ב-0, 1, 7, 15, 30, 60 ו-90 יום.
    3. הערך ותיעוד תכונות אורגנולפטיות על ידי בדיקה ויזואלית של הנוסחה לשינויים במראה, בצבע, בריח ובהפרדת פאזה.
    4. מדדו pH של הדגימות בטמפרטורת החדר, באמצעות מד pH דיגיטלי מכויל. קבעו צמיגות באמצעות ויסקומטר סיבובי בהתאם להוראות יצרן הציוד.
      הערה: הערכת היציבות בוצעה בהתאם להנחיות שנקבעו על ידי סוכנות המעקב הבריאותי הברזילאית19. בארצות הברית, בדיקות יציבות פועלות לפי המלצות ה-FDA20. באיחוד האירופי, הערכת יציבות עומדת בתקנה (EC) מס' 1223/200921, המחייבת הכללת דוח בטיחות מוצרי קוסמטיקה (CPSR). נספח I של תקנה זו דורש נתוני יציבות מתועדים לתמיכה בבטיחות ובחיי המדף של הנוסחה הקוסמטית, כאשר הבדיקות מתבצעות בדרך כלל בהתאם להנחיות המותאמת ISO/TR 18811:201822, "הנחיות לבדיקות יציבות של מוצרי קוסמטיקה".

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תהליך הייבוש של קליפת הצמח הוא שלב קריטי בשימור תרכובות ביואקטיביות ובהבטחת יישומן בתעשיות המזון, התרופות והקוסמטיקה. לעומת זאת, ייבוש לא מספק עלול לגרום להכהות מופרזת, אובדן ארומה, זיהום מיקרוביאלי ופירוק של תרכובות ביואקטיביות, ובכך לפגוע באיכות הקליפה הגולמית. טבלה 1 מסכמת את הקריטריונים המשמשים להבחנה בין חומר צמחי מיובש כראוי או לא נכון.

יחד, גורמים אלו מדגישים כי ייבוש מספק אינו רק טכניקת שימור אלא גורם מכריע בשמירה על הערך הפונקציונלי ו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקול המוצג כאן מתאר תהליך שכפול לסינתזה ירוקה של MgNPs באמצעות תמצית S. adstringens ושילובם בנוסחת סרום ננו-פיטוקוסמטית. מספר שלבים קריטיים להבטחת תוצאות אמינות. ראשית, יש לתקן בקפידה איסוף ותיעוד חומרי צמחים, כולל רישום מדויק של קואורדינטות גאוגרפיות, תנאי סביבה ושלב פנולוגי, שכן שונות בפיזיולוגיה של הצמח ותכולת מטבוליטים משנית יכולה להשפיע ישירות על הרכב התמצית, ולכן על יעילות הפחתת וייצוב NP16,17.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין ניגוד עניינים. מקורות המימון לא היו מעורבים בתכנון המחקר, איסוף הנתונים, הניתוח, הפרשנות או ההחלטה לפרסם את התוצאות.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים רוצים להודות לאוניברסידאדה הקתולית דום בוסקו ולאוניברסידאדה הקתולית ברזיליה על תמיכתן במהלך בניית העבודה הזו. עבודה זו נתמכה גם על ידי Conselho Nacional de Pesquisa (CNPq), Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAPDF), Financiadora de Estudos e Projetos (FINEP), ו-Fundação de Apoio à Pesquisa do Mato Grosso do Sul (FUNDECT).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
לוחות 96 בארותסיגמא-אלדריץ'M0812בדיקות תאים
בנזיל אלכוהול & חומצה דהדרואצטיתסיגמא-אלדריץ'1,09,626חומר משמר
צינורות צנטריפוגה (15 מ"ל / 50 מ"ל)פלקון (קורנינג)430766טיפול בדגימות
חומצה ציטריתסיגמא-אלדריץ'C0759התאמת pH
חממת CO2תרמופישר סיינטיפיק3110חממת CO2 המשמש לתרבות תאים
חומר מסנן כותנהספק מקומיLH R/260סינון
דסיקטורמרק BAF424002141ייבוש
DPPH (2,2-דיפניל-1-פיקרילהידראזיל)סיגמא-אלדריץ'D9132בדיקת נוגדי חמצון
תנור ייבושNova & Eacute; טיקה400/5NDRתנור לייבוש חומר צמחי
תנור קלסולידסטילSSE-85Lתנור המשמש לבדיקות יציבות קוסמטיות
בקבוקי ארלנמאייר 1000 מ"לוידרולבור76200B01000חילוץ
אתנול (98%)דינמיקה-קימיקה עכשוויתעמ' 10.0051.015.36ממס חילוץ
סרום בקר עוברי (FBS)גיבקו (תרמו פישר)ES-009-Cתוספת
מקפיאגלופארGTPC-575מקפיא המשמש לבדיקות יציבות
גליצריןבוטיקה בוטניקהTBV084.003904.086חומר לחות
חומצה היאלורונית (משקל מולקולרי נמוך)בוטיקה בוטניקהJ201220136סוכן הידרציה
חומצה כלורית (HCl)סיגמא-אלדריץ'1,00,317מסיסות MTT
הידרוקסיאתילצלולוז (HEC)בוטיקה בוטניקהAH230641697מעבה
איזופרופנולסיגמא-אלדריץ'100995 מסיסות MTT
טחנת הסכינים7LAB920Willye 4× 4 להביםטחינת עלים, שורשים, זרעים ופקעות
מגנזיום כלוריד (MgCl2)סיגמא-אלדריץ'1,01,872סינתזת ננו-חלקיקים
Magnetic stirrer– פלטת חימוםאיקה5030000מיקסינג
מתנולסיגמא-אלדריץ'900641בדיקת DPPH
דפי מיקהתרמופישר סיינטיפיקNC9655733הכנה ל-AFM
קורא מיקרופלטתרמופישר סיינטיפיקMultiskan GO 1510-03581קורא מיקרופלט
מגיב MTTסיגמא-אלדריץ'CT01-5בדיקת כחיות תאים
תאי NHDFBCRJ0089פיברובלסטים דרמליים אנושיים
ניאצינמידבוטיקה בוטניקה211847מרכיב פעיל
תנורטרמו סיינטיPR305225Mייבוש
פניצילין– סטרפטומיציןגיבקו (תרמו פישר)15140122אנטיביוטיקה
מד pHmדיג'ימדDM-220משמש למונוטורינג pH בבדיקות יציבות
פיפטות וטיפים  אפנדורף30078551טיפול בנוזלים
מים מזוקקים / מטוהריםמרק (מילי-קיו)ZIX7010T0Cשימוש כללי
מקררמטאלפריוVB40W מקרר המשמש לבדיקות יציבות
ויסקומטר סיבובינובוטסטVISC-5SAמשמש למדידת צמיגות במבחני יציבות
RPMI-1640 בינוניגיבקו (תרמו פישר)  11875093תרבית תאים
קנה מידהBEL EngeneeringHPBG-2285משקל לשקילת חומרים
מיקרוסקופ סורקשימדזוSPM-9700HTAFM, מיקרוסקופ גלאי סורק
נתרן הידרוקסיד (NaOH)דינמיקה-קימיקה עכשוויתעמוד 10.0594.024.00התאמת pH
ספקטרופוטומטרתרמופישר סיינטיפיקA51119700Cספיגה
ויטמין C (חומצה אסקורבית)סיגמא-אלדריץ'PHR1008שליטה חיובית
Zetasizer Proמלוורן אנליטיZetasizer Proלפיזור אור דינמי וגודל זטה

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Overbeck, G. E., et al. Placing Brazil’s grasslands and savannas on the map of science and conservation. Perspect Plant Ecol Evol Syst. 56, 125687 (2022).
  2. Carvalho, H. J. M., et al. Underexploited fruits from the Brazilian Cerrado: Biodiversity, phenolic composition and biological activities. Food Biosci. 66, 106269 (2025).
  3. Ariyanta, H. A., et al. Current and future outlook of research on renewable cosmetics derived from biomass. Chem Biodivers. 22 (7), e202402249 (2025).
  4. Chrzanowska, E., et al. Metabolites obtained from Boraginaceae plants as potential cosmetic ingredients: A review. Molecules. 29 (21), 5088 (2024).
  5. Antunes Filho, S., et al. Biosynthesis of nanoparticles using plant extracts and essential oils. Molecules. 28 (7), 3060 (2023).
  6. Gupta, D., et al. Green and sustainable synthesis of nanomaterials: Recent advancements and limitations. Environ Res. 231, 116316 (2023).
  7. Alsaiari, N. S., et al. Plant and microbial approaches as green methods for the synthesis of nanomaterials: Synthesis, applications, and future perspectives. Molecules. 28 (1), 463 (2023).
  8. Gour, A., Jain, N. K. Advances in green synthesis of nanoparticles. Artif Cells Nanomed Biotechnol. 47 (1), 844-851 (2019).
  9. Huston, M., et al. Green synthesis of nanomaterials. Nanomaterials (Basel). 11 (8), 2130 (2021).
  10. Younis, I. Y., et al. Green synthesis of magnesium nanoparticles mediated from Rosa floribunda charisma extract and its antioxidant, antiaging and antibiofilm activities. Sci Rep. 11 (1), 16868 (2021).
  11. Proniewicz, E., et al. Plant-assisted green synthesis of MgO nanoparticles as a sustainable material for bone regeneration. Int J Mol Sci. 25 (8), 4242 (2024).
  12. Raszewska-Famielec, M., et al. Nanoparticles for topical application in the treatment of skin dysfunctions: An overview of dermo-cosmetic and dermatological products. Int J Mol Sci. 23 (24), 15980 (2022).
  13. Paiva-Santos, A. C., et al. Plant-mediated green synthesis of metal-based nanoparticles for dermopharmaceutical and cosmetic applications. Int J Pharm. 597, 120311 (2021).
  14. Sisubalan, N., et al. Eco-friendly synthesis of MgO nanoparticles for biomedical applications: Advances, challenges, and future prospects. Nanoparticles in Modern Antimicrobial and Antiviral Applications. , 201-226 (2024).
  15. Kumar, R., et al. Advances in nanotechnology and nanomaterials-based strategies for neural tissue engineering. J Drug Deliv Sci Technol. 57, 101617 (2020).
  16. Souza, I. M., Funch, L. S. Fenologia e modos de polinização e dispersão de Fabaceae em floresta ciliar, Chapada Diamantina, Nordeste do Brasil [Phenology and pollination and dispersal modes of Fabaceae in riparian forest, Chapada Diamantina, Northeastern Brazil]. Sitientibus Ser Cienc Biol. 15, (2015).
  17. Hazrati, S., et al. Harvest time optimization for medicinal and aromatic plant secondary metabolites. Plant Physiol Biochem. 212, 108735 (2024).
  18. United Nations. . Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (GHS). , (2023).
  19. Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). . Guia de Estabilidade de Produtos Cosméticos [Guide to the Stability of Cosmetic Products]. , (2004).
  20. . Guidance for industry: Cosmetic product stability (general recommendations) Available from: https://www.fda.gov (n.d.)
  21. European Parliament, Council of the European Union. Regulation (EC) No 1223/2009 on cosmetic products. Off J Eur Union. L342, 59-209 (2009).
  22. International Organization for Standardization (ISO). . ISO/TR 18811:2018: Cosmetics — Guidelines on stability testing of cosmetic products. , (2018).
  23. Mianda, S. M., et al. Impact of drying on phytonutritional compounds, in vitro antioxidant activity and cytotoxicity of spiny saltbush (Rhagodia spinescens). Antioxidants. 13 (11), 1382 (2024).
  24. Rohit, , et al. TOPSIS-based evaluation of drying methods on polyphenolic contents and antioxidant activity of Moringa oleifera leaves. Discover Food. 5 (1), 127 (2025).
  25. Saifullah, M., et al. Effect of drying techniques on phenolics and antioxidant properties of Leptospermum petersonii leaves. J Food Process Preserv. 45 (3), e15257 (2021).
  26. Khan, H., et al. Harnessing plant extracts for green nanoparticle synthesis: Toward a sustainable future. Mater Today Sustain. 31, 101195 (2025).
  27. Apak, R., et al. Methods to evaluate the scavenging activity of antioxidants toward reactive oxygen and nitrogen species (IUPAC technical report). Pure Appl Chem. 94 (1), 87-144 (2022).
  28. Tumilaar, S. G., et al. A comprehensive review of oxidative stress and antioxidant mechanisms of flavonoids. J Chem. 2024, 5594386 (2024).
  29. Michalak, M., et al. Phenolic profile and biological activities of Borago officinalis extracts on skin cells. Molecules. 28, 868 (2023).
  30. Abdallah, W. E., et al. Phytochemical analysis and biological activities of Casuarina equisetifolia extracts. BMC Complement Med Ther. 24, 128 (2024).
  31. Arunachalam, K., Sreeja, P. S. MTT assay protocol. Advanced Cell and Molecular Techniques. , 271-276 (2025).
  32. Choi, B. H., et al. Interference of porphyrin-related compounds in MTT assays. Int J Mol Sci. 24 (1), 562 (2022).
  33. Ramezani Farani, M., et al. Green synthesis of magnesium oxide nanoparticles for antimicrobial applications. Catalysts. 13 (4), 642 (2023).
  34. Miu, B. A., Dinischiotu, A. New green approaches in nanoparticles synthesis: An overview. Molecules. 27 (19), 6472 (2022).
  35. Jeevanandam, J., et al. Biosynthesis and characterization of MgO nanoparticles from plant extracts. New J Chem. 41, 2800-2814 (2017).
  36. Carvalho, P., et al. Application of light scattering techniques to nanoparticle characterization. Front Chem. 6, 237 (2018).
  37. Eaton, P., et al. A direct comparison of experimental methods to measure nanoparticle dimensions. Ultramicroscopy. 182, 179-190 (2017).
  38. Hoo, C., et al. Comparison of AFM and DLS for nanoparticle size characterization. J Nanopart Res. 10 (1), 89-96 (2008).
  39. Alharbi, N. S., et al. Green synthesis of silver nanoparticles using medicinal plants. J Radiat Res Appl Sci. 15 (3), 109-124 (2022).
  40. U.S. Food and Drug Administration (FDA). . Cosmetic Good Manufacturing Practice Guidelines/Inspection Checklist. , (2013).
  41. International Organization for Standardization (ISO). . ISO 22716:2007: Cosmetics — Good Manufacturing Practices (GMP): Guidelines on Good Manufacturing Practices. , (2007).
  42. Semenzato, A., et al. Formulating O/W emulsions with plant-based actives: A stability challenge. Cosmetics. 5, 59 (2018).
  43. Besrour, N., et al. Valorization of Juglans regia leaves as cosmeceutical ingredients. Antioxidants. 11 (4), 677 (2022).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Stryphnodendron adstringens
הסרטון יגיע בקרוב

מאמרים קשורים