Necropsy לאבחון רקמות אוסף נבחר מדגם של חולדות ועכברים

המטרה הכללית של הליך זה היא לבצע נתיחה לאחר המוות (necropsy) בסיסית למכרסמים. פעולה זו מבוצעת תחילה על ידי תיעוד מידע בסיסי על בעל החיים. השלב השני של ההליך הוא בדיקת האיברים הפנימיים.

השלב השלישי הוא איסוף דגימות כגון איברים או קשרי לניף מזנטריים. בסופו של דבר, ניתן לקבוע את המצב הבריאותי של בעל חיים באמצעות היסטופתולוגיה או טכניקות אחרות. בדרך כלל, אנשים שאינם מנוסים בביצוע נתיחה לאחר המוות יתקשו בכך, כיוון שהאנטומיה של מכרסמים נלמדת תוך כדי עבודה.

שיטות אלו יכולות לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בנוגע לבריאותן של בעלי חיים במושבה מחקר. הדגמה חזותית של טכניקות אלו היא חיונית, שכן נדרש זמן כדי ללמוד את מיקומם של רקמות שונות וכיצד להבחין בין רקמה נורמלית לרקמה לא נורמלית. לפני ביצוע ההמתה של בעל החיים, אספו מידע על ההיסטוריה שלו ורשמו את מאפייניו הנוכחיים, כגון מצב גופני, התנהגות, מין, גיל, משקל, זן וכדומה.

רישום זה חיוני עבור האדם שיבצע את בדיקת הרקמות לפני קטילת בעל החיים. ודאו כי נעשה שימוש בציוד מגן אישי מתאים. הכינו לוח ניתוח, פינצטות, מספריים, תוויות למכלי הקיבול, חומר קיבוע, מדיה ומכלי איסוף.

לאחר המתילת בעל החיים, העריכו את מצבו הגופני ובדקו אם קיימות הפרעות בעור ובפרווה, כשירה או התייבשות. כמו כן, חפשו עדות למניפולציות מלאכותיות, שתלים או צלקות ניתוחיות בגוף בעל החיים. לאחר מכן, באמצעות מיקרוסקופ דיסקציה, בחנו את כל הפתחים החיצוניים בפירוט.

אלה כוללים את האוזניים, העיניים, האף, הפה, פי הטבעת ואיברי הה reproduקציה. כעת, הנח את בעל החיים על גבו על לוח הנתיחה, הרם את העור באמצעות פינצטה והשתמש במספריים כדי לחתוך את העור מהפי הטבעת ועד לסנטר. לאחר מכן, קפל את העור לצדדים וחתוך דרך דופן הבטן וכלוב הצלעות.

חשפו את איברי החזה על ידי ביצוע שני חתכים לצדדים במעלה כל צד של כלוב הצלעות. חתכו את הסרעפת. לאחר מכן, הסירו את כלוב הצלעות על ידי חיתוך לרוחב החלק העליון של עצם הסטרנום.

כעת, בחנו את איברי בית החזה והבטן החשופים. שימו לב לכל שינויים בצבע, ריחות חריגים, גודל, הבדלים, וכן לאיברים חסרים או מ displaced. בחנו את מרקם פני השטח של האיברים וציינו מסות רקמתיות או כיסים מלאים בנוזלים.

כמו כן, שימו לב לנוכחות של נוזלים בכל אחת מהחללים. המשיכו את הבדיקה עם מערכת העיכול. בדקו את הגריד (mesentery) לאיתור קשרי לימפה מוגדלים או מסות רקמה.

תארו את תכולת מערכת העיכול ובדקו בקפידה אם קיימים עיבויים של הדפנות, מסות או דימומים. כדי לבחון את פנים הכליות, השתמשו בלהב כדי לבצע חיתוך לאורכי של הכליה השמאלית וחיתוך רוחבי של הכליה הימנית, מחוץ למרכז קו האמצע. בדקו את הפארנכימה לאיתור חריגות כלשהן.

כעת בחנו את מערכת השתן והמין בזכרים. זהו את שלפוחיות הזרע, האשכים, האיפידידימיס והשופכנים. בנקבות, זהו את הרחם, השחלות והשופכנים.

בדקו את מערכת השתן והמין לאיתור חסימות, כיסי נוזלים, דימומים או חריגות אחרות. לאחר השלמת בדיקות אלו, בודדו והוציאו את האיברים המבוקשים להמשך בדיקה. בדרך כלל, הלב, הכבד, הכליות והטחול נאספים תוך כדי הוצאתם.

טבלו כל איבר במקבע או בצעו את השלבים הראשונים של פרוטוקול הדורש רקמות אלו, כגון הקפאה או אימונוהיסטוכימיה, כדי להשיג קיבוע נאות. בדרך כלל, טובלים רקמות בחומר משמר כגון 10%NBF ביחס של 20 נפחי מקבע לכל נפח אחד של רקמה. בעבודה עם חולדות, אספו את השאיבה הסימפונית לפני השאיבה הנחיתית.

התחילו בהרחקה של העור והרקמות התת-עוריות מאזור הצוואר, ובכך חשפו את בלוטות הרוק ואת שרירי הצוואר. לאחר מכן, הסירו רקמות אלו כדי לחשוף את הקנה. בצעו חתך של שלושה מילימטרים לתוך הקנה והחדירו פיפטה טעונה ב-1 mL של נוזל דגימה לתוך חלל הקנה בכיוון רבעוני.

שטפו באיטיות את נוזל הדגימה דרך הקנה אל תוך הריאות שלוש פעמים. לאחר מכן, שאבו את נוזל הדגימה והוציאו את הפ pipette מהקנה. לא כל הנוזל יחזור אל תוך ה-pipette.

לפיכך, חזור על התהליך במידה ונדרש נוזל נוסף. לבדיקה בעכברים, כדי לקחת דגימה של שאיבה נחירית או שאיבה ברונכיאלית, גש ליחידת ה-ATU הנחירית-לועית באמצעות מספריים סטריליים.

נתקו את המפصل הלסת-רקה והרחיקו את הלסת התחתונה מהלסת העליונה, כדי לחשוף את ה-nasal pharyngeal atu לאיסוף של שאיבה נחירית. הכניסו פיפטה טעונה ב-1 mL של נוזל דגימה לתוך ה-nasal pharyngeal atu של העכבר, או לתוך הלומן של הקנה בעכבר. יש לכוון את הפיפטה באופן קרני (cran) ולהחדירה פנימה.

כך קצה השפיץ נוגע בחך הנחיר. בנקודה זו, הזרק slowly את נוזל הדגימה. עם כניסת הנוזל לחלל האף, ייווצרו מניסקוסים בפתח הנחיר, והוא אמור להיות נראה גם דרך החך הפהי השקוף.

עם זאת, אם נוזל יוצא דרך הפה, יש להתאים מחדש את כיוון הפ pipette. לאחר ההזרקה המלאה, יש לשאוב את נוזל הדגימה מחלל האף אל תוך ה-pipette, ולאחר מכן להוציא את ה-pipette. התחילו בתפיסת הקנה באמצעות פינצטה וגזרו אותו ממש מעל הפינצטה.

בשלב הבא, משכו בעדינות את הקנה כלפי מעלה, תוך גזירת חיבורי הרקמה עד שניתן יהיה להוציא את כל מערכת הרקמות החזהיות. כעת, הניחו את הריאות בצורה שטוחה על משטח העבודה, וקשרו באופן רפוי חוט תפר או חוט רגיל סביב הקנה. אין להדק את הקשר, שכן הדבר ימנע את הליש של המחט לתוך הקנה.

כעת, מלאו מזרק בחומר מקבע והחדירו את המחט לפתיחת הקנה תוך כדי קיבוע הקנה למחט. בעזרת פינצטה, מלאו באיטיות את הריאות בחומר המקבע עד להתרחבותן המלאה. נפח חומר המקבע ישתנה בהתאם לגילו של בעל החיים, לגזעו ולמצבו הבריאותי.

אם הרקמות אינן מנופחות מספיק, הן ייראו שטוחות; אם הן מנופחות מדי, נוזל קצפי ידלף מהרקמה לאחר המילוי. במקרה זה, הדקו את חומר התפירה או את החוט הסובב את הקנה כדי למנוע נזילה לאחור של המקבע מהריאות. לאחר מכן, הניחו את הריאות המנופחות בתוך המקבע. הניחו את הפגר על לוח נתיחה נקי במצב שכיבה גחוני, והשתמשו במספריים ובפינצטה כדי להסיר את העור ואת השרירים המכסים את הלב.

לאחר מכן, יש לבצע עקיפת ראש לגופה באמצעות מספריים קטנים. יש להחדיר את הלהב התחתון אל ה-foramen magnum ולגזור לאורך קו האמצע של הגולגולת בתנועה כלפי מעלה. כעת, יש לחשוף את המוח בעזרת פינצטה על ידי פתיחה של הגולגולת.

אם הפתולוג מעדיף לחתוך חתכים של המוח בעודו בתוך הגולגולת, יש להניח מיד את הגולגולת עם המוח החשוף ב-10%NBF. אחרת, אחזו את הראש סביב האף באמצעות פינצטה או אצבעות והפכו בעדינות את הגולגולת כדי שהכבידה תסייע לרקמה לנשור מהגולגולת. בזהירות, החליקו פינצטה מעוקלת לאורך הקצה החיצוני של המוח, החל מאונות הריח.

המשיכו להחליק את הפינצטה לאורך הגולגולת לכיוון המוח הקטן, תוךما צביטה עדינה של עצבים באמצעות אותה פינצטה. כאשר המוח משתחרר, הניחו אותו במקבע. כדי לאתר תחילה את קשרי הלימפה המזנטריים, איתרו את העקום (cecum) הגדול של המעי, בעל צורה של סהר. קשרי הלימפה המזנטריים הם גושי רקמה צהובים, סגלגלים או כדוריים, הנמצאים במזנטריום הסמוך לעקום.

הם לרוב מעט עבים יותר ובעלי מרקם מוצק יותר מהמסרק (mesentery) והשומן שסביבם. מיקרוסקופ ניתוח עשוי להיות מועיל להבחנה בין הרקמות בתחילה, אך עם הניסיון הוא לא יהיה נחוץ. בעזרת פינצטה ומספריים, בודדו את קשרי הלימפה המזנטריים, ולאחר מכן העבירו אותם לפח שחמירה לשימוש עבור תרבית, PCR או היסטופתולוגיה.

עם השלמת הפרוטוקול, יעמדו לרשות הפתולוג או המדען המסמכים הבאים: דוח כתוב על המצב האובייקטיבי והסובייקטיבי בעת ההמתה; תיאור אובייקטיבי של הרקמות לפני קיבוען; כל האיברים העיקריים בבטן ובבית החזה בתוך נוזל קיבוע; המוח וקשרי הלימפה המזנטריים (mesenteric), ודגימות של שאיבות מהאף ומהסימפונות.

בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לתעד את התצפיות על מצב בעל החיים ורקמותיו. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיו בעלי הבנה טובה לגבי אופן ביצוע נתיחה לאחר המוות (necropsy) מלאה של מכרסם, כולל איסוף ריאות שעברו פרפוזיה, קשרי לימפה מזנטריאליים והמוח.