כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים בשלב ההפוך: שיטה חזקה לכימות של חומצות סיאליות עם תווית פלואורסצנטית ופירוק שבודדו מכבד עכבר

רלוונטיות תעשייתית למנהלים

ניתוח כמותי של חומצות סיאליות תומך בתיקוף מטרות בביולוגיה של פחמימות (גליקובולוגיה) ובגילוי סממנים ביולוגיים. שיטת RP-HPLC זו מאפשרת מדידה מדויקת של רמות Neu5Ac ו-Neu5Gc, ומספקת הפחתת סיכונים מכניסטית עבור היפותזות טיפוליות הנוגעות למטבוליזם של חומצה סיאלית. גישה זו מגבירה את הביטחון החזוי במודלים פרה-קליניים על ידי אספקת כימות הדירש, המבוסס על פלואורסצנציה.

יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח בביופארמה

גילוי מוקדם ותיקוף מטרה

• ערך מדעי: מאפשר בדיקה של היפותזות טיפוליות הקשורות למסלולי הביוסינתזה של חומצה סיאלית.
• ערך תפעולי: מספק קריאות כמותיות לצורך תיקוף תפקודי של מטרות במערכות רלוונטיות למחלה.
• ערך מדעי: תומך בביטחון חיזוי באמצעות שינויים מדידים ברמות Neu5Gc בעקבות הפרעה גנטית.

סריקה ופיתוח בדיקות (Assay)

• ערך מדעי: יוצר נגזרות פלואורסצנטיות יציבות המתאימות לפורמטים של בדיקות סטנדרטיות.
• ערך תפעולי: מבטיח שחזור באמצעות נגזרת עקבית והפרדה כרומטוגרפית.
• ערך מדעי: מספק מדידות כמותיות של משתנים תלויים עבור קמפיינים של סריקת תרכובות.

מחקר תרגומי ופרה-קליני

• ערך מדעי: תואם למערכות רלוונטיות למחלה על ידי כימות של חומצות סיאליות ברקמת כבד של עכברים.
• ערך תפעולי: מקל על המשכיות משלב הגילוי ועד לתיקוף פרה-קליני באמצעות תוצרים סטנדרטיים.
• ערך מדעי: תומך בהחלטות קידום מותאמות סיכון באמצעות כימות ברמת ביומארקר.

שילוב תהליכי עבודה ופייפליין

שיטה זו משתלבת ברצף הגילוי, החל מתיקוף מטרות מוקדם ועד לסריקה פרה-קלינית, באמצעות אספקת מדידות כמותיות של חומצה סיאלית המבוססות על פלואורסצנציה.

• ביולוגיה של הגילוי: תומך בבדיקת היפותזות ובבירור מסלולים במטבוליזם של חומצה סיאלית.
• סריקה: מאפשר מוכנות של הבדיקה באמצעות נגזרת רב-שחזור והפרדה כרומטוגרפית.
• אנליטיקה: מספק קריאות פלואורסצנציה כמותיות בעירור של 373 nm ופליטה של 448 nm לצורך ניתוח השוואתי.
• מחקר תרגומי: מקשר להמשכיות פרה-קלינית באמצעות רמות מדידות של חומצה סיאלית בדגימות ביולוגיות.
• שימוש חוזר בארגון: מבסס פלטפורמה לשימוש חוזר עבור ניתוח חומצה סיאלית במגוון סוגי רקמות ומודלים.

השפעה תפעולית וארגונית

• ערך מדעי: ביטחון ניבוי בתיקוף המטרה באמצעות כימות מדויק של Neu5Ac/Neu5Gc.
• ערך תפעולי: סטנדרטיזציה ויכולת שחזור באמצעות תנאי דריבטיזציה ו-RP-HPLC סטנדרטיים.
• ערך אסטרטגי: קבלת החלטות משופרת לגבי המשך או הפסקת הפרויקט (go/no-go) על ידי הפחתת עמימות מכניסטית במטרות גליקובולוגיות.
• השפעה על הפורטפוליו: תיעדוף מותאם סיכון המבוסס על סממנים ביולוגיים כמותיים של חומצה סיאלית.

שיקולי יישום

• נדרשת מומחיות בכימיה של פחמימות ובבלימה פלואורסצנטית.
• נדרשת מערכת RP-HPLC עם עמודת C-18 וגלאי פלואורסצנציה.
• דורש סטנדרטיזציה של פרוטוקולי נגזרת (derivatization) בין הצוותים.
• כולל שיקולי התאמה עבור מקורות שונים של חומצה סיאלית.
• מוגבל בשל הצורך בתנאי פאזה ניידת אופטימליים לאינטראקציה הידרופובית.

שאלות נפוצות בביופארמה