טכניקה פשוטה לייצור דגם פצע איסכמי

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לאפשר יצירת פצעים איסכמיים, לא רק בארנבים בריאים, אלא גם בארנבים עם עמידות מופחתת, כגון ארנבים קשישים או חולי סוכרת. כל הטכניקות המשמשות כיום ליצירת פצעים איסכמיים הן פולשניות מאוד, ועד כה, אף אחת מהטכניקות הללו אינה ניתנת לשימוש בבעלי חיים חולי סוכרת. הליך זה משתמש בניתוח זעיר-פולשני המתחיל בביצוע שלושה חתכי עור קטנים מעל שלושת הצמורים הכליים.

השלב הבא הוא לבודד ולהגן על הווריד המרכזי ועל הצרור כלי הדם של ה-coddle, כך שסירקולציית הדם לאוזן תצטמצם אך לא תופסק לחלוטין. לבסוף, שאר כלי הדם, העצבים והרקמות התת-עוריות נכרתים או נקשרים דרך החתכים בעור. איסכמיה של האוזן מאומתת על ידי היעדר דופק עורקי, מראה האוזן, הפרש בטמפרטורה ורוויית חמצן תת-עורית.

ניתוח זעיר-פולשני זה עשוי להיראות קשה לביצוע, אך למעשה הוא קל מאוד. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא גורמת לפגיעה מועטה מאוד בעור. מאז שפרסמנו את הטכניקה הזו לראשונה בשנת 2007, קיבלנו שאלות רבות.

מאז פישטנו עוד יותר את ההליך הזה. כדי להפוך את הביצוע לקל עוד יותר ללא שימוש במיקרוסקופ, התחילו בשקילת הארנב הנבחר, הרדימו את הארנב באמצעות תערובת של ketamine ו-xylazine. עקבו אחר הסימנים החיוניים של הארנב; ניתן לזהות בצד הגבי (dorsal) שלושה צרורות כלי דם המספקים דם לאוזן.

אלו הם הצרור המרכזי, שהוא הגדול ביותר ובעל ענפים המתרחבים לכלי דם אחרים; צרור ה-coddle, שבו העורק בדרך כלל קטן מאוד או חסר; והצרור הקרניאלי. בצד הוונטרלי, העור הדיסטלי אינו מקבל אספקת דם מהכלים הפרוקסימליים.

במקום זאת, צרורות כלי דם באונה הגבית של האוזן כוללים ענפים חודרניים רבים דרך הסחוס כדי לספק אספקת דם לעור הוונטרלי הדיסטלי. בחלק מהארנבות, קיים גם כלי דם תת-עורי קטן מאוד בצד הוונטרלי, המספק דם ללא יותר משליש מהעור הוונטרלי. בחתך עורי היקפי פתוח, כמעט ואין דימום מהחתך הוונטרלי.

לפני ההמשך, ודאו כי הארנב אינו מגיב לגירויי כאב באמצעות צביטה בבהוות ובדיקת רפלקס העין, והגנו על עיני החיה על ידי מריחת משחה של דמעות מלאכותיות. שמרו על חום גוף של הארנב במהלך הניתוח באמצעות פד חימום. לאחר מכן, קרצפו את שתי האוזניים ואת העור שמסביבן באמצעות Betadine ואלכוהול, וכסו את הארנב בסדין סטרילי כך שרק שתי האוזניים יהיו חשופות.

אוזן אחת תהפוך לאיסכמית בעוד שהשנייה תשמש כביקורת. הכלים המשמשים לניתוח הם סכין כירורגית עם להב מספר 15, שני זוגות פינצטות, אחת לעור ואחרת לרקמות רכות אחרות. שלושה תפסני מושקית (mosquito clamps), זוג אחד או שניים של מיקרו-מספריים קמורות, זוג מספריים קטנות לחיתוך תפרים ורקמות קשוחות, מחזיק מחטים ומספר מחללי נירוסטה (punches).

התחילו את הניתוח בזיהוי שלושת הגבעולים הווסקולריים (vascular pedicles) על פי העורקים והורידים. בעזרת להב מספר 15, בצעו בזהירות חתך עורי אנכי אחד על הגבעול הווסקולרי המרכזי.

בודד את הווריד המרכזי מהרקמות שסביבו והגן עליו. שלב זה מקיף את הווריד המרכזי לצורך הרחקה.

בצעו דיסקציה של העצב המרכזי כדי לשחררו. הוא נמצא בדרך כלל בצדו של הווריד. חתכו את העצב באמצעות מספריים.

בצעו דיסקציה של העורק המרכזי עד לשחרורו. הוא נמצא בדרך כלל בצד הקרניאלי ועמוק יותר מהוריד; קשרו את העורק וחתכו אותו. נקו את הרקמות מסביב לוריד המרכזי מעל סחוס האוזן.

חתך עור שני מבוצע מעל ה-coddle pedicle. כדי לשמר את הצרור, כלי הדם מופרדים בתהליך דיסקציה ונקיפים לצורך הגנה.

זה שימושי במיוחד כאשר הווריד גדול, כפי שניתן לראות בארנב זה. צרו מנהרה בין נקודה זו לבין החתך הראשון. גזרו את הרקמות התת-עוריות מעל הסחוס.

חתך עור שלישי מבוצע מעל הצרור הקראניאלי. צרור זה כולו נקשר ומופרד. העור מעל הצרור השלישי נחתך.

וריד זה קרוב מאוד לעור, לכן אין לחתוך עמוק מדי. לאחר מכן מנתקים את כל צרור כלי הדם, קושרים אותו ומפרידים אותו. בעזרת סכין ומספריים, צרו תעלה תת-עורית.

שלוש החתכים קוטעים את כל הרקמות התת-עוריות, השרירים, העצבים והענפים כלי הדם הקטנים. יש להשתמש בדיסקציות חדות וקהות נוספות כדי לנקות את הבסיס, כך שיישאר סחוס חשוף ברוחב של כ-5 עד 10 מילימטרים. ניתן לשלוט בדימומים באמצעות לחץ של גזה.

אין צורך בכוייה חשמלית. העור בתוך האוזן אינו נחתך מכיוון שאינו עשיר בכלי דם. ההיבט החשוב בפרוצדורה זו הוא הבטחת דיסקציה נאותה של התעלה התת-עורית תוך הגנה על כלי הדם.

פרוצדורה זו לא אמורה להיות קשה. לאחר המוסטזיס, שלוש חתכי העור נסגרים באמצעות תפרים במידה 4-0 או 5-0 ונבדקים שוב כדי לוודא שחתכי העור סגורים כראוי ושאין דימום. לבדיקת תרופות לפצעים, ניתן ליצור ארבעה פצעי עור מעגליים בעובי מלא בצד הוונטרלי של כל אוזן באמצעות מחסן (punch) מפלדת אל-חלד בקוטר 6 מילימטר.

המרחק בין הפצעים הוא לפחות 20 עד 30 מילימטרים. העור והפריכונדריום (perichondrium) בתוך ה-punch מוסרים, אך הסחוס אינו נפגע. לאחר יצירת הפצעים בשתי האוזניים, כסו אותם זמנית בגזה והעבירו את הארנב לחדר הפרוצדורות לצורך יישום התרופה.

לאחר ניקוי הפצעים מקרישי דם, יש למרוח את תרופות הבדיקה והביקורת. הפצעים מכוסים בחבישה אוקלוסיבית למניעת התייבשות. בעת השוואה בין שתי תרופות, יש למרוח כל תרופה הן על פצע פרוקסימלי והן על פצע דיסטלי.

פעולה זו משמשת כבקרה להבדלים בקצבי ריפוי הפצעים באוזן הדיסטלית והפרוקסימלית לאחר הניתוח. האוזן האיסכמית הופכת בדרך כלל לקרה וכחולה (ציאנוטית), עם תחושה מופחתת לדיסטלית לחתך. בצקת קלה עשויה להופיע למשך מספר ימים, אך היא נעלמת מעצמה ואינה דורשת טיפול.

הדופק בעורק המרכזי אינו מורגש. תנועת האוזן מופחתת, אך לא נעלמת לחלוטין מכיוון שחלק מהשרירים עדיין מחוברים לבסיס האוזן. אם התעלה נוצרה בצורה נכונה, ניתן לראות שקע ברור בין החתכים.

מדבקת פנטניל מודבקת לעור הגב להקלה על כאבים פוסט-אופרטיביים אפשריים. טמפרטורת העור נמדדת מדי יום בכל אוזן באמצעות מדחום. זרימת הדם באוזן נמדדת באמצעות מד מתח חמצן טרנס-cutנאומי או מד זרימה בלייזר דופלר.

לאחר שבוע, ניתן להסיר את התפרים של חתכי העור מ-2007. הפרוצדורה בוצעה ביותר מ-70 ארנבים. מספר זה כולל 23 ארנבים סוכרתיים וארבעה ארנבים מבוגרים.

ההבדלים בטמפרטורה בין האוזן הלא-איסכמית לאוזן האיסכמית נעו בין 1 ל-10 מעלות צלזיוס, כאשר רוב השפנפנים היו בטווח של 2 עד 6 מעלות צלזיוס. הפרש הטמפרטורה היה גבוה יותר בימים הראשונים לאחר הניתוח, ירד בהדרגה לאחר היום ה-15, אך נשמר עד לסוף חודש אחד. שש דגימות רקמה נלקחו מכל אוזן ותכני פוספט בעל אנרגיה גבוהה נמדדו באמצעות HPLC, הן עבור TP והן עבור אנרגיה כוללת.

הריכוזים היו גבוהים יותר באוזניים הנורמליות מאשר באוזניים האיסכמיות. זמני ריפוי הפצעים היו תמיד ארוכים יותר באוזן האיסכמית מאשר באוזן שאינה איסכמית בבעלי חיים שאינם סוכרתיים ובבעלי חיים סוכרתיים ב-15 ארנבים שאינם סוכרתיים. זמן הריפוי הממוצע היה 17.8 ימים באוזן שאינה איסכמית לעומת 21.8 ימים באוזן האיסכמית.

בבעלי חיים סוכרתיים בני 10-12 חודשים, זמן הריפוי הממוצע היה 18.3 ימים באוזן הלא-איסכמית בהשוואה ל-29.1 ימים באוזן האיסכמית. בכל בעלי החיים, כולל ארנבים סוכרתיים, חתכי העור הגבירו באופן תקין ללא סיבוכים בארנבים. בזמן סוכרת של 24 חודשים, לפצעים בבטן (ventral) יש נטייה גבוהה יותר להידבק בזיהומים.

מאפיין זה הופך אותו לדומֶה יותר לפצעים סוכרתיים אנושיים. דגימה היסטולוגית מראה את הריפוי של התעלה התת-עורית, שבה השריר חסר ומוחלף ברקמות סיביות. עם זאת, העור נותר שלם.

בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור להתייחס לבעלי החיים באופן הומני. לאחר רכישת המיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו בפחות משעה אחת. השתמשנו בטכניקה זו ביותר מ-70 ארנבות, כולל 23 ארנבות סוכרתיות, ללא סיבוכים כגון דימום או זיהום.

זהו הליך בטוח מאוד בעקביות לביצוע לפי פרוטוקול זה. ניתן לבצע שיטות נוספות, כגון איסכמיה נוספת, נזק עצבי והזרקת חיידקים, כדי להשיב על שאלות נוספות הנוגעות לאולקוסים וסקולריים, פצעי לחץ ונוירופתיה סוכרתית.