הכנה ואיון פעולה של הפתוגן מוצרי Double מנת באפי Coat טסיות דם באמצעות מערכת הדם ליירט

בסרטון זה, יוכנ תרכיז טסיות במינון כפול ממאגר של שבע שכבות Buffy coat, ולאחר מכן יעובד באמצעות Intercept. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה של אופן הייצור של תרכיז טסיות במינון כפול שעבר נטרול פתוגנים. ראשית, נציג סקירה סכימטית ולאחריה הדגמה.

שבע יחידות ראשונות של דם מלא שנתרם עוברות סבב בצנטריפוגה ומופרדות כדי להפיק שבע יחידות של שכבת Buffy coat העומדות ביעדי הנפח וההמטוקריט. שכבות ה-Buffy coat מחוברות, מאוגדות ועוברות צנטריפוגה. לאחר מכן, תרחיף הפלטלטים מופרד מתאי הדם האדומים שנותרו כדי להפיק ריכוז פלטלטים במינון כפול, לצורך נטרול פתוגנים ולבקוציטים.

ריכוז טסיות במינון כפול מטופל באמצעות מערכת ה-intercept, המבצעת קשירה צולבת של חומצות גרעיניות. בסופו של דבר, הליך זה מניב שתי מנות טסיות טיפוליות בעלות איכות in vitro מקובלת לאורך שבעה ימי אחסון, כפי שנקבע על ידי הערכה של pH, גלוקוז, לקטט, PO₂ ו-PCO₂, ובדיקת צמידות. טכנאי ממרכז הדם ידגים את ההליך, ואנו נתאר את דרישות העיבוד.

ראשית, ודא שריכוז הטבחית במינון כפול עומד במפרטי העיבוד של intercept של 300 עד 420 milliliters. נפח של 2.5 עד שבע פעמים 10¹¹ של מינון הטבחית, ופחות מארבע פעמים 10⁶ per milliliter של תאי דם אדומים. התחל הליך זה עם שבע יחידות של דם מלא שנאספו בערכות איסוף top bottom של 450 milliliter.

הניחו את יחידות הדם בכוסות צנטריפוגה ובצעו סבב מהיר (hard spin) ב-4,880 RCF למשך 11 דקות בטמפרטורת החדר עם הגדרת בלימה B five, בהתאם להוראות היצרן. לאחר הסבב, הדם יופרד לשלוש שכבות: תאי דם אדומים, שכבת הבאפי (buffy coat) ופלזמה. העבירו את הפלזמה לשקית הלוויין העליונה ואת תאי הדם האדומים לשקית הלוויין התחתונה, והשאירו את שכבת הבאפי, בנפח של כ-48 milliliters ו-37% hematocrit, במיכל האיסוף.

הניחו את שכבות ה-Buffy coats על מנער פלטלטים (platelet agitator) בטמפרטורה של החדר למשך לילה בחיבור סטרילי, שבע שכבות Buffy coats ו-300 milliliters של SSP בתוספת תמיסת תוסף לפלטלטים (platelet additive solution). בתצורת ניקוז, כאשר תמיסת התוסף נמצאת למעלה, סגרו את הצינור בין תמיסת התוסף לשכבת ה-Buffy coat הראשונה כפי שמוצג כאן. פתחו את הריתוכים בין יחידות ה-Buffy coat ואפשרו להן להתנקז אל מיכל ה-Buffy coat האחרון.

בשלב הבא, פתחו את התסביב ואת הריתוך שבין תמיסת התוסף לשכבת ה-buffy coat הראשונה, ואפשרו לכמות של כשליש מתמיסת התוסף, כ-100 milliliters, להישטוף דרך כל אחד ממכלי שכבת ה-buffy coat באופן רצופי לפני סגירת התסביב; חזרו על השטיפה פעמיים נוספות, כאשר בכל פעם נעשה שימוש בכ-100 milliliters של תמיסת התוסף. נתקו את מכל ה-buffy coat המרוכז מהמכלים הריקים. נפח ה-buffy coat המרוכז, כולל תמיסת התוסף, אמור להיות כ-600 milliliters.

הניחו את שכבות הבאפי (Buffy coats) המאוחדות על שייקר למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, חברו מכל אחסון טסיות עם מסנן להפחתת לוקוצטים (leco reduction filter) מובנה לשקית המכילה את מאגר שכבות הבאפי. הניחו את שכבות הבאפי המאוחדות ואת מכל אחסון הטסיות בצנטריפוגה וסובבו במהירות של 462 RCF למשך תשע דקות ו-20 שניות.

בעקבות הסבב, העבירו את תרחיף הפלטלטים דרך מסנן Luca reduction אל תוך מיכל אחסון הפלטלטים. התוצאה היא ריכוז פלטלטים במינון כפול המכיל כ-7×10¹¹ פלטלטים ב-420 milliliters, אשר ניתן להעבירו תהליך לביטול פעילות פתוגנים באמצעות intercept לביטול פעילות פתוגנים. ריכוז הפלטלטים במינון הכפול מטופל באמצעות ערכת עיבוד intercept, המורכבת ממיכל antoin, מיכל הארה ושני מיכלי אחסון.

חבר את מיכל תרחיף הטבחונים למיכל ה-Amin בערכת העיבוד של ה-intercept. לאחר מכן, תלה את הטבחונים. שבור את הקנולה התחתונה במיכל ה-amin כדי לאפשר לתמיסה לזרום לתוך מיכל ההארה.

לאחר מכן, שברו את הקנולה העליונה במכל ה-Amin כדי לאפשר לטבקיות לזרום דרך מכל ה-Amin אל מכל ההארה. ערבבו בעדינות את תערובת הטבקיות וה-am tosin. לחצו קלות על מכל ההארה כדי להוציא ממנו את האוויר.

אטמו את הפיתול בין מיכל ההארה למיכל האמאטו כך שלא יותר מארבעה סנטימטרים של פיתול יבלטו ממיכל ההארה. הסירו והשליכו את המכלים הריקים. הניחו את ערכת העיבוד במכשיר ההארה, כאשר מיכל ההארה נמצא בתא הגדול מצד שמאל והמארגן נמצא בתא הקטן מצד ימין.

סרוק את מזהה התרומה. קוד מוצר ועיבוד. הגדר את מספר האצווה במאיר.

סגרו את המכסה המתכתי ואת המגירה. לחצו על start כדי להתחיל את ההארה. המאיר מספק מנה מבוקרת של אור UVA לתערובת פלטלט-אמין במכל ההארה.

אמין נקשר בין זוגות הבסיסים של חומצות הגרעין של פתוגנים, שעשויים להיות נוכחים ביחידת טבקיות הדם. עם חשיפה לאור, נוצרים קשרי צלב קבועים הנועלים את ה-DNA או ה-RNA יחד, כך שהפתוגנים אינם יכולים להתרבות עוד ולגרום למחלה אצל מקבל מוצר הדם. לאחר ההארה, הסר את ערכת העיבוד.

בשלב הבא, הוציאו את המכלים מהארגז, ותלו את הלוחיות ואת ערכת העיבוד. שברו את הקנולה בפתח היציאה של מכל התאורה ואפשרו ללוחיות לזרום אל מכל ה-CAD. בתוך מכל ה-CAD נמצאה פרוסה (wafer) עם חרוזי פוליסטירן מקרו-נקבוביים אימוביליזים המפחיתים את רמות האמין השארי במוצר הדם.

הקפידו שלא לכופף את פרוסת ה-CAD. העבירו את האוויר ממכל ה-CAD אל מכל ההארה. אטמו את הפיתול ליד פתח הכניסה של מכל ה-CAD.

הסיר והשליך את מיכל התאורה הריק. הנח את מיכל ה-CAD יחד עם מיכלי האחסון המחוברים אליו על מערבב טסיות למשך שש עד 16 שעות. פעולה זו תביא להפחתה של ה-amlin השיורי לריכוז של פחות או שווה ל-2 µM.

לאחר הטיפול ב-CAD, הוצא את יחידות הטסיות מהמערבל, תלה את הטסיות, שבור את הקנולה בפתח היציאה של מכל ה-CAD ואפשר לטסיות לזרום אל שני מכלי האחסון. לאחר מכן, הוצא את האוויר ממכלי האחסון. אטום את הצינור מעל מחבר ה-Y והסר את מכל ה-CAD.

התוצאה היא שני תרכיזי טסיות שעברו אינאקטיבציה של פתוגנים לצורך הערכת תפקוד טסיות in vitro. נקבעו מינון הטסיות, pH, PO2, ייצור לקטט וצריכת גלוקוז של הדגימות. תרכיזי הטסיות נבדקו לאורך שבעה ימי אחסון.

איור זה מציג את מנת הפלטלטים ההתחלתית הממוצעת של ריכוז הפלטלטים בכפל מנה לפני טיפול ה-intercept, ואת מנת הפלטלטים הממוצעת בכל אחד מהמוצרים המפוצלים שעברו טיפול לאורך שבעת ימי האחסון. כפי שניתן לראות כאן, אובדן הפלטלטים במהלך האחסון היה כ-9%. הפחתה זו אינה שונה מהאובדן הצפוי של פלטלטים במהלך אחסון של פלטלטים קונבנציונליים. על פי הדרישות האירופיות, ה-pH של הפלטלטים חייב להישאר מעל 6.4 עד לסוף חיי המדף.

במהלך העיבוד, ה-pH של תרכיזי טסיות יורד מעט בהתאם לנפח ריכוז הטסיות ולחדירות הגזים של מכל אחסון הטסיות. איור זה מציג את ה-pH של מוצרי הטסיות המופרדות לאורך שבעה ימי אחסון; במהלך האחסון, ה-pH יציב ונשמר היטב במסגרת דרישות העיבוד. מטבוליזם אירובי אמור להמשיך להתרחש בטסיות המאוחסנות, והוא מהווה אינדיקטור ליכולתן של הטסיות לתפקד in vivo לאחר עירוי למטופל.

צריכת ה-O2 והייצור של CO2 בטסיות מעידים על נשימה מתמשכת של הטסיות שנלכדו במיכל ה-PL 24 10 במהלך שבעה ימי אחסון. באופן דומה, מטבוליזם אנאירובי אמור להימשך בטסיות מאוחסנות. לפיכך, צריכת גלוקוז וייצור לקטט מהווים גם הם אינדיקטורים ליכולת התפקוד של הטסיות לאחר עירוי.

שתי דמויות אלו מראות את רמות הלקטט והגלוקוז לאורך שבעה ימי אחסון. צריכת הגלוקוז וייצור הלקטט של הפלטלטים עקביים זה עם זה. במהלך שבעת ימי האחסון, בחמש יחידות היו רמות גלוקוז של פחות מ-1.11 millimoles per liter, המהוות את הגבול התחתון של בדיקת הגלוקוז.

הכנת ה-Buffy coat ותיקוף האיחוד הניבו תרכיזי טסיות העומדים בקריטריוני הכניסה לטיפול ב-intercept, ובמיוחד מבחינת נפח, מספר טסיות, יחס פלזמה וזיהום בתאי דם אדומים. היחידות הסופיות עומדות בקריטריוני התיקוף לאורך שבעה ימי אחסון, כולל מינון טסיות ו-pH. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטת הכנת ה-buffer code הקונבנציונלית, המייצרת תרכיז טסיות במינון בודד, הוא שהיא ממקסמת את תנובת הרכיבים מאיסופי דם, מפחיתה הוצאות תפעוליות על ידי שימוש בטכניקת מינון כפול ומשפרת את בטיחות המטופל באמצעות השבתה של פתוגנים המועברים בעירוי.