Assay העדפות אור לחקר Photobehavior מוסדר מולדת ויממה ב דרוזופילה זחלים

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לבחון את התנהגות הצילום המולדת והשעון הביולוגי של לבה דרוזופילה באמצעות מבחן העדפה כהה בהיר. זה מושג על ידי גידול זחלי הניסוי בתנאי חושך בהירים מוגדרים כדי ליצור שעון ביולוגי ראשוני בזחלים. לאחר מכן, הזחלים עוברים לחושך קבוע, מה שמאפשר לשעון הביולוגי של הזחל לרוץ בחופשיות.

ברגע שהגיעה לשלב ההזנה של L, הלבה ממוינת לקבוצות כדי לבחון את העדפת האור שלה בנקודות זמן צירקדיות שונות. מתקבלות תוצאות המראות העדפת אור מולדת וצירקדית על סמך חישוב מדד העדפה והשוואה בין נקודות זמן וקבוצות ניסוי. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי הוויסות המולד והשעון הביולוגי של חישת אור ועיבוד התנהגות הצילום, ניתן ליישם אותה גם על מערכות אחרות כגון ריח, קסציה, כימותרפיה, מוניות תרמו.

כמו כן, ניתן לשנות אותו למבחני למידה וזיכרון. הדגמת ההליך תהיה אלינה ו-BMA לסטודנטים לתארים מתקדמים מהמעבדה שלי לאסוף ביצים, לאפשר לזבובים בוגרים להזדווג להטיל במשך 12 שעות על קבצים טריים ולהעביר אותם לבקבוקונים חדשים. המשיכו להעביר את הבוגרים כל 12 שעות למחזור אור של 12 שעות ו-12 שעות חושך.

שמור את אוספי הביצים של 12 שעות בחממה. לצורך הניסוי, גדלו את החיות בשלב המוקדם של שלושת הזחלים. אלה הם האכלות הזמינות 84 עד 108 שעות מהביצה.

הנחת בימוי נכון של LAE היא קריטית להצלחת הניסוי. מאז סוף L 3, LAE שינתה את התנהגות הצילום כדי לבדוק את המרכיבים הצירקדיים של התנהגות חזותית. 48 שעות לפני הבדיקה ורגע לפני הזחלים הסובייקטיביים, שחר, הכניסו את הזחלים שנאספו לקופסת קרטון.

לאחר מכן העבירו את הקופסה לאינקובטור חושך קבוע למשך 48 שעות עד לניסוי, הזחלים הללו חייבים להישאר ללא הפרעה במרחב הייעודי שלהם. מכינים את המכסה של צלחת פטרי של תשעה סנטימטרים בעזרת ריבוע של 20 ס"מ המחולק לארבעה רבעים. כמדריך.

הדביקו 10 סנטימטרים ריבועים של נייר אלומיניום על רבעים מנוגדים וכסו אותם בסרט שחור. הקפד לכסות את גבול המכסה. הדבק הבא, ריבוע של 20 ס"מ המחולק לארבעה רבעים מתחת למקור האור שעל השולחן.

סמן את היקף צלחת הבדיקה על הסדין כדי לשמש כמדריך לתזוזה עקבית. התקן LED lamp מעל צלחת הפטרי באמצעות מעמד תומך ברזל. כוונן את הגובה בצורה שכל לוחית הבדיקה מוארת בצורה הומוגנית.

כוונן את עוצמת האור באתר בדיקה בין 350 ל-760 לוקס על ידי כוונון נוסף של גובה המנורה או באמצעות ספק כוח מתכוונן. חדר הניסויים זקוק לתאורת אור אדום וחייב להיות באותה טמפרטורה כמו המקום ממנו מגדלים את החיות. הבקבוקונים גדלו יומיים בחושך מתמיד.

אוספים את הלבה במזונם בעזרת מרית מחמשת המילימטרים העליונים של המזון. מורחים את האוכל על הצד החיצוני של מכסה צלחת פטרי. מוסיפים מעט מים לאוכל ומערבבים אותו בעדינות עם המרית.

הוסף טיפת מי ברז לכלי חדש בעזרת מברשת. מעבירים את הזחלים לטיפת המים כדי לשטוף אותם. לאחר מכן השתמש במכחול רטוב כדי לאסוף את הזחלים באמצעות המכחול הרטוב.

בחר רק את ההזנה המוקדמת L שלושה זחלים והימנע משיטוט מאוחר L שלושה זחלים. העבירו את הזחלים שנבחרו למרכז צלחת בדיקה. להאכיל L שלושה זחלים יש כדורים קדמיים פתוחים ובולטים כלפי חוץ.

בצורה דמוית אצבע. לכדורים האחוריים שלושה פתחים כל אחד וארבע קבוצות של שערות מסועפות גדולות. בלוטות הרוק משתרעות עד לחלק הבטן השני.

לאחר שהונחו 30 זחלים במרכז צלחת הבדיקה, מכסים אותה במכסה המוכן. הפעל את ה-LED lamp. הפעל טיימר ותן לזחלים לנוע בחופשיות על הצלחת למשך חמש דקות.

לאחר מכן הסר במהירות את המכסה וספור את מספר הזחלים בחושך וברבעים הבהירים. סימון המיקום של כל לבה יכול להקל על הספירה. צילום מהיר יכול גם לעזור לזחלים המראים העדפת אור לא ברורה כמו זחלים הזוחלים על הקירות או השאלה לאגר יש לספור כהעדפה ניטרלית ולהוסיף למספר הכולל של הזחלים כאשר מחשבים את מדד העדפת האור.

לאחר ספירת הזחלים, השליכו את הצלחת והשתמשו בלוחית בדיקה חדשה לניסוי הבא. לאחר ביצוע 10 עד 15 ניסויים לכל גנוטיפ, המשך בניתוח לפי הפרוטוקול. ההעדפה הכהה הבהירה של לבה קנטון ES הושוותה בשני זמנים צירקדיים שונים.

CT אפס ו-CT 12, באופן סובייקטיבי, זחלי שחר ושקיעה או נאנקים במשך 48 שעות בתנאים סטנדרטיים ואז עוברים לחושך קבוע למשך שלושה ימים. בדיקת חושך בהיר מתחת ל-350 לוקס גילתה כי הרגישות לאור הייתה גבוהה יותר בזחלים שנבדקו ב-CT אפס בהשוואה לזחלים שנבדקו ב-CT 12. באמצעות נוסחה זו, העדפת החושך של CT אפס לבה הייתה 0.52 בהשוואה ל-0.36.

זחלי CT 12 המשווים את האינדקסים באמצעות בדיקת wilcoxon מייצרים ערך P משמעותי של 0.023. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבדוק את העדפת האור של זחל טרופה במעגלים שונים ובנקודות זמן שונות למטרה זו. אתה אמור להיות מסוגל להתאמן בשלב F 3 oph זחל, לבדוק את ההתנהגות הפוטופובית שלהם ולחשב את מדד העדפת האור להשוואה סטטיסטית.