קופסית Serotyping של Streptococcus pneumoniae שימוש תגובת Quellung
24 בפברואר 2014
תגובת Quellung היא טכניקת תקן זהב עבור serotyping Streptococcus pneumoniae. טכניקה זו מנצלת מיקרוסקופ ונסיובי pneumococcal הספציפי ומשמשת בדרך כלל התייחסות ומעבדות מחקר ברחבי העולם.
המטרה הכוללת של הליך זה היא לבצע סטריאוטיפ קפסולרי של סטרפטוקוקוס פנאומוניה או פנאומוקוק באמצעות תגובת הדיכוי זה מושג על ידי חיסון ראשון של מרק עירוי לב בתרבית טרייה וטהורה של פנאומוקוק. בשלב השני, טיפת חיסון מועברת לשקופית מיקרוסקופ זכוכית.
לאחר מכן, סרום אנטי מתווסף בנפח שווה על השקופית. בשלב האחרון, שתי הטיפות מעורבבות ומניחים החלקת כיסוי מעל המתלה. בסופו של דבר, ניתן לראות את ההשעיה תחת ניגודיות פאזה כדי לצפות בתגובת ריאות הדיכוי החיובית או השלילית.
שיטה זו מדגימה את שיטת תקן הזהב של פנאומוקוק syp. השיטה פשוטה, קלה לביצוע וקלה לפרשנות. הדגמה חזותית של שיטה זו חשובה מכיוון שאנשים חדשים בטכניקה זו עשויים להתקשות לזהות מהי צפיפות תאים מתאימה לביצוע מבחן ה-qualm.
התחל בשימוש בלולאה חד פעמית סטרילית של מיקרוליטר אחד כדי לקבל טאטוא קטן של תרבית טהורה טרייה בן לילה של פנאומוקוק הגדלה על צלחת אגר דם סוסים מוצקה ולא סלקטיבית לחסן את הפנאומוקוק ב-100 מיקרוליטר של מרק עירוי לב. התרחיף צריך להיראות עכור בעליל ולערבב בעדינות את הצינור כדי לחליב את תמיסת התא. השתמש בלולאה חדשה של מיקרוליטר כדי להעביר טיפה של החיסון למיקרוסקופ זכוכית.
החלק לאחר מכן, הנח החלקת כיסוי עגולה קטנה מעל המתלה ובדוק את צפיפות המתלה בניגודיות פאזה לפעמים בהגדלה של 400. אם החיסון כבד מדי, יש לדלל את תרחיף התאים עם מרק נוסף ולערבב בעדינות את התאים שוב אם החיסון קל מדי. לדוגמה, אם יש פחות מ-50 תאים גלויים, הוסיפו עוד חיידקים לתרחיף התאים וערבבו שוב בעדינות.
עם ניסיון. ניתן לשפוט את צפיפות מתלה התא על ידי ניעור והחזקת המתלה עד לאור שבו הוא אמור להיראות עכור בעליל. כאשר מסתכלים תחת המיקרוסקופ, תמיסת התא צריכה להיות צפופה כל כך.
לאחר שהושג דילול תאי החיידקים האופטימלי, העבירו כמיקרוליטר אחד של החיסון למיקרוסקופ הזכוכית. החלק הבא. בעזרת לולאה חדשה מוסיפים נפח שווה של טמפרטורת החדר.
אנטי סרום על השקף ולערבב היטב את שתי הטיפות. בעזרת הלולאה, הניחו מיד החלקה קטנה על המתלה, והקפידו לא לגעת בטיפה עם המלקחיים. לאחר מכן צפה במתלים תחת ניגודיות פאזה כפי שהודגם זה עתה.
תגובת ריאות שלילית נצפית כאשר נצפית נפיחות מועטה עד ללא נפיחות של תאי הפנאומוקוק. בדומה לבקרה השלילית, תרחיף תאי פנאומוקוק ללא תוספת אנטיסרה. תגובת ריאות חיובית מתרחשת כאשר נוגדן ספציפי מסוג נקשר לקפסולה של הפנאומוקוק מה שמוביל לשינוי במקדם השבירה שלו.
כאשר מסתכלים תחת ניגודיות פאזה, החיידקים נראים נפוחים וגלויים יותר. אל תשכח שכאשר אתה עושה את ההליך הזה אתה למעשה עובד עם מיקרואורגניזמים חיים. מסיבה זו, עליך להיזהר לעקוב אחר נוהלי מעבדה טובים, ללבוש ביגוד מגן, ציוד המעבדה המתאים ולהשליך את כל הציוד והריאגנטים בסוף התהליך בבטחה.
לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך כ -10 דקות אם היא מבוצעת כראוי. לאחר צפייה בהליך זה, אמור להיות לך מושג טוב כיצד לסרוק את הפנאומוקוק באמצעות תגובת qua lrange. טכניקה זו חשובה להבנת אפידמיולוגיה של פנאומוקוק, הן בהובלת האף והן במחלה פולשנית.
סקירה כללית
תגובת קוולנג (Quellung reaction) היא טכניקה חיונית לקביעת הסוג הסורולוגי של Streptococcus pneumoniae, הנמצאת בשימוש נרחב במעבדות. שיטה זו כוללת שימוש בantisera ספציפיים ובמיקרוסקופיה כדי לצפות בתגובה של הקפסולות של הפנומוקוקים.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום המדע
- מיקרוביולוגיה
- אימונולוגיה
- דיאגנוסטיקה קלינית
רקע
- תגובת Quellung מוכרת כ"gold standard" (סטנדרט הזהב) לקביעת הסוג הסרולוגי של פנומוקוקים.
- היא מסייעת בהבנת האפידמיולוגיה של הפנומוקוקים.
- שיטה זו חיונית הן ליישומים מחקריים והן ליישומים קליניים.
- טכניקה נכונה היא קריטית לקבלת תוצאות מדויקות.
מטרת המחקר
- לביצוע סיווג סרוטיפי של קפסולת Streptococcus pneumoniae.
- להדגמה יעילה של שיטת תגובת Quellung.
- למתן מדריך חזותי לזיהוי צפיפות תאים מתאימה.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- החדרה של תרבית טהורה של פנומוקוקים למצע צמיחה מסוג heart infusion broth.
- העברת האינוקולום לסרטית מיקרוסקופ.
- הוספה של אנטי-סרום וערבוב של הטיפות.
- תצפית תחת מיקרוסקופ ניגוד מופע (phase contrast).
תוצאות עיקריות
- תגובת Quellung חיובית מתאפיינת בנפיחות של תאי פנומוקוקים.
- תגובה שלילית מתאפיינת בנפיחות מועטה או בהיעדרה של נפיחות.
- צפיפות תאים נכונה היא קריטית לצורך פענוח מדויק.
- ניתן לבצע את הטכניקה בתוך כ-10 דקות.
מסקנות
- תגובת ה-Quellung היא שיטה פשוטה ויעילה לקביעת סוגים סרולוגיים (serotyping).
- הבנת טכניקה זו חיונית למחקר באפידמיולוגיה של פנומוקוקים.
- פרקטיקות מעבדה נכונות הן חיוניות בעת עבודה עם מיקרואורגניזמים חיים.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית למסגרת ניהולית
סיווג סרוטי קפסולרי של Streptococcus pneumoniae באמצעות תגובת Quellung הוא בסיסי למחקרי השפעת חיסונים ולמעקב אפידמיולוגי במחקר ופיתוח ביו-פרמצבטיים. שיטה זו, הנחשבת ל"תקן הזהב", מאפשרת זיהוי מדויק של סרוטיפים פנומוקוקליים, ובכך תומכת בהחלטות לגבי פורטפוליו בפיתוח חיסונים ובמחקר על מחלות זיהומיות. סיווג סרוטי אמין מספק רציפות תרגומית משלב הגילוי ועד להערכה קלינית של מועמדים לחיסונים.
יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח בביופארמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרות
- מאפשר זיהוי חסון של סרוטיפים של פנומוקוקים לצורך תיקוף יעדים במחקר חיסונים.
- תומך בהפחתת סיכונים מכניסטיים על ידי אישור גיוון אנטיגני הרלוונטי לתכנון חיסונים.
- מסייע בביטחון חיזוי בבחירת סרוטיפים להמשך מחקר או להכללה בפורמולציות של חיסונים.
סריקה ופיתוח בדיקות (Assay Development)
- מספק סבב עבודה סטנדרטי וניתן לשחזור לקביעת סרוטיפ בקרב בידודים שונים.
- מספק תוצאות כמותיות ברורות (נפיחות חיובית/שלילית) לצורך תיקוף הבדיקה.
- מבטיח מוכנות לסריקה עבור ניתוח מדגמים קליניים או אפידמיולוגיים בסביבה של תפוקה גבוהה.
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- מתאימה נתונים של סרוטיפים למודלים אפידמיולוגיים רלוונטיים למחלה לצורך מחקר תרגומי.
- תומכת ברצף מהגילוי במעבדה ועד למחקרי יעילות של חיסונים בשלב הפרה-קלני.
- מאפשרת קידום של מועמדים לחיסון תוך התאמה לסיכונים, בהתבסס על שכיחות כיסוי הסרוטיפים.
שילוב תהליכי עבודה וצינורות עיבוד
תגובת ה-Quellung משתלבת בממשק שבין הגילוי המוקדם למחקר תרגומי, ומספקת נתונים קריטיים על הסרוטיפ לצורך בחירת מטרות לחיסונים ומידול אפידמיולוגי.
- ביולוגיה של גילוי: תומכת בבדיקת השערות בנוגע להתבצעות הסרוטיפים ולרלוונטיות של מטרות החיסון.
- סריקה: מספקת תוצרי סרוטיפינג הניתנים לשחזור ומאושרים עבור זרימות עבודה המשכיות.
- אנליטיקה: מפיקה תוצאות חיוביות/שליליות ברורות להשוואת השכיחות של סרוטיפים בין דגימות.
- מחקר תרגומי: מספקת מידע להערכות כיסוי של חיסונים בשלבים פרה-קליניים וקליניים על בסיס נתוני סרוטיפים.
- שימוש חוזר ארגוני: משמשת כפלטפורמה הניתנת לשימוש חוזר לצורך מעקב שוטף וניהול פורטפוליו של חיסונים.
השפעה תפעולית ועסקית
- ערך מדעי: מגביר את הביטחון החזוי בבחירת מטרות לחיסון ובמידול אפידמיולוגי.
- ערך תפעולי: מספק סרוטיפוזינג (serotyping) סטנדרטי, מהיר וניתן להרחבה עבור מערכי דגימות מגוונים.
- ערך אסטרטגי: מאפשר קבלת החלטות מושכלת של "המשך/עצור" (go/no-go) עבור קידום מועמדים לחיסון והקצאת משאבים.
- השפעה על הפורטפוליו: תומך בתעדוף מותאם סיכונים של פיתוח חיסונים בהתבסס על כיסוי ושכיחות הסרוטיפים.
שיקולי יישום
- דורש מומחיות טכנית במיקרוסקופיה ובטיפול בתרביעי חיידקים חיים.
- דורש גישה לנוגדנים (antisera) מתוקפים ולתשתית של מיקרוסקופיית ניגודיות פאזה (phase contrast microscopy).
- מחייב סטנדרטיזציה בין צוותים לצורך פרשנות עקבית של תגובות חיוביות ושליליות.
- ניתן להתאמה להגדרות מעבדה שונות עם פרוטוקולי בטיחות ביולוגית מתאימים.
- תלוי באיכות הנוגדנים (antisera) ובמיומנות המפעיל לקבלת תוצאות מהימנות.
