Murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק דרך Orthotopic הרכבה עם קרצינומה של תאי השחלות
9 בדצמבר 2016
כדי להבהיר את תהליך רב שלבי של הפצת הצפק של קרצינומה השחלות, המחקר הנוכחי מציג מודל ניסיוני בעכברים של התפתחות גידולים המקורי וגרורות הצפק באמצעות חיסון orthotopic עם תאים סרטניים אלה.
המטרה הכוללת של הליך זה היא לצפות בהתפתחות של היווצרות גידול מקורי וגרורתי בקרצינומה של שחלות אפיתל. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הגינקולוגי האונקולוגי, כגון הבנת הביולוגיה של הגידול או דפרמנטציה של הצפק. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שחיסון אורוספטי של קרצינומה של שחלות אפיתל אנושי, או תאי EOC, מבוצע באמצעות גישה רטרופריטונאלית שגדלה עם צד גבי. כדי להכין קו תאי קרצינומה של תאים שקופים בשחלות אנושיות, צלחת ותחזק תאי ES2 במדיום RPMI-1640 עם 10% FBS ו-PenStrep ב-37 מעלות צלזיוס, ו-5% CO2. בשלב הצמיחה הלוגריתמית, הסר את המדיום הישן מהתרבית והשתמש בשלושה עד ארבעה מילימטרים של PBS כדי לשטוף את התאים פעם אחת. לאחר מכן, הוסף מילימטר אחד של טריפסין/EDTA ונדנד את הכלי כדי לכסות את כל השכבה החד-שכבתית. הסר והשליך את תמיסת הטריפסין והחזיר את התאים לחממה למשך שלוש עד חמש דקות. לאחר בחינת התאים במיקרוסקופ כדי לוודא שהתאים התנתקו וצפים, הוסיפו חמישה מילימטרים של מצע גידול טרי המכיל סרום כדי לנטרל את הטריפסין ולהשעות מחדש את התאים לפני העברתם לצינור חרוטי בקוטר 15 מילימטר. צנטריפוגה המתלה ב 300 פעמים G וטמפרטורת החדר
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
מחקר זה מציג מודל ניסויי בעכברים להבהרה של התהליך רב- השלבי של התפשטות רבובית של קרצינומה שחלתית. המודל כולל הזרקה אורטוטופית של תאי גידול כדי לבחון את התפתחות הגידול המקורי ואת הגעת הגלייות הרבוביות העוקבות.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום המדע
- אונקולוגיה
- מודלים ניסיוניים
- מחקר גרורות
רקע
- קרצינומה שחלתית ידועה בהתנהגות גרורתית מורכבת.
- הבנת הפריצה הפריטוניאלית היא קריטית לשיפור אסטרטגיות הטיפול.
- מודלים של עכברים משמשים בדרך כלל לחקר התקדמות הסרטן.
- מחקר זה נועד לספק תובנות לגבי מנגנוני הגרורות.
מטרת המחקר
- להבהיר את המנגנונים של גרורות פריטוניאליות בקרצינומה שחלאית.
- לפתח מודל עכברי מהימן לחקר התנהגות גידולים.
- לחקור את תפקידה של הזרקה אורטוטופית במתהגורות.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- החדרה אורטוטופית של תאי גידול בעכברים.
- מעקב אחר התפתחות הגידול וגרורות.
- שימוש בטכניקות דימות להערכת התפשטות הגידול.
- ניתוח של אינטראקציות בסביבה המיקרוסקופית של הגידול.
תוצאות עיקריות
- הקמה מוצלחת של מודל עכברי לסרטן השחלה.
- תצפית על גרורות פריטוניאליות לאחר השרכה אורתוטופית.
- תובנות לגבי תפקידו של מיקרו-סביבת הגידול בגרורות.
- זיהוי יעדים טיפוליים פוטנציאליים להתערבות.
מסקנות
- המודל העכברי מדמה ביעילות פריכה פריטוניאלית.
- הממצאים תורמים להבנת הגעת גרורות של קרצינומה שחלאלית.
- מחקרים עתידיים עשויים להתמקד באסטרטגיות טיפוליות המבוססות על תובנות אלו.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית למנהלים
החדרה אורתוטופית של תאי קרצינומה של השחלה במודלים עכבריים מאפשרת מחקר ישיר של התפתחות גידול ראשוני ומטסטזות פריטוניאליות, ובכך נותנת מענה לפער קריטי בהבנת מנגנוני הגריעה. מודל זה תומך בביטחון חיזוי בשלבים מוקדמים של הגילוי על ידי שחזור מסלולי פיזור רלוונטיים מבחינה קלינית. יכולת השחזור שלו וההלימה התרגומית הופכות אותו לבעל ערך למיון תיקי פיתוח ולצמצום סיכונים מנגנוניים במחקר ופיתוח בתחום האונקולוגיה.
יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח בביופארמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- מאפשר בחינה של מנגנוני גרורות בהקשר של in vivo הרלוונטי למחלה.
- תומך בתיקוף תפקודי של מטרות המעורבות בהיפרדה של הגידול ובהיצמדות פריטונאלית.
- מסייע בהפחתת סיכונים מנגנוניים על ידי מידול דפוסי התפשטות שנצפו קלינית.
- מספק פלטפורמה למחקרים מונחי-השערה על אינטראקציות בין הגידול למזותליום.
סריקה ופיתוח בדיקה
- מכין מודלים בעלי חיים שעברו תיקוף לצורך סריקת יעילות ובחינה מכניסטית בהמשך.
- תומך בסטנדרטיזציה של פרוטוקולים להחדרת גידולים ולהערכת גרורות.
- מאפשר כימות הדיר במיטב שחזור (reproducible) של העומס המטסטטי עבור מחקרים השוואתיים.
- מאפשר הערכה של התערבויות פוטנציאליות המכוונות נגד התפשטות גרורתית.
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- מתיישב עם התקדמות מחלות בבני אדם באמצעות מידול של גרורות פריטוניאליות (peritoneal dissemination) in vivo.
- תומך ברצף מהשלב הגילוי ועד לאישור פרה-קליני של אסטרטגיות אנטי-מטסטטיות.
- מאפשר קבלת החלטות על קידום מבוסס סיכון בהתבסס על תוצאות גרורתיות in vivo.
- מספק גשר טרנסלציונלי לבדיקת השערות טיפוליות וסמנים ביולוגיים.
שילוב תהליכי עבודה (Pipeline & Workflow)
מודל עכברי אורטוטופי זה מתאים לממשק שבין הגילוי המוקדם לוולידציה פרה-קלינית, ובכך הוא מאפשר מחקרים מכניסטיים והערכה של מועמדים לפני התרגום הקליני.
- ביולוגיה של גילוי: תומך בבדיקת היפותזות על ניתוק תאי גידול, נדידה והתנחלות פריטוניאלית.
- סקרינג: מספק מערכת הניתנת לשחזור להערכת יעילות אנטי-מטסטטית וכימות התפשטות הגידול.
- אנליטיקה: מאפשר מדידה כמותית של נגעים מטסטטיים ועומס גידולים בין זרועות הניסוי השונות.
- מחקר תרגומי: ממדל הפצה רלוונטית קלינית, ותומך בהתאמה של ביומרקרים וטיפולים.
- שימוש חוזר ארגוני: מציע פלטפורמה סטנדרטית וניתנת לשימוש חוזר in vivo עבור תוכניות פיתוח בתחומי האונקולוגיה.
השפעה תפעולית וארגונית
- ערך מדעי: מגביר את הביטחון החזוי במחקרי מנגנוני גרורות ובתיקוף מטרות.
- ערך תפעולי: משפר את השחזוריות והסטנדרטיזציה של מידול גרורות in vivo.
- ערך אסטרטגי: מספק בסיס להחלטות go/no-go עבור מועמדים לאנטי-מטסטטיים ומפחית סיכון ביולוגי בשלבים מאוחרים.
- השפעה על הפורטפוליו: תומך בתיעדוף מותאם סיכונים של נכסי אונקולוגיה המכוונים להתקדמות גרורות.
שיקולי יישום
- דורש מומחיות בטכניקות ניתוח בעכברים ובהזרקת תאים אורטוטופית.
- נחוש גישה לתשתיות דימות וניתוח כמותי לצורך הערכת גרורות.
- דורש סטנדרטיזציה בין-צוותית של הטיפול בבעלי חיים ושל קריטריונים לסיום הניסוי.
- עשוי לדרוש התאמה עבור קווי תאים שונים של קרצינומה שחלאבית או פנוטיפים גרורתיים שונים.
- מגבלות מעשיות כוללות שונות תלוית-מודל ושיקולים אתיים בשימוש בבעלי חיים.
שאלות נפוצות בתחום הביופארמה
Chapters in this video
0:05
Title
0:46
Preparation of Cell Suspensions
3:12
Orthotopic Inoculation with Cell Suspensions
5:12
Post-surgical Treatment and Analysis of Tumors and Metastases
5:59
Results: Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation of Ovarian Carcinoma Cells
6:48
Conclusion
