Immunostimulatory הסוכן הערכה: הלימפה רקמות החילוץ, הזרקת תא דנדריטי תלויי-נתיב ההפעלה
16 בספטמבר 2018
ניסיוני נהלי מיצוי הבאים של רקמות הלימפה כדי לבדוק את הפעלת תא דנדריטי הלימפה מתוארים לאחר טיפול nanomaterial immunostimulating.
המטרה הכוללת של הליך זה היא להכיר את הטכניקה הייחודית הנדרשת בידוד בלוטות הלימפה mediastinal מעכברים. הניתוח נערך לאחר הזרקת חומר אימונוסטימולנטי בשישה מסלולים שונים בעכברים. במחקר זה, השתמשנו במחלקה חדשה של חומר להרכיב מבנים בגודל ננו.
פעילי שטח מורכבים מקבוצה הידרופילית וזנב הידרופובי. אלה יוצרים מיקל כדורי או מבנה משני אחר עקב הפרדת מיקרופיות. ניצלנו את הנכס הזה למאקרומולה ביולוגית שהיא דנ"א.
אמפיפיל DNA, המוצג כאן, כמו נוקלאוטידים רגילים כגון A, C, G, T, יש בלוקים הידרופיליים בעוד נוקליובאזים נוירו-תא שונה שומנים לשמש יחידות הידרופוביות. האוליגו שונה היה מסונתז על ידי סינתיסייזר DNA באוקטוגרמות בקנה מידה גדול. ב-equi-media DNAs השומנים האמפיפיליים יוצרים באופן ספונטני מיקלים כדוריים בגודל ננו.
כאשר micelle נוצר, ה-DNA נשאר חד תקוע כמו נשא ריק עם כ 10 ננומטר בקוטר. כדי לצייד את המוביל עם ממריצה חיסונית, זה עניין פשוט של הרחבת רצף ה-DNA עם קולטן אגרה כמו תשעה יידג'ובנט כלומר eCpG. DNA השומנים ובסיס eCpG כאן ולכן המשטח החיצוני של micelle הוא מושפל עם רצף CpG.
לאחר מכן אנו קוראים לזה חלקיק ננו מגרה מערכת החיסון כמו INP. כדי לקבוע את הדרך הנכונה של INPs לתגובה החיסונית הזרקנו INPs לעכברים ב 64 מסלולי הזרקה וכתוצאה מכך רקמת בלוטות הלימפה הנכון נותחו. לקבלת הוראות הזרקה מפורטות יותר אנא מצא מאמר JOB שפורסם על ידי צ'ארלס ריבר בשנת 2012.
היתרון העיקרי של וידאו זה הוא חזותית מראה כיצד להשיג צומת הלימפה mediastinal. הסרטון מראה במפורש את המיקום של בלוטות הלימפה mediastinal אשר הרבה אנשים מתקשים לבודד את האיברים. כל הניסויים בוצעו תחת ההנחיות של הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים מוסדיים במרכז הקליני לבריאות הציבור בשנגחאי, או במכללה לרפואה של אוניברסיטת אולסן.
חלק זה יראה את המיקום הספציפי של איברים או רקמות, אשר חיוניים לניתוח אימונולוגי. טחול ושתי בלוטות לימפה יהיו מבודדים. קודם כל, עכברים הוקרבו על ידי המתת חסד שאיפת פחמן דו חמצני וכל המאמצים נעשו כדי למזער את הסבל כמו בעקבות ההנחיה של הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים מוסדיים.
מעתה והלאה בואו למצוא את האיברים ולבודד אותם. ראשית, לתקן כראוי את העכבר על שולחן הניתוחים עם ארבעה סיכות על כף היד של העכבר. לעקר את אזור הניתוח עם אלכוהול.
לנתח את החלק החיצוני לכסות את החלק התחתון של הבטן העכבר עם מספריים בגודל גדול. השתמש במ forceps כדי לפתוח את שני צידי הקובץ המצורף ולתקן אותו עם סיכות על שולחן ההפעלה. המיקום של צומת הלימפה inguinal נחשף על ידי מציאת החיבור של כלי יורד לכיוון הרגל השמאלית.
צורת הכלי נראית כמו אות אלפבית מוטה Y.Uncover השכבה עם המדפים ולמשוך אותו מן העור. חותכים את החיתוך עם מספריים קטנים יותר כדי לחשוף איברים פנימיים. להזיז את המעי ימינה באמצעות מדפים ואז לעטוף טחול בצורת, אשר מראים בצד שמאל, בצד השמאלי העליון של הבטן.
תשומת לב נוספת נדרשת במהלך ההליך מאז הטחול קל לשבש. לבסוף את נקודת המפתח של וידאו זה:קצירת צומת הלימפה mediastinal. הוא ממוקם מתחת לצד העליון של הריאה, אשר קשה לראות בשל גודלו הקטן ומיקום מוסתר במקצת.
בזהירות לחשוף את האזור באמצעות מספריים קטנים מדפים. חותכים את שני הצדדים של הצלעות ואת הסרעפת גם כן. חותכים את הצלעות החתוכים מעל החזה.
במהלך ההליך להימנע מפגיעה בלב ובכלי הדם שכן הוא עלול לעוור את האתר, מציאת צומת הלימפה mediastinal שקוף. אם בטעות כלי הדם התפוצץ, בעדינות למחוק את הדם עם גזה. תפוס את הצד השמאלי של הריאה ולהפוך אותו ברכות לצד השני כדי לראות מתחת הריאה.
משוך את בלוטות הלימפה mediastinal באמצעות מטלפים. לאחר קצירת בלוטות הלימפה mediastinal, הקפד להסיר באופן מושלם את כל השומן והדם המקיפים את צומת הלימפה מאז רקמה לא רצויה עשוי להשפיע על הניתוח. לבסוף, כל האיברים המבודדים על צלחת פטרי מלאה במדיה.
סה"כ 0.1 פעמים 10 לתאים השישיים נותחו על ציטומטריית זרימה זו. בהתבסס על מקבל כוח וגודל getter leukocyte האוכלוסייה היה מגודר כי התאים לא נכללו על ידי כתמים כהים. 24 שעות לאחר הזרקת INP על ידי 64 מסלולי הזרקה, טחול, בלוטות הלימפה inguinal, וצומת הלימפה mediastinal נקצרו ונותחו הפעלת DC על ידי ציטומטריה זרימה.
בהתבסס על האסטרטגיה של אוכלוסיית DC cytometry זרימה הוגדרה CD11C חיובי תאים שליליים שושלת לויקוציט חי. יש לציין, הזרקה תוך-רנסאלית של INP קידמה עליות משמעותיות CD40, 80, 86 ביטוי בצומת הלימפה mediastinal לעומת PBS עבור הפקד. לכן, נתונים אלה הראו כי הזרקה תוך-רנסאלית של INP יכולה לשמש כתודעה ריר לשיפור החסינות בריאה.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
מאמר זה מתאר פרוצדורה לבידוד קשרי לימפה מדיאסטינליים מעכברים לאחר הזרקה של ננו-חומר מעורר מערכת חיסונית. הטכניקה מתמקדת בהוצאת רקמות לימפטיות כדי להעריך את הפעלתן של תאי דנדריטיים לימפואידיים.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום המדע
- מדעי המוח
- אימונולוגיה
- ננוטכנולוגיה
רקע
- הבנת הפעלתן של תאי דנדריטיים לימפואידיים היא קריטית למחקר אימונולוגי.
- חומרים מעוררי חיסון יכולים להגביר תגובות חיסוניות.
- למבנים בננו-סדר ישנן תכונות ייחודיות שניתן לנצל ביישומים ביולוגיים.
- טכניקות בידוד חיוניות לחקר סוגים ספציפיים של תאי מערכת החיסון.
מטרת המחקר
- להכיר את הטכניקה של בידוד קשרי לימפה מהמדיאסטינום.
- להעריך את ההשפעות של מחלקה חדשה של ננו-חומרים מעוררי מערכת החיסון.
- לחקור את הפעלת תאי דנדריטיים לימפואידיים לאחר הטיפול.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- הזרקה של חומר ממריץ חיסוני באמצעות שישה נתיבים שונים בעכברים.
- בידוד של קשרי לימפה מדיסטינליים באמצעות טכניקות כירורגיות ספציפיות.
- שימוש בחומרים פעילי שטח ליצירת מבנים בגודל ננומטרי.
- יישום של DNA כביו-מקרומולקולה במחקר.
תוצאות עיקריות
- בידוד מוצלח של רקמות לימפה מעכברים.
- צפייה בהפעלה של תאים דנדריטיים לימפואידיים לאחר הטיפול.
- הדגמה של יעילותו של הננו-חומר המעורר את מערכת החיסון.
- תובנות לגבי תפקידן של מבנים בננו-ממדים בתגובות אימונולוגיות.
מסקנות
- הטכניקה לבידוד קשרי לימפה מדיאסטינליים היא יעילה וניתנת לשחזור.
- ננו-חומרים מעוררי מערכת החיסון עשויים להשפיע באופן משמעותי על הפעלת תאי חיסון.
- נדרש מחקר נוסף כדי לבחון את מלוא הפוטנציאל של חומרים אלו באימונולוגיה.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית למסמך סיכום
הערכה מדויקת של סוכנים ממריצי מערכת החיסון דורשת שיטות חסונות לחילוץ וניתוח של רקמות לימפואידיות, כדי להעריך את הפעלת התאים הדנדריטיים בדרכי מתן שונות. תהליך עבודה זה מאפשר לצווטים בביופארמה להשוות פרופילים של הפעלת מערכת החיסון עבור סוכנים חדשניים מבוססי ננו-חלקיקים, ובכך לתמוך בביטחון חיזוי בשלבים מוקדמים של גילוי חיסונים ואימונותרפיה. גישה זו מספקת מידע ישיר לצורך קבלת החלטות לגבי דרך המתן ומיון תיקי מועמדים לסוכנים אימונו-מודולטוריים.
יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח בביופארמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- מאפשרת בחינה של מנגנוני הפעלה חיסונית באמצעות כימות תגובות של תאים דנדריטיים ברקמות לימפואידיות.
- תומכת בהפחתת סיכונים ביולוגיים על ידי השוואת חתימות הפעלה בדרכי מתן שונות.
- מסייעת בתיקוף תפקודי של מטרות עבור מועמדים לננו-חלקיקים מעוררי מערכת החיסון.
סריקה ופיתוח בדיקה
- מספק פרוטוקולים סטנדרטיים להוצאת רקמה ולציטומטריית זרימה לצורך ניתוח הדיר רקע של תאי מערכת החיסון.
- מספק תוצאות כמותיות של סמני הפעלה של תאי דנדריטיים (CD40, CD80, CD86) לצורך פיתוח בדיקות.
- מאפשר סריקה של נתיבי מתן כדי להבטיח פרופילי אימונוגניות אופטימליים.
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- מתאים נתוני הפעלה חיסונית עם אסטרטגיות הולכה התלויות בנתיב למחקר תרגומי של חיסונים ואימונותרפיה.
- תומך ברצף מהשלב הגילוי ועד לתיקוף פרה-קליני על ידי אפשור ניטור חיסוני ישיר ברמת הרקמה.
- מספק מידע לקבלת החלטות מוכוונת סיכונים לקידום מועמדים בעלי פרופילי בטיחות והפעלה חיוביים.
שילוב תהליכי עבודה וקווי עיבוד
שיטה זו משתלבת ברצף הגילוי של אימונותרפיה, החל מאימות מוקדם של מטרות ועד לבחירת מועמדים בשלב הפרה-קליני, ומאפשרת השוואה ישירה של הפעלת מערכת החיסון בין דרכי מתן שונות.
- ביולוגיה של גילוי: תומך בבדיקת השערות על מנגנוני עידוד חיסוני והפעלה ספציפית לרקמה.
- סריקה: מספק תוצרי ציטומטריית זרימה כמותיים וניתנים לשחזור לצורך השוואה בין נתיבי מתן שונים.
- אנליזה: מספק נתונים על הפעלת תאי דנדריטיים המבוססים על סממנים כדי להנחות את דירוג המועמדים.
- מחקר תרגומי: מקשר בין הפעלה חיסונית התלויה בנתיב המתן לבין אסטרטגיות הובלה פרה-קליניות.
- שימוש חוזר ארגוני: מבסס זרימת עבודה ניתנת לשימוש חוזר להוצאת רקמות ואנליזה לצורך הערכת מעודדי חיסון ננו-חלקיים.
השפעה תפעולית וארגונית
- ערך מדעי: מגביר את הביטחון החזוי במנגנון של מעוררי מערכת החיסון ובבחירת נתיב הפעולה.
- ערך תפעולי: מבצע סטנדרטיזציה של הפקת רקמות וציטומטריה של זרימה לצורך פרופילינג חיסוני הניתן לשחזור.
- ערך אסטרטגי: מאפשר קבלת החלטות מושכלת לגבי המשכה או הפסקת פיתוח של מועמדים למודולטורים חיסוניים, בהתבסס על הפעלה חיסונית כמותית.
- השפעה על הפורטפוליו: תומך בתעדוף מותאם סיכונים של מועמדים בעלי פרופילי הפעלה ומסירה אופטימליים.
שיקולי יישום
- נדרשת מומחיות בנתיחה של עכברים ובמיצוי רקמות לימפואידיות, ובמיוחד עבור קשרי לימפה מדיסטינליים.
- נדרשת גישה למכשור ציטומטריה זרימה ולתשתית אנליטית לאפיון תאי מערכת החיסון.
- נדרש סטנדרטיזציה בין-צוותית של טיפול ברקמות ואסטרטגיות gating לצורך הדירות (reproducibility).
- ייתכן שיידרשו התאמות עבור מודלים שונים של בעלי חיים או יעדי רקמה שונים.
- הכנה קפדנית של הרקמה היא קריטית כדי למנוע זיהום ולהבטיח ניתוח מדויק של תאי מערכת החיסון.
