מודל ממשק מוח-דם אנושי ללמוד מכשול המעברים על ידי פתוגנים או תרופות והאינטראקציה שלהם עם המוח

מודל ממשק דם-מוח אנושי זה שימושי לחקר העברת מולקולות למערכת העצבית. כמו גם לחקר חיידקים להגיע לגידול נגוע בכאב במוח. התוספת של המוח המיני למחסום מוח דם זה או למודל BBB מאפשרת לחקור את הפתוגנים והמולקולות שלנו הגורמים ל- BBB להתנהג במוח.

בדרגה ההליך יהיה פלוריאן באקו, תלמידי הדוקטורט למעבדה שלי. כדי להגדיר BBB מיני המוח פוליאסטר קרום תרבות הכנס התקן, לדלל את התאים לחמש פעמים 10 לתאים הרביעיים לכל הכנס ריכוז תא אנדותל שלם בינוני ולהוסיף את נפח התאים המתאים לכל תרבות קרום פוליאסטר להוסיף בצלחת 12 גם. לאחר מכן, מקם את המוסיף ואת החממה לתרבות התאים עד שהתאים יגיעו ל- 100%confluency.

החזק צלחת 12 באר עם מיליליטר אחד של פולי-D-ליסטין באר שלה במשך ארבע שעות בטמפרטורת החדר. ואחריו מיליליטר אחד של למינין ל באר לילה. החלף את למינין עם מיליליטר אחד של תא אנדותל בינוני בתוספת 5%סרום בקר עוברי, או FBS.

מניחים את המקום באינקובטור למשך שעה. כדי להכין את התבואה מיני בעדינות trypsinize הנוירונים האנושיים אסטרוציטים CHME לשכפל חמישה תאים. שייך את כדורי התא עם מדיום תא אנדותל מלא.

לאחר ספירה ב 3.6 פעמים 10 כדי נוירונים החמישי אסטרוציטים כדי 0.4 פעמים 10 כדי CHME החמישי לשכפל חמישה תאים לגם יש צלחת 12 באר. ולזרע את צלחת 12 באר. כדי לבנות את המוח מיני BBB 24 שעות לאחר הזריעה להחליף את המדיום בשימוש עם בינוני תא אנדותל שלם טרי ולהעביר את תא הדם הדם המיקרו-כלי הדם המוחי מצופה תרבות קרום פוליאסטר מוסיף מעל תאי המוח מיני.

לאחר מכן, מקם את מכשיר המוח BBB רבים לתוך החממה. כדי לאמת את חדרות אנדותל המוח מיני BBB להוסיף 1.5 מיליליטר של חיץ תחבורה ל הבאר לצלחת חדשה 12 באר. ולהפוך כל מסנן במהופך כדי להסיר בזהירות את המדיום מבלי להשפיע על מחסום התא ה אנדותל.

מניחים כל מסנן באר אחת של צלחת מלא מאגר ההובלה, ולהוסיף 0.5 מיליליטר של צהוב לוציפר לתוך כל באר. לאחר מכן מניחים את הצלחת לתוך החממה במשך 10 דקות לפני העברת המסננים לתוך חיץ הובלה חדש מלא 12 צלחת היטב. לאחר הגדרת מכשיר מוח BBB רבים כפי שהודגם, להוסיף 3500 יחידות platforming של זן וירוס נוירוטרופי צרפתי של וירוס קדחת צהובה מדולל ו 50 microliters של 2% FPS תא אנדותל בינוני, בזהירות רבה, על גבי תא זוהר.

לחסן את המוח מיני BBB שליטה עם 50 microliters של 2%FBS תא אנדותל בינוני ללא וירוס. ואז למקם את הנגיף לחשוף BBB מכשיר מוח רבים באינקובטור במשך 24 שעות. למחרת, להסיר את המוסיף כדי לקבוע את החדירות תא אנדותל לוויה גם בדיוק כפי שהודגם.

שמור מיליליטר אחד של מדגם מכל באר כדי לקבוע את טיטר הווירוס בתא האמצעי. מתחת להכנסה בעדינות כדי למנוע דליפה של התא הזוהר לתוך התאים abluminal. כדי לחקור את ההובלה של נוירון מיקוד biomolecular על פני מחסום הדם מוח, להוסיף את המולקולה הביולוגית של עניין מוסיף ולהחזיר את הצלחת לחממה תרבות התא.

לאחר 24 שעות מרחוק מוסיף ולקבוע חדירה אנדותל. ואז להכתים את תאי המוח הרבים עם הנוגדן המתאים לגילוי נוכחות של מולקולה ביולוגית של עניין בתוך המוח מיני. תאי אנדותל מיקרו מוחיים אנושיים מבטאים את כל ערכות המשנה של rececptors, מובילי Efflux או מובילים שהם חלבונים רלוונטיים מרכזיים עבור הפונקציות הביולוגיות שלהם.

כמה זן וירוס טרופי נוירו צרפתי של וירוס קדחת צהובה יכול לחצות את מחסום הדם מוח ב 24 שעות. לאחר מכן הנגיפים מתגברים ביומיים הקרובים על ידי הכפלת הנגיף בתוך תאי המוח. יתר על כן, הביטוי של סמנים ביולוגיים ויראליים ספציפיים מגורה כאשר אוכלוסייה ויראלית נוירו פולשנית זו נמצאת באופן סדרתי על תאי המוח המיני ומתואמת בקפדנות לעומס הנגיפי.

לאחר שנוספה לגבול של תא תא חודר מולקולה נוירו-תג Neurovita חוצה את מחסום הדם מוח והוא מסוגל למקד נוירונים אנושיים. תא חודר מולקולה נוירו תג דלתא נוירווויטה חוצה את מחסום התא ה אנדותל, אבל מטרות פחות ביעילות הנוירונים האנושיים. לאחר שנוספה לתא האמצעי הקטן, תא חודר מולקולה Neuro-Tag Neurovita חוצה את מחסום הדם מוח והוא מסוגל לחדש את האקסונים של נוירונים אנושיים, לאחר פציעה.

בניגוד לתא חודר מולקולה נוירו-תג נוירווויטה דלתא, הצורה הלא פעילה של נוירווויטה. כאשר מוחל לאחר האקסון גירוד תא חודר מולקולה נוירו-תג Neurovita מפעילה את ההגנה הנוירו של נוירונים פצועים ואת התחדשות זונל x. אך ורק למען נהלים טובים.

אין להשתמש יתר על פני מעברי I-cell. נסו לשמור על מראית עין של בינוני ואזורים ולבדוק את היעדר mycoplasma. אינטראקציות בין המוח המיני לבין התרופות הן מיקרואורגניזמים של עניין ניתן ללמוד עוד יותר על ידי תעתיק כי כימיזציה זו או ביולוגיה קלאסית הנקראת טכניקות.