שימוש תחמוצת דאונטיום ככלי לא פולשני, לא קטלני להערכת הרכב הגוף צריכת המים ביונקים

באמצעות פרוטוקול זה, תחמוצת דיטריום, או D2O, איזוטופ לא רדיואקטיבי ויציב של מים, ניתן להשתמש כדי להעריך את הרכב הגוף ואת צריכת המים. טכניקה זו אינה פולשנית ולכן ניתן להשתמש בה כדי להעריך את הרכב הגוף במינים בסכנת הכחדה, כמו גם בבני אדם ומינים מקומיים. יישום ייחודי של טכניקת דילול תחמוצת deuterium היא היכולת למדוד את צריכת המים של חיות בר חופשיות עם שיעורי כיבוש גבוהים או של בעלי חיים שוכנים חברתית.

בעוד הרדמה אינה נדרשת, זה עשוי להיות קל יותר עבור אלה שאינם מכירים עם מתן זריקות תת עורית כדי להרגיע את בעלי החיים לפני אספקת תחמוצת דיטריום. הדגמת ההליך עם שרה הופר ואני תהיה אמנדה אשלמן ואשלי קוואן, סטודנטים וטרינריים, ואלישיה רויסטצ'ר, סטודנטית לתואר שני מהמעבדה שלי. כדי להפוך את פתרון מלאי 50 מיליליטר של תשעה גרם לליטר תחמוצת דיטריום מליחות, הראשון לשקול 450 מיליגרם של נתרן כלוריד כיתה התרופות, ולתרשם את הסכום המדויק לארבעה מקומות עשרוניים.

מעבירים את כל המלח לתוך מקור מעוקר 100 מיליליטר, ולמדוד 50 גרם של גדול או שווה ל 99.8% תחמוצת deuterium בצילינדר סטרילי, מדורג. רשום את הכמות המדויקת של תחמוצת דיטריום לארבעה מקומות עשרוניים, והעבר את תחמוצת הדאוטריום לסק הסטרילי של נתרן כלורי. לאחר מכן, חבר מחט של 20 מד למסנן דיסק סטרילי לא פירוגני עם נקבוביות תת-מיקרון המצוידות בחבית מזרק של 10 מיליליטר, והכנס את המחט למחיצה של בקבוקון סטרילי, ריק, 100 מיליליטר.

חבר שפופרת ואקום למחט 22-מד, ולהכניס את המחט למחיצה של בקבוקון 100 מיליליטר. לאחר מכן לטעון 10 מיליליטר של נתרן כלורי חוזק איזוסמוטי לתוך חבית המזרק, ולאט לאט להפעיל את הוואקום עד פתרון תחמוצת deuterium מתחיל לאט לסנן לתוך הבקבוקון. המשך לשפוך את פתרון מלאי תחמוצת דיטריום לתוך חבית המזרק עד נפח 50 מיליליטר כולו כבר מסונן.

לאחר אישור חוסר תגובה לצביטת בוהן במחבט הרדמה, השתמש כרית הכנה לאלכוהול כדי לנקות את uropatagium על וריד interfemoral, ולאפשר קרום הזנב חיטוי להתייבש. החל שכבה דקה של ג'לי נפט על וריד interfemoral, ולהשתמש מחט 29-מד כדי לנקב את החלק הגבי של וריד בין ירך. לאחר מכן השתמש צינורות נימי נתרן הפרין פלסטיק כדי לאסוף 100 microliters של דם.

כדי להבטיח ערבוב נאות של כל הדם עם הפרין נתרן, בעדינות לגלגל כל צינור לאחר איסוף הדם לפני תיוג. לאחר קביעת המסה של תחמוצת דיטריום בגרמים להזרקה, לטעון מזרק אינסולין מצויד מחט 29-מד עם הנפח המתאים של תחמוצת דיטריום. לשקול את מזרק האינסולין טעון deuterium ומחט, הקלטת המשקל לארבעה מקומות עשרוניים, ולהזריק את כל נפח תחמוצת דיטריום תת עורית מעל אזור הירך הגבית של העטלף הרדמה.

אנו ממליצים להשתמש בסולם דיוק עם מגן טיוטה אנטי סטטי כדי לוודא למשוך בחזרה על הבוכנה כדי להבטיח לחץ שלילי לפני ההזרקה. מיד לאחר ההזרקה, שוקלים את מזרק האינסולין והמחט הריקים כעת, ותרשום את המשקל לארבעה מקומות עשרוניים. בתוך 30 דקות לאחר איסוף הדם, השתמש צנטריפוגה המטוקריט להסתובב למטה כל צינור נימי ב 10, 000 פעמים g במשך חמש דקות.

בעזרת מספריים חדים, חותכים את צינור נימי הפלסטיק בין כל הדם לפלזמה, ולהשתמש בפיפיטה של 200 מיקרוליטר כדי לגרש את הפלזמה ישירות לצינור אחסון מתויג של 500 מיקרוליטר. לאחר תקופת שיווי המשקל, לאסוף ולאחסן עוד 100 microliters של דם מן הוריד הבין-מוסרי כפי שהוכח רק. לניתוח ספקטרופוטומטריה של FTIR, קבעו את הטמפרטורה של אמבט חול ל-60 מעלות צלזיוס כדי להקל על הזיקוק, והוסיפו 50 מיקרוליטרים של כל דגימת פלזמה וסטנדרט למכסות מיקרוצנטריפוגה קוניות בודדות של 1.5 מיליליטר.

שמירה על כובע microcentrifuge במהופך, בורג צינור מיקרוצנטריפוגה חרוט 1.5 מיליליטר על הכובע, ולה מניחים את הצינור ההפוך במגע עם החול באמבט החול במשך מינימום של 12 שעות. למחרת בבוקר, מניחים כובע חדש ונקי על כל צינור, ודופקים את צינורות המיקרוצנטריפוגה למשך 10 שניות במיקרוצנטריפוגה. התקן תא שידור נוזלי לתוך ספקטרומטר FTIR, ולמלא את התא עם מתנול.

חבר את יציאת ההזרקה, ומלא לאט את התא במים ברקע תוך הסרה זהירה של מזרק המתנול כדי להפחית את הסיכון לבועות אוויר. צרף צינורות ליציאת הפלט כדי לאפשר הסרה של הדגימות לאחר הניתוח, ולפתוח את תוכנת ספקטרומטר FTIR. הגדר את הפרמטרים לפי הטבלה, ולאסוף מדגם רקע באמצעות diluent, 0.22 מיקרומטר מסונן, מים מזוקקים.

להזריק 40 microliters של אפס חלקים למיליון תחמוצת דיטריום סטנדרטי, ולהקליט ולשמור את הספקטרום כקובץ ערכים מופרדים פסיק. לאחר הזרקת ושמירה של הספקטרום של כל התקנים כדי ליצור עקומה סטנדרטית, להזריק 40 microliters של כל מדגם מזוקק לתוך תא השידור הנוזלי, ולשמור את הספקטרום. עם זמן שיווי משקל ידוע, ניתן לקבוע את מי הגוף הכוללים, מסת הגוף הרזה ואת מסת השומן בגוף עבור עטלפים חומים גדולים שנתפסו בטבע ועטלפים חומים גדולים שבויים.

מסת שומן גוף שלילית ניתן לחשב בשל אחת או יותר מהסיבות הבאות:לא מקבל את כל המינון של תחמוצת דיטריום, הופך טורפיד במהלך שלב שיווי המשקל, שיש מסות שומן גדולות באופן חריג מסות רזה מינימלי, או שיש תחת שלוש עד 5% שומן הגוף כפי שנקבע על ידי אבזרות רנטגן כפול. כאן, אחוז מייצג של שומן הגוף נקבע על ידי טכניקת דילול תחמוצת deuterium לעומת אבסולינומטריה רנטגן כפול מוצג. שתי הטכניקות מתואמות היטב, כאשר מסת השומן בגוף מראה מתאמים חזקים בין שומן הגוף ומשקל הגוף ועם טכניקת דילול תחמוצת דיטריום לא באופן עקבי מעל או להמעיט במסת השומן בגוף.

שיטת דילול תחמוצת הדטריום אומתה בעבר בחתולים, והטכניקה הותאמה כדי לאפשר מדידה של צריכת המים היומית של חתולים שוכנים חברתית במהלך כל בלוק תזונתי של הניסוי. זכור כי טכניקה זו צריכה להתבצע רק על בעלי חיים בריאים, כי אתה צריך לשקול במדויק, להקליט, ולספק את המינון המלא של תחמוצת דיטריום לכל בעל חיים. שיטה משנית לקביעת הרכב הגוף, כגון ניתוח פגר מלא או DEXA, ניתן להשלים כדי לאמת את טכניקת תחמוצת דיטריום.

טכניקה זו אפשרה לנו לזהות חתול בעל בית חברתי שצרך כמויות גבוהות באופן חריג של מים מבלי להפריד כל חתול כדי למדוד את צריכת המים שלו.