מורי צוואר הרחם מורנה השתלת מודל באמצעות שינוי שאינו תפר שיטה השרוול
2 בנובמבר 2019
כאן, אנו מציגים פרוטוקול של הטרוסקסואלים השתלת אבי העורקים בעכברים באמצעות שימוש בטכניקת השרוול שאינו תפר במודל מורטין הצווארי. מודל זה יכול לשמש כדי ללמוד את הפתולוגיה הבסיסית של השתלת האלופתיה כרונית (קו) והוא יכול לעזור להעריך סוכנים רפואיים חדשים כדי למנוע את הקמתה.
אני מרטין רייל ממעבדות המחקר של המחלקה הכללית, ניתוחי הקרביים וההשתלות של LMU במינכן. היום אנחנו הולכים להראות לך מודל השתלת אבי היאור הטרוטופי מורין באמצעות טכניקת שרוול לא תפר שונה. ראשית, הרדמה של החיה המטופל עם הזרקה תוך-פרטית של midazolam, medetomidine ופנטניל.
קליפ כל השיער של האזור הצדדי צוואר הרחם עם קוצץ שיער חשמלי עבור בעלי חיים קטנים ולהחיל משחה עיניים עם צמר גפן כדי למנוע את העיניים להתייבש במהלך ההליך. מניחים את החיה בתקרת העל-חוש על משטח חימום מתחת למיקרוסקופ ומדביקים בעדינות את רגליה לשולחן הניתוחים עם פסי גבס רגישים לעור. להטות את ראשו לאחור ולשפשף את השדה האופרטיבי מספר פעמים עם אלכוהול.
הפוך חתך בעור מן החתך הצווארי לתוך הדם התחתון הימני עם מספריים קטנים. הסר את האונה הימנית התחתונה של הבלוטות submandibular באמצעות צריבה דו קוטבית של פדיקל כלי כריתה לאחר מכן עם מספריים מיקרו. הסר את שריר sternocleidomastoid הימני באמצעות צריבה דו קוטבית של החלק העליון והתחתון כריתה לאחר מכן עם מספריים מיקרו כדי לקבל גישה לעורק הראשי המשותף.
לגייס את העורק הראשי נפוץ ככל האפשר distally ו proximally ככל האפשר על ידי משיכת רקמת החיבור שמסביב לגזרים עם מטליות בסדר. לקשור שתי ליגטורות משי 7-0 עם מרחק מינימלי אחד בין השני סביב אמצע העורק הראשי המשותף ולחנות את העורק הראשי המשותף עם מספריים מיקרו בסדר בין הקשירה. מעבירים את הקצה המלקחיים הפרוקסימלי דרך השרוול ומסדרים אותו עם מלחצי עורקים קטנים.
הסר את הקשירה עם מספריים מיקרו עדין קרוב יותר קשירה ככל האפשר לשטוף את לומן עם מלוחים heparinized עם מחט 30 מד תוך כדי טיפול לא לפגוע בקירות כלי. מנפחים את הלומן הפתוח באמצעות דילאטורים כלי דם עדינים ומכוונים את גדם התרדמה מעל השרוול על ידי משיכתו בעדינות מעל צינור הפוליאמיד. מיד לתקן את התרפיד הפוך עם לולאת משי 7-0 קשורה מראש באופן רופף.
בצע את אותו הליך בצד השני של העורק הראשי עם השרוול השני. מעבירים את הקצה הדיסטלי דרך השרוול ומסדרים אותו עם מלחצי עורקים קטנים. הסר את הקשירה עם מספריים מיקרו עדין קרוב יותר קשירה ככל האפשר לשטוף את לומן עם מלוחים heparinized עם מחט 30 מד תוך כדי טיפול לא לפגוע בקירות כלי.
מנפחים את הלומן הפתוח באמצעות דילאטורים כלי דם עדינים ומכוונים את גדם התרדמה מעל השרוול על ידי משיכתו בעדינות מעל צינור הפוליאמיד. מיד לתקן את התרפיד הפוך עם לולאת משי 7-0 קשורה מראש באופן רופף. מניחים את החיה המטופלת בצד ומלחים את שני השלישים העליונים עם מלוחים עד שמקטע בית הישורי מושחל.
הרדמה של עכבר התורם באותו אופן כמו החיה הנמען. קוצץ את כל השיער של אזור הבטן ובית החזה עם קוצץ שיער חשמלי לבעלי חיים קטנים ולהחיל משחה עיניים עם צמר גפן כדי למנוע את העיניים להתייבש במהלך ההליך. מניחים את החיה בתקרת העל-חוש על משטח חימום מתחת למיקרוסקופ ומדביקים בעדינות את רגליה לשולחן הניתוחים עם פסי גבס רגישים לעור.
לשפשף את השדה האופרטיבי מספר פעמים עם אלכוהול. בצע לפרוטומיה בטן קו האמצע עם מספריים קטנים ולדחוף את המעיים מעט כלפי מעלה כדי לחשוף את ואנה קאווה נחות. להזריק IVC עם cc אחד של מלוחים heparinized באמצעות מחט מד 30.
חותכים את אב העורקים הבטן IVC מתחת לעורקי הכליה עם מספריים קטנים כדי exsanguinate החיה התורמת. מניחים באופן רופף דחיסה לתוך הבטן כדי לספוג את הדם. בצע כריתת חזה באמצעות הסחה דו-צדדית של הצלעות עם מספריים ולהטות את קיר החזה לפנים עם מהדק כירורגי כדי לחשוף את mediastinum.
חותכים את IVC ואת הוושט ישירות מעל הסרעפת עם מספריים מיקרו. הסר את הלב ואת הריאות על ידי ציוץ אותם כלפי מעלה עם מטלפים מחזיקים את IVC לחתוך ו הוושט ולאחר מכן להוציא אותם עם מספריים מיקרו מהבסיס כדי לקבל גישה בית החזה ואת mediastinum הגב. לגייס את אבי העורקים מבית החזה מן הרקמה הסובבת אותו על ידי פיזור רקמת החיבור שמסביב ושומן עם מטלחיים עדין תוך הקפדה לא לפגוע בעורקים בין צלטליים.
לצרוב את כל הענפים מאבי בית החזה עם מלקחיים דו קוטביים צרובים ולבלו את קטע האאורטיק בין הסרעפת לבין קשת בית האביסטר באמצעות מספריים מיקרו. לשטוף את קטע העורקים excised עם מלוחים heparinized עם מחט 30 מד תוך כדי טיפול לא לפגוע בקירות כלי השיט כדי להסיר את כל הדם שנותרו או קרישי ולהעביר את השתל לחיה המטופל. משוך את הקצה הפרוקסימלי של קטע אבי העורק התורם מעל השרוול הפרוקסימלי על גבי העורק הראשי ההפוך עם מלקחי עדין ומיד לתקן אותו עם לולאת משי 7-0 קשורה מראש.
חותכים את הקצה החופשי הדיסטלי של שתל אבי העורק עם מספריים זעירים כך שאורך השתל מתאים למרחק בין שני האזיקים. משוך את הקצה הדיסטלי של קטע אבי העורק התורם מעל השרוול הדיסטלי על גבי העורק הראשי ההפוך עם מלקחים עדין ומיד לתקן אותו עם לולאת משי 7-0 קשורה מראש. הסר תחילה את המהדק הדיסטלי כדי לאפשר תדלוק מדרדר.
לאחר השגת כבד, להסיר את מהדק פרוקסימלי כדי להשלים את anastomosis. לבסוף, לסגור את הפצע עם 6-0 תפר מתמשך. לאחר 28 ימים, בעלי החיים מוקרבים והשתלים נשמרים להכתמות היסטולוגיות.
כפי שמוצג אלה ואן-גיסון של כתמים של קטעי אב העורק, MHC מלא תואמים allografted aortas מתורמים Balb / c לשישה נמענים שחורים פיתחו היפרפלזיה ניאו-אינטימיאלית משמעותית וכתוצאה מכך צמצום זוהר. מצד שני, השתלות סינדרטיק סינגניות משישה תורמים שחורים לשישה נמענים שחורים פיתחו רק היפרפלזיה ניאו-אינטימית קטנה. כתמי immunofluorescence נגד SM22, סמן לתאי שריר חלקים בכלי הדם, כפי שמוצג בתמונה זו פלואורסצנטיות ירוקה, מדגים כי neointima מורכב בעיקר של תאי שריר חלקים בכלי הדם.
השתלת אאורטיק מורין משמש מודל להשתלה כרונית vasculopathy שהוא הגורם השכיח ביותר של כישלון השתל מאוחר. בהשוואה למודל הבטן אורתוטופית, טכניקת השרוולים המתוקנת שלנו פחות מיקרוכירורגית תובענית המובילה לקצב הצלחה גבוה. בנוסף, בשל הקוטר המתמיד של השרוול, וריאציות של anastomosis כלי הדם כפי שניתן לראות במודלים אחרים השתלה מיקרוכירורגית ניתן להזניח.
יתר על כן, הזמן האיסכמי החם נשמר קבוע בכל קבוצות הניסוי כאשר החיה המטופלת מוכנה תחילה לפני שהקטע של בית הישורי מושתל. המודל השונה שלנו אמור לעזור למעבדות אחרות להקים השתלת אורטי מורין.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
מאמר זה מציג פרוטוקול להשתלה הטרוטופית של אביון בעכברים באמצעות טכניקת שרוול ללא תפרים. מודל עכברים צווארי זה נועד לחקר וסקולופתיה כרונית של השתלה אלוגנית (CAV) ולהערכת חומרים טיפוליים חדשים למניעת היווצרה.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום המדע
- ביולוגיה של השתלות
- ביולוגיה של כלי דם
- כירורגיה ניסויית
רקע
- וסקולופתיה כרונית של השתלה (CAV) היא סיבוך משמעותי בהשתלות.
- הבנת ה-CAV עשויה להוביל לאסטרטגיות טיפוליות טובות יותר.
- מודלים בבעלי חיים חיוניים למחקר של פתולוגיות הקשורות להשתלה.
- טכניקת ה-non-suture cuff מציעה גישה חדשנית להשתלת אבי העורקים.
מטרת המחקר
- להציג מודל עכברי מהימן לחקר CAV.
- להעריך את היעילות של סוכנים טיפוליים חדשים במניעת CAV.
- לשכלל טכניקות כירורגיות במחקרי השתלה.
שיטות בשימוש
- הרדמה של עכברים רסיפיינטים באמצעות midazolam, medetomidine ו-fentanyl.
- הכנת אתר הניתוח על ידי גילוח שיער ומריחת פומדה אופתלמית.
- הצבת החיה על משטח חימום להבטחת תנאים כירורגיים אופטימליים.
- שימוש בטכניקת cuff ללא תפרים להשתלה של אביון (aorta).
תוצאות עיקריות
- טכניקת השרוול ללא תפרים מאפשרת ביצוע מוצלח של השתלת אאורטה.
- מודל זה מאפשר להעריך את התפתחות ה-CAV.
- ניתן להעריך חומרים טיפוליים פוטנציאליים באמצעות מודל זה.
- גישה זו מאפשרת הבנה משופרת של הפתופיזיולוגיה של CAV.
מסקנות
- המודל המוצג הוא כלי בעל ערך למחקר של CAV.
- הוא עשוי להוביל להתקדמויות באסטרטגיות טיפוליות עבור חולי השתקה.
- מחקר נוסף באמצעות מודל זה יכול להעמיק את הבנתנו לגבי ביולוגיה של השתקה.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית למסמכים ניהוליים
וסקולופתיה כרונית של הש Transplant (CAV) נותרת סיבה מרכזית לכשיל ארוך טווח של הש Transplant בהשתלות של איברים מוצקים, כאשר אפשרויות הטיפול מוגבלות בשל הבנה חלקית של הפתופיזיולוגיה שלה. מודל זה של השתתלת העורק התווארי בעכברים, המשתמש בטכניקת cuff ללא תפרים משופרת, מספק פלטפורמה מיקרו-כירורגית מינימלית וניתנת לשחזור לחקר מנגנוני CAV ולהערכה של התערבויות פוטנציאליות. על ידי מאפשרת של אנסטומוזיס וסקולרית עקבית וזמן איסכמיה חמה מבוקר, המודל תומך בהפחתת סיכונים פרה-קלינית של אסטרטגיות טיפוליות המכוונות לרמיodeling וסקולרי בהשתלות.
יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח בביופארמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- ערך מדעי: מאפשר בחינה של היפותזות טיפוליות בפתולוגיה וסקולרית על ידי מידול של היפרפלזיה נאו-אינטימלית והיצרות לומנלית הרלוונטיות לבני אדם בעורקים מושתלים (allografted aortas).
- ערך תפעולי: מציע אנסטומוזיס סטנדרטי ללא תפרים, המפחית שונות טכנית ותומך בשיעורי הצלחה גבוהים בין הקבוצות הניסיוניות.
- ערך ניבוי: מסייע בהפחתת סיכונים ביולוגית של מטרות המעורבות במידול וסקולרי המתווך על ידי תאי שריר חלק, כפי שהוכח על ידי היווצרות נאו-אינטימה חיובית ל-SM22.
סריקה ופיתוח בדיקה
- ערך מדעי: מספק פלט מדיד — היפרפלזיה נאו-אינטימלית (neointimal hyperplasia) והיצרות לומנלית (luminal stenosis) — המאפשרים הערכת תגובה למינון של תרכובות מועמדות במערכת הרלוונטית למחלה.
- ערך תפעולי: מבטיח מוכנות של הבדיקה באמצעות קוטר שרוול קבוע ותזמון ניתוחי סטנדרטי, ובכך מזעיר משתנים מתערבים הקשורים לאנסטומוזיס.
- ערך תרגומי: תומך במוכנות לסריקה באמצעות שימוש באלוגרפטים עם אי-התאמה מלאה של MHC, כדי לחקות תגובות אלואימוניות אנושיות בכשלונו של שתל כלי דם.
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- ערך מדעי: מדמה וסקולופתיה כרונית של השתלה אלוגנית כפתולוגיה פרוגרסיבית, המאפשרת הערכה אורך של שינויים בשטבל עד 28 ימים לאחר ההשתלה.
- ערך תפעולי: מאפשר ניתוח היסטולוגי ואימונופלורסצנטי (למשל, צביעת Van-Gieson, זיהוי SM22) כדי לתקף מעורבות מטרה ומנגנון פעולה.
- ערך ניבוי: תומך בהחלטות קידום מותאמות סיכון על ידי הבחנה בין תגובות של השתלה סינגנית (היפרפלזיה מינימלית) לבין תגובות של השתלה אלוגנית (היפרפלזיה משמעותית).
שילוב תהליכי עבודה ומסלולי עיבוד
המודל משתלב ברצף הגילוי, החל מתיקוף המטרה ועד להערכה פרה-קלינית, ובמיוחד עבור טיפולים המיועדים לעכבה של התרבות שריר חלק בכלי דם או לוויסות של פגיעה וסקולרית בתיווך חיסוני בהשתלות.
- ביולוגיה של גילוי (Discovery Biology): תומך בבדיקת היפותזות על מסלולים המניעים היווצרות של נאו-אינטימה (neointima), ומאפשר הפחתת סיכונים מכניסטיים לפני אופטימיזציה של המולקולה המובילה.
- סריקה (Screening): מספק תוצאות כלי דם כמותיות וניתנות לשחזור, המתאימות לסריקת ספריות תרכובות במודל כירורגי סטנדרטי.
- אנליטיקה: מייצר נקודות קצה מדידות — שטח הלומן, עובי הנאו-אינטימה וביטוי של סמני שריר חלק — המאפשרות ניתוח השוואתי בין קבוצות טיפול.
- מחקר תרגומי (Translational Research): משקף את הפתופיזיולוגיה של CAV בבני אדם, ותומך ברצף מהשלב הגילוי ועד לתיקוף פרה-קליני של חומרים המגנים על כלי הדם.
- שימוש חוזר ארגוני: מבסס פלטפורמה כירורגית ניתנת לשימוש חוזר עבור מודליות טיפוליות מרובות (מולקולות קטנות, תכשירים ביולוגיים, טיפולים גנטיים) המכוונות לעיצוב מחדש של כלי דם בהקשרי השתלה.
השפעה תפעולית וארגונית
- ערך מדעי: מגביר את הביטחון החזוי בתיקוף מטרה על ידי מידול סיבה רלוונטית קלינית לאבדן הש Transplant בשלב מאוחר, עם מדדים היסטולוגיים ותפקודיים מוגדרים.
- ערך תפעולי: משפר את ההדירות ומפחית שונות בין בעלי חיים באמצעות טכניקת Cuff סטנדרטית ללא תפרים ותנאי ניתוח מבוקרים.
- ערך אסטרטגי: מסייע בקבלת החלטות go/no-go על ידי אספקת ראיות מוקדמות ליעילות במניעת רמיodeling וסקולרי פתולוגי, ובכך מפחית את הסיכון לכשל בשלב מאוחר.
- השפעה על הפורטפוליו: מאפשר תיעדוף מבוסס סיכונים של מועמדים המכוונים לכלי דם, בהתבסס על יכולתם לדכא היפרפלזיה נאינטימלית במודל של הש Transplantה אלוגנית עם מערכת חיסונית תקינה.
שיקולי יישום
- דורש מומחיות בטכניקות מיקרו-כירורגיות, כולל בידוד כלי דם, ליגציה והפיכה באמצעות פינצטות עדינות ומספרי מיקרו.
- תלוי בציוד ייעודי כגון מרחיבי כלי דם, מערכות שטיפה של מי מלח עם הפרין ומיקרוסקופים סטריאוסקופיים עבור אנסטומוזיס מדויק.
- מחייב טיפול פוסט-אופרטיבי סטנדרטי והקרבה מתוזמנת (למשל, לאחר 28 ימים) כדי להבטיח הערכה עקבית של התפתחות וסקולופתיה כרונית.
- כולל שיקולי התאמה בעת הרחבה לזני עכברים שונים או לגדלי שתבלים שונים, אם כי ממדי השרוול מסייעים בשמירה על עקביות האנסטומוזיס.
- מוגבל למידול וסקולופתיה עורקית; תרומבוזיס ורידי או פתולוגיות ספציפיות ללב דורשים מודלים משלימים.
