כימות של צפיפות תאית ומאפיינים אנטיגניים באמצעות ריחוף מגנטי

טכניקה זו מאפשרת הפרדה של סוגי תאים ותאים שונים העוברים תהליכים שונים המבוססים אך ורק על צפיפות עם מעט מאוד מניפולציה בפרק זמן קצר. היתרונות העיקריים של שיטה זו הם כי זה פולשני מינימלית, דורש נפחים קטנים, מספק תוצאות מהירות, אינו תלוי קריאות קלאסיות, וכוח אדם מיוחד אינו נדרש. טכניקה זו יכולה להיות מיושמת לאיתור מחלות מרובות, למשל אנמיה ואלח דם.

כדי להתחיל להשתמש במכשיר פנס בלחיצה אחת כדי לדקור את האצבע של תורם דם חיובי גורם רזוס, ולאסוף 10 microliters של דם במיליליטר אחד של DPBS. הוסף מיקרוליטר אחד של צבע פלואורסצנטי בהשעיה מיליליטר אחת של רזוס גורם תאים חיוביים כדי להכתים פלואורסצנטית את קרום הפלזמה ודגורה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות. גלולה את התאים על ידי ספינינג ב 5, 600 פעמים G במשך 15 שניות לשטוף את הכדור שלוש פעמים באמצעות מיליליטר אחד של DPBS.

resuspend הכדור במיליליטר אחד של HBSS עם סידן ומגנזיום. השתמש בהתקן lancing בלחיצה אחת כדי לדקור את האצבע של תורם דם שלילי גורם רזוס ולאסוף שני microliters של דם. כדי להכין את הצינור הניסיוני המכיל רק חרוזים, להוסיף 174 microliters של HBSS עם סידן ומגנזיום, microliter אחד של חרוזי בקרה IgG, microliter אחד של חרוזים כבדים עם 1.2 גרם לצפיפות מיליליטר, ו 24 microliters של 500 מילימטר gadolinium.

כדי להכין את צינור הבקרה הניסיוני המכיל IgG, להוסיף 172 microliters של HBSS עם סידן ומגנזיום, microliter אחד של חרוזי בקרה IgG, microliter אחד של חרוזים כבדים, microliter אחד של דם שלילי גורם רזוס, microliter אחד של השעיית דם חיובית גורם רזוס מוכתם, ו 24 microliters של 500 מילימולר גדליניום. כדי להכין את הצינור הניסיוני מדגם, להוסיף 172 microliters של HBSS עם סידן ומגנזיום, microliter אחד של חרוזים מצופים אנטי RhD, microliter אחד של חרוזים כבדים, microliter אחד של רזוס גורם דם שלילי, microliter אחד של השעיית דם חיובית גורם רזוס מוכתם, ו 24 microliters של 500 מילימיליניום מילימולר. תגדיר את מכשיר הריחוף המגנטי.

ותטענו 50 מיקרוליטרים של הדגימה לתוך צינור נימי עד שהצינור יתמלא. לאטום את הקצוות של צינור נימי עם איטום נימי להבטיח כי אין בועות. מניחים את צינור נימי במחזיק הנימי בין המגנטים העליונים לתחתונים, מתאימים את הבמה ומתמקדים לצפייה אופטימלית.

המתן כחמש עד 20 דקות עד התאים והחרוזים להתיישב בעמדת שיווי המשקל המגנטי שלהם. באמצעות פרוטוקול זה, תאי הדם הופרדו בהתאם לגובה הריחוף באמצעות מכשיר הריחוף המגנטי. חרוזי צפיפות נמוכה וגבוהה שימשו כדי לספק גבהים ריחוף צפיפות והפניות גודל.

תאי הפולימורפונוקליר ריחפו מעל תאי הדם האדומים בריכוז יון דוליניום 21 מ"מ. תאי דם ישנים ריחפו בריכוז יון גדליניום 60 מילימולר. תאי הדם האדומים, תאי הפולימורפונוקליר והלימפוציטים הופרדו בריכוז יון גדליניום 40 מילימולארי בהתבסס על הצפיפות המהותית שלהם.

אנטיגן גורם רזוס זוהה על תאי הדם האדומים באמצעות חרוזים מצופים נוגדן IgG ו- Anti-RhD. מתחמי התא האדום חרוזים לא נוצרו בדגימת בקרת IgG, אבל תאי הדם האדומים מוכתמים פלואורסצנטית שנתפסו על ידי גורם רזוס חרוזים חיוביים זוהו. הכריכה של האנטי-RHB לתאים החיוביים של גורם הרזוס יצרה קומפלקס תאי חרוזים במרכז בצפיפות לסירוגין של החרוזים הלא מאוגדים ותאי הדם האדומים השליליים.

יתר על כן, המבנה המורכב אושר על ידי התבוננות פלואורסצנטיות הנפלטת. מתחמי חרוז B שנוצרו בין חרוזים בצפיפות גבוהה ונמוכה מצופים בנוגדנים עבור CR1 ו- CD47 מצביעים על נוכחות של תאי דם אדומים שמקורם שלפוחיות חוץ תאיות. כיסוי נימי מבלי להציג בועות הוא הצעד המאתגר ביותר ודורש תרגול.

שיטה זו יכולה לספק תובנה להמטולוגיה, המתמקדת במיוחד במחלות תאי דם אדומים.