טכניקה שונה לשימוש בלבבות מורין יילודים בהכנת לנגנדורף

גישה זו מבססת באופן אמין זלוף מדרדר של לב עכבר ה-ex vivo היילודי תוך פחות משלוש דקות. ובכך להפחית את גיל המחקר הצעיר ביותר האפשרי מכמה שבועות ל -10 ימים לאחר הלידה. מודל מדרדר מבודד זה מאפשר לחקור את לב היילודים בתקופה קריטית של התפתחות לב במין הניתן למהנדס גנטית ובעלות נמוכה.

בעוד שמודל זה מתאים את עצמו לחקר התגובות הפיזיולוגיות והפרמקולוגיות לאישמיה-רפרפוזיה בלב היילודים. זה יכול לשמש גם לבידוד קרדיומיוציטים. כדי לייצר את צינורית אבי העורקים של העכבר שזה עתה נולד, השתמשו במספריים חדים כדי לחתוך את הקצה ולהקהות את קצהה של מחט נירוסטה בעלת 26 מדים, תוך הקפדה שלא לחתוך או להגביל את קוטר לומן המחט.

לאחר מכן החליקו את קצה החתך כדי להסיר את כל הבורות על ידי גירוד עדין של הקצה הקהה בחלק העליון של ספסל המעבדה באמצעות תנועה הלוך ושוב. לאחר מכן, חברו את הצינורית המפוברקת למנגנון לנגנדורף והעריכו זרימה והתנגדות. מדידת קצבי הזרימה דרך הצינורית על ידי איסוף ומדידה של כמות המאגר במרווח של דקה אחת.

כדי לכמת את הפרש הלחץ על פני הצינורית בזמן שחיץ קרבס-הנסלייט זורם, מדוד את הלחץ במערכת עם ובלי הצינורית המחוברת. לאחר מכן חשב את התנגדות הצינורית באמצעות הנוסחה הבאה. לאחר מכן, הסר את צינורית 26 המדים ממנגנון לנגנדורף והצמד צינור בלחץ גבוה לאתר התצפית במנגנון.

לאחר מכן חברו את צינורית אבי העורקים לקצה הדיסטלי של הצינורות והורידו את האוויר מהצינוריות ואת הצינורית עם חיץ מחומצן, מה שמבטיח שכל הבועות יוסרו. כדי למנוע היווצרות של מיקרותרומבי כלילי, תן זריקה תוך-צפקית של הפרין לגור עכבר בן 10 ימים באמצעות מחט של 26 מדים על מזרק מיליליטר אחד. אפשר מספר דקות עבור הפרין להסתובב לפני שתמשיך עם הזרקה של כל הרדמה.

לאחר מכן, הניחו את העכבר המרדים בתנוחת השכיבה ואבטחו את הגפיים מיד עם אובדן ההכרה. התחילו לקצור ברגע שהחיה לא מגיבה לצביטת הבוהן בזמן שהחיה נושמת באופן ספונטני במהלך הנתיחה הראשונית. שימוש במספריים ניתוח ישרים גורם לחתך תת-אקסיפידי רוחבי על פני רוחב החיות וחושף את חלל הבטן.

בקשו מעוזר לתפוס את התהליך ה-xiphoid עם מלקחיים, ואז חתכו את הצלעות באופן דו-צדדי לאורך קו בית השחי האמצעי בכיוון הצפל ושחזרו את עצם החזה והצלעות באופן קרניאלי כדי לחשוף את איברי בית החזה. לאחר זיהוי הסרעפת בצורה מעולה, להפוך את החלק הקדמי לחלוטין. זהה את הווריד הנבוב התחתון האינפרא-דיאפרגמטי הנבוב מעל הכבד והעביר אותו עם מספריים איריס מעוקל תוך שמירה על פנים קל במתח צפאלאד על הקטע הפרוקסימלי עם מלקחיים של איריס.

לאחר מכן, חותכים אחורית לאורך המשטח הפנימי של עמוד השדרה באמצעות מספריים מעוקלים של איריס תוך משיכת הווריד הנבוב התחתון למעלה והחוצה מחלל בית החזה. כאשר הלב מגויס, זווית את המספריים קדימה ולנתק את כלי הדם הגדולים בצורה מעולה כדי להסיר לחלוטין את הלב והריאות. מיד להטביע את הדגימה בחיץ קר כקרח Krebs-Henseleit או מלוחים.

הלב צריך להפסיק לפעום תוך שניות. מניחים פיסת מגבת נייר בתחתית צלחת פטרי רדודה כדי לספק חיכוך לייצוב הלב במהלך התותח. הרטיבו את מגבת הנייר עם חיץ Krebs-Henseleit קר כקרח כדי למנוע מהלב להיצמד אליה.

הניחו את צלחת הפטרי המוכנה מתחת למיקרוסקופ הניתוח והתאימו את המיקוד. כעת, הניחו את צינורית אבי העורקים המחוברת לצינורות הארכת הלחץ הגבוה מתחת למיקרוסקופ הניתוח, יחד עם תפר משי 5-0 הקשור באופן רופף סביב מרכזו. לאחר הצבת איברי בית החזה שנכרתו בצלחת פטרי, זהה את התימוס על ידי הברק הלבן שלו ושתי האונות וכיוון את הדגימה כך שהתימוס יהיה קדמי ונעלה.

לאחר מכן, באמצעות מלקחיים מפרידים באופן בוטה את האונות של התימוס וחושפים את הכלים הגדולים. לאחר מכן זהה את אבי העורקים על ידי איתור תכונות הסתעפות מובחנות של קשת אבי העורקים והעתק אותה רק פרוקסימלית להמראה של העורק התת-קלבי באמצעות מספריים חדים עדינים. כעת תפסו בעדינות את אבי העורקים הטרנסקטציה באמצעות מלקחיים מעוקלים עדינים בסגנון תכשיטן, ופתחו בזהירות את אבי העורקים עם מחט קהה באורך 26 מדים, תוך הקפדה שלא לפגוע במסתם אבי העורקים.

באמצעות מלקחיים מעוקלים עדינים, תפסו את אבי העורקים סביב הצינורית ויזמו זלוף מדרדר כדי להגביל את הזמן האיסכמי. בקשו מהעוזר לתפוס את קצות התפר הקשור באופן רופף ולעטוף בזהירות את אבי העורקים סביב הצינורית. תפר את התפר מעל או מתחת למלקחיים המעוקלים העדינים ואז הידקו את התפר ואישרו את הלימות הזרימה הכלילית.

נתקו את צינורות הלחץ הגבוה ממנגנון לנגנדורף, תפסו את רכזת הצינורית ונתקו את המחט הבוטה מצינורות הארכת הלחץ הגבוה. לאחר מכן חבר במהירות את רכזת הצינורית למנגנון. ברגע שהלב תלוי על מנגנון לנגנדורף במצב הרגיל, זלוף הולם מאושר.

יש לקצץ בזהירות את הריאה, את התימוס ואת הרקמה העודפת. לאחר מכן סובבו את האטריום הנכון כדי לאפשר לפלוחי הסינוסים הכליליים לטפטף בחופשיות. צור קשר קטן בסוף תפר משי 5-0, ואז חודר חתיכה קטנה של סרט פרפין עם המחט ומחליק את הפרפין לקצה הקשור.

מעבירים בזהירות את המחט דרך פסגת החדר ומושכים את התפר דרך הלב עד שסרט הפרפין נצמד אל הקיר הצדדי של החדר. מעבירים את המחט דרך פתח מעיל החימום מלא המים של מנגנון הלנגנדורף, כך שניתן יהיה לעטוף את הלב ולחמם אותו. לאחר מכן חברו את המחט למתמר הכוח תוך הימנעות מטפטוף הסינוסים הכליליים.

התאימו את התפר כך שיפעילו 1 ל-2 גרם של מתח בסיסי כפי שמצוין על ידי המתח הדיאסטולי או מעקב אחר כוונות השפל. לאחר מכן הניחו אלקטרודות פני שטח על הקטבים העליונים והנחותים של הלב כדי לרשום את האלקטרוקרדיוגרמה. לבסוף, דגימת שפכים סינוסים כליליים לניתוח באמצעות קטטר תוך ורידי 24 מד.

אלקטרודות פני השטח שימשו להקלטת אלקטרוקרדיוגרמה רציפה, שאיפשרה לקבוע את הקצב והקצב הפנימיים. כל הלבבות הפגועים כראוי פועמים באופן ספונטני בקצב הסינוסים. אסטרטגיית זלוף זו ענתה על הצרכים המטבוליים של לב העכבר שזה עתה נולד, בהתחשב בייצור לקטט זניח ובמיצוי חמצן באחוזים נמוכים וצריכת גלוקוז.

משתנה פיזיולוגי פירושו, כמו קצב הלב הפנימי הממוצע המנוטר ולחצי הזלוף הממוצעים שנצפו באבי העורקים, נרשמו וחושבו גם הם. יש לקחת בחשבון כמה קריטריונים מחריגים כגון הזמן הנדרש כדי ליזום רפרפוזיה, משך הפרעת קצב ולחץ פרפוזיה של אבי העורקים כדי להבטיח עקביות של הכנת היילודים. לאחר הקמת זלוף, התערבות כגון אספקת תרופות, אינדוקציה של פציעת איסכמיה-רפרפוזיה, שינויים של מטבוליטים או מסירה של סוכנים אנזימטיים לבידוד קרדיומיוציטים עלולה להתרחש.