18 ביולי 2025
מאמר זה מספק הוראות מפורטות כדי לאפשר לחוקרים לבצע חסימת שופכן חד צדדית הפיכה בעכברים באמצעות מודל סטנדרטי המאפשר ניתוח של התוצאות המבניות והתפקודיות ארוכות הטווח לאחר היפוך חסימת שופכן ממושכת.
המעבדה שלי עובדת על המנגנונים והטיפול לשיפור תוצאות ארוכות טווח לאחר פגיעה בכליות, והמיקוד הספציפי של פרוטוקול זה הוא לפתח כלי לחקר תוצאות ארוכות טווח לאחר היפוך של חסימת שתן. פיתחנו מודל עכברי של חסימת שופכן הפיכה חד צדדית, המאפשר לנו להעריך את התוצאות התפקודיות והמבניות ארוכות הטווח של היפוך חסימת שתן בכליה. שיטות אחרות דורשות ניתוחים מרובים או מומחיות מיקרו-כירורגית, שלרוב המעבדות אין גישה אליהם. בנוסף, מכיוון שמדובר בחסימה חד צדדית, רוב השיטות האחרות אינן מאפשרות הערכה תפקודית של התאוששות מבלי לבצע בדיקות תפקודי כליות מפוצלות. באמת יש רק שניים. הראשון הוא מיקום עקבי של מהדק כלי הדם באותו מיקום על השופכן הפרוקסימלי בכל ניסוי, והשני הוא הסרת מהדק כלי הדם מספר ימים לאחר מכן מבלי לגרום נזק לשופכן או לכליה.
[רייצ'ל] כדי להתחיל, הכינו את הצד הכירורגי של עכבר מורדם עם חומרי חיטוי. בצע חתך גבי אורכי של 1.5 סנטימטר לאורך קו האמצע דרך העור והשכבות התת עוריות בעזרת מספריים ומלקחיים. בצע חתך קטן דרך שריר האגף השמאלי והפאשיה מעל הכליה. לאחר מכן בעזרת זוג מלקחיים, החצינו את הכליה השמאלית. שימוש במלקחיים קהים. נתח בזהירות את השומן בקוטב התחתון ורקמת חיבור כלשהי ליד השופכן. אתר את אזור השופכן. לאחר מכן הפרד את השופכן יחד עם רקמת החיבור שלו מהפדיקל הכלייתי כדי להימנע מהכללת וריד הכליה והעורק עם המהדק. השתמש ב-clamp אפליקציות כדי לפתוח את כלי הדם clamp ולמקם אותו ישירות מתחת לאגן הכליה על השופכן. השתמש בסימונים על המהדק כדי להבטיח לחץ אחיד על כל העכברים. כעת השתמש במקלון צמר גפן סטרילי ספוג במי מלח כדי לדחוף בעדינות את הכליה עם המהדק בחזרה לחלל הרטרופריטונאלי. לאחר מכן תפר את שכבת השריר באמצעות תפר נספג. השתמש בקליפסים לעור כדי לסגור את שכבת העור. כדי להסיר את מהדק השופכן, הסר את תפסי הפצע ולאחר מכן נקה את אזור הניתוח מבלי לעצב מחדש באמצעות החתכים המקוריים כדי לגשת ל-clamp. פתח מחדש את שכבת השריר וחשוף את החלל הרטרופריטונאלי. השתמש במלקחיים כדי לאתר בזהירות את המהדק בחלל הרטרופריטונאלי מבלי להוציא את הכליה. בעזרת אפליקציות מהדק, פתח בעדינות את המהדק תוך משיכת הרקמה שמסביב באמצעות מלקחיים כדי להסיר אותה בבטחה. כעת הוצא את הכליה כדי לבדוק את אגן הכליה לאיתור חסימה. אגן כליה נפוח מאשר הידרונפרוזיס. דחף את הכליה בחזרה לחלל הרטרופריטונאלי באמצעות צמר גפן סטרילי ספוג במי מלח ותפר את החתך סגור כפי שהודגם. כדי לבצע כריתת כליה נגדית, פתח מחדש את אתר הגב באמצעות חתך העור המקורי. בגודל, שריר האגף הימני והפאשיה מעל הכליה. לאחר מכן הוצא את הכליה הימנית באמצעות מלקחיים. החזק את הכליה הימנית בעזרת מלקחיים חלקים ומעוקלים ונתח את הקוטב העליון והתחתון ללא הרקמה שמסביב. לאחר שחרור הכליה, קשרו תפר משי פורו סביב כלי הכליה והשופכן באמצעות קשר כירורגי כפול. המתן כ-30 שניות עד שהכליה מתכהה. לאחר מכן החזק אותו עם המלקחיים המעוקלים החלקים והסר אותו על ידי חיתוך דיסטלי לקשר באמצעות מספריים מעוקלים. דחפו בעדינות את פדיקל הכליה שנותר בחזרה לחלל הרטרופריטונאלי באמצעות צמר גפן סטרילי ספוג במי מלח, ולאחר מכן סגרו את שכבות השריר והעור באמצעות תפרים וקליפסים. מדידות הישרדות ותפקוד כליות אופייניות נלקחו 84 ימים לאחר חסימה חד צדדית הפיכה של השופכה. מחקרים פונקציונליים השוו חסימת שופכן חד צדדית הפיכה עם כריתת כליה בלבד עבור חנקן אוריאה בדם, קצב סינון גלומרולרי דרך העור ואוסמולריות שתן לאחר 18 שעות של מחסור במים. ערכי האוסמולריות בשתן היו נמוכים באופן ניכר מעכברי ביקורת לכריתת כליה באותן נקודות זמן.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
מחקר זה מציג פרוטוקול סטנדרטי לביצוע חסימה הפיכה של השופכן בצד אחד בעכברים, המאפשרת ניתוח של תוצאות ארוכות טווח לאחר ביטול החסימה השפשופית.
תוצאות כלייתיות ארוכות טווח לאחר ביטול של חסימה בדרכי השתן נותרות אתגר קריטי בנפרוֹלוגיה תרגומית ובפיתוח תרופות פרה-קליני. מודל עכברים זה מאפשר הערכה חזקה של התאוששות מבנית ותפקודית של הכליות, ותומך בביטחון ניבוי בתיקוף מטרות והסרת סיכונים מכניסטיים עבור פורטפוליו של מחלות כליות כרוניות ופגיעות כלייתיות חריפות. השחזוריות וההתאמה שלו למגוון זנים ממיגות אותו ככלי בסיסי עבור שלבי גילוי מוקדמים ומסלולי מחקר פרה-קליניים.
מודל זה מגשר בין שלבי הגילוי המוקדמים, זיהוי מובילים (lead identification) ותיקוף פרה-קלנימי, בכך שהוא מאפשר הערכה אורךית של תוצאות כלייתיות לאחר היסוגיות של הפגיעה.