המחשה של נקטרי עלים וברקטיאלים של כותנה באמצעות מיקרוסקופיה דיגיטלית לשיפור דיוק הניקוד ושימור הנתונים

המחקר הנוכחי מתמקד בשיטה שמדרגת במדויק את ביטוי תכונת הצוף. כדי להמחיש את ביטוי תכונת הצוף, נעשה שימוש גם במצוף עלי הכותנה וגם ברקטיאלי כרקמות מודל. שיטה זו מתגברת על המגבלה של ניקוד מסורתי, שהיא לא אמינה ולא מדויקת לניקוד מסחר נקטרי.

כדי להתחיל, העבירו מקרר ושקיות זיפלוק מסומנות לחממה לאיסוף דגימות, אספו רקמת עלים צעירים מצמחי כותנה שגדלו בחממה בני חודשיים עד שלושה והכניסו אותם לשקיות דגימות מסומנות. הניחו לפחות שני עלים לכל דגימת צמח בשקית הדגימה המתויגת ואטמו את השקית היטב לאחר האיסוף. הניחו כל שקית דגימה אטומה המכילה רקמת עלים בתוך המקרר.

אספו פרחים בריאים מהענפים העליונים כאשר הצמחים נמצאים בשלב הפריחה הבינוני. שים לפחות שני פרחים בשקית דגימות מסומנת ואטום את השקית. העבר את שקיות הדגימה האטומות המכילות פרחים למקרר להובלה למעבדה.

הפעל מיקרוסקופ והשלים את שלבי ההפעלה הראשוניים. מניחים יריעת A4 לבנה חצי מקופלת שתתאים לגודל שלב המיקרוסקופ על הבמה. השתמש בכפתורי האור הקטנים של בקר הקונסולה כדי לכוון את האור בשלב המיקרוסקופ לעוצמה המקסימלית.

אחר כך סובב את כפתור הבהירות הגדולה שלושה רבעים מהדרך כדי לכוון אותו לבינוני גבוה. במחשב, בחר בהגדלה של פי 10 בתוכנת המיקרוסקופ. מניחים את רקמת העלה על הגיליון הלבן החתוך מראש בשלב המיקרוסקופ כשהצד האבקסיאלי פונה כלפי מעלה ומרכז אותו על הבמה.

סובב בעדינות את הקורס ואת כפתורי הכיוון העדינים כדי להתמקד בצלע האמצעית של העלה. המשך לכוון עד שהתמונה נראית ברורה וללא טשטוש. מקמו את הקצה התחתון של הצלע האמצעית במקום בו נמצא הנקטרי במרכז שדה הראייה, תוך שמירה על ראות ברורה של הוורידים הצדדיים המתפצלים.

שימוש בכפתורי הקורס והכוונון העדין משפרים עוד יותר את המיקוד לשיפור בהירות התמונה הדיגיטלית. ללכוד את תמונת הצוף. כאשר התוכנה מבקשת זאת, שמרו את התמונה עם מספר הזיהוי של הדגימה במיקום הנדרש, ואז הקצו ציון מאחד עד ארבע בהתבסס על פנוטיפ צוף העלה שנצפה.

השתמש במלקחיים או ביד כדי להסיר את הברקטים מהפרח. הנח את הפרח על קרש חיתוך נקי. באמצעות להב סטרילי, חתכו את גבעול הפרח, ואז עשו חתך ישר לאורך קצה הברקטים שהוסרו.

הנח את רקמת הפרח המוכנה הפוך על הדף הלבן החתוך מראש בשלב המיקרוסקופ. השתמשו בכפתורי הקורס והכוונון הדק כדי לשפר את הבהירות של התמונה המוצגת על המסך. שמור את התמונה עם מספר הזיהוי המתאים.

הניקוד הדיגיטלי של פני השטח האבקסיאלי של העלה בצד התחתון של הצלע האמצעית הראה שני פנוטיפים עם ציון אחד ללא נקטריות על הצלע האמצעית. ותקבל ארבע נקודות עם צוף מפותח לחלוטין עם צוף. כאשר דגימות פרחים נותחו עבור נקטרי ברקטאליים, נצפו שני פנוטיפים כאשר ציון אחד הראה שאין נקטרי וציון ארבע הראה צוף שלם המפיק צוף.

תמונות דיגיטליות של צמחי צוף הראו בבירור הן את מבנה הצוף עלים והן את הברקטה בהגדלה של 10x, 20x ו-40x. תמונות דיגיטליות נבחרות של עלים התואמות לפורמט הניקוד הסטנדרטי הציגו ציון אחד בהיעדר צוף, ציון שתיים עם צוף לא מפותח, ציון שלוש עם צוף קטן יותר, וציון רביעי עם צוף מפותח במלואו. ניקוד מדויק של צמחים ללא צוף מתוך האוכלוסיות המופרדות של הכלאות נקטרי וללא נקטרי הוא חיוני לבחירת צמחים ללא צוף שיכולים להפחית נזקי חרקים מהצמחים וכן להפחית אובדן יבול.

לכן בחירת תכונה זו חשובה ליישומים בהמשך, כמו סימני DNA הקשורים לתכונת ה-Nectary Less, שהם כלים חשובים לבחירה בעזרת סמנים.