Genome Editing Techniques

Questo video spiega il concetto degli editor di basi citosine mediati da CRISPR per indurre la sostituzione nucleotidica mirata.

In questo video, dimostriamo l'editing genomico all-in-one basato su CRISPR-Cas9 in cellule in coltura in cui Cas9 e sgRNA sono forniti come un singolo costrutto plasmidico alle cellule. Il sistema CRISPR-Cas9 e il gene desiderato da inserire sono stati introdotti nelle cellule attraverso la tecnica dell'elettroporazione per facilitare il successo dell'editing genetico.

Questo video dimostra una tecnica di editing del genoma basato sulla nucleasi a dita di zinco in cellule staminali pluripotenti umane (hPSC). Poiché le hPSC possono potenzialmente essere differenziate in vari tipi di cellule, questa tecnologia è utile per studi patologici e farmacologici in vitro in modo paziente-specifico.

Questo video descrive una precisa tecnica di editing del genoma in cellule staminali pluripotenti indotte umane, o hiPSC, utilizzando TALEN per creare rotture a doppio filamento in un locus mirato, inducendo la riparazione diretta dall'omologia per l'integrazione genica della proteina di fluorescenza.

In questo video, dimostriamo l'integrazione del transgene sito-specifico mediata da phiC31 nell'embrione di Anopheles tramite microiniezione. Questo metodo aiuta a introdurre i geni desiderati in un sistema ospite per la ricerca e le applicazioni industriali.

In questo video, dimostriamo la generazione di piante transgeniche di Arabidopsis che esprimono un transgene stabile attraverso la trasformazione genica basata su cromosomi artificiali batterici binari mediata da Agrobacterium.

In questo video, dimostriamo una procedura per generare una linea transgenica stabile di zebrafish che esprime costitutivamente una proteina indicatore di tensione fluorescente dopo la co-iniezione del sistema di trasposone Tol2 che comprende l'mRNA della trasposasi e il costrutto del trasposone Tol2 che codifica per l'indicatore di tensione fluorescente.

Questo video dimostra la procedura per generare motoneuroni mediante trasfezione di iPSC umane con il sistema di trasposoni PiggyBac mediante l'espressione ectopica di fattori di trascrizione specifici per il lignaggio.

Questo video dimostra un silenziamento genico basato sull'interferenza CRISPR nella Leptospira patogena. La repressione mirata dell'espressione genica utilizzando un sistema CRISPR/Cas che blocca la formazione di mRNA aiuta a identificare i geni candidati per studi patologici e farmacologici.

Questo video descrive una procedura per il knockout del gene bersaglio utilizzando un sistema Cre-ricombinasi inducibile dal tamoxifene dopo l'iniezione intraperitoneale di tamoxifene in un modello murino.

Questo video descrive una tecnica di knockout genico che utilizza un concamero CRISPR per eliminare simultaneamente più geni in cellule organoidi intestinali di topo in coltura. Questo metodo viene utilizzato per eliminare un gene malato e per chiarire la funzione di un gene e dei suoi paraloghi.

In questo video, dimostriamo un metodo per eseguire la trasduzione di vettori lentivirali shRNA per ottenere linee cellulari knockdown stabili in cellule staminali e progenitrici ematopoietiche immortalizzate (iHSPC).

Questo video dimostra il sistema di espressione genica della tetraciclina, o Tet-On, in un modello murino. In presenza di doxiciclina, un derivato della tetraciclina, il sistema Tet-On costituito da una proteina transattivatrice controllata da tetraciclina inversa si attiva ed esprime il gene di interesse.

In questo video, descriviamo una procedura per eseguire la trasfezione inversa di siRNA in adipociti per modulare l'espressione di una proteina bersaglio.

Questo video descrive il metodo di regolazione dell'espressione genica nelle cellule in coltura mediante trasfezione con un plasmide contenente un gene di interesse e un plasmide regolatorio. L'espressione di questo plasmide può essere controllata dalla tetraciclina o dai suoi analoghi sintetici, rendendo questo sistema un modello utile per studiare l'espressione genica regolabile.

Questo video descrive una tecnica di knockdown genico che utilizza morfolini di blocco traduzionale microiniettati nello stadio di una cellula del pesce delle caverne. I morfolini sono oligonucleotidi di DNA che si legano alla sequenza complementare dell'mRNA bersaglio e ne bloccano la traduzione in una proteina. Di conseguenza, i morfolini sono utilizzati come strumenti molecolari per fermare o ridurre l'espressione di un gene in modo transitorio.