Immune Response

Questo video mostra l'imaging in vivo per studiare le dinamiche di reclutamento dei neutrofili in un sito di infezione in un topo transgenico immunocompromesso con neutrofili che esprimono GFP. Comporta l'iniezione di batteri luminescenti per causare un'infezione. Ciò porta al reclutamento di neutrofili nel sito di infezione, il cui tracciamento viene effettuato mediante imaging.

In questo video, dimostriamo l'attivazione dei macrofagi derivati dal midollo osseo in risposta al lipopolisaccaride batterico e all'immunoglobulina per via endovenosa.

Questo video dimostra l'attivazione dei macrofagi peritoneali di un topo utilizzando immunoglobuline per via endovenosa e lipopolisaccaride batterico. La co-stimolazione attiva i macrofagi peritoneali in macrofagi antinfiammatori dotati di attività immunoregolatrice.

Questo video dimostra una tecnica ex vivo per indurre la morte delle cellule cerebrali mediata da cellule T CD8+ citotossiche. Dopo aver ottenuto le fette di cervello, le cellule T CD8+ attivate dirette verso gli oligodendrociti vengono trasferite sulle fette per colpire la guaina mielinica e gli oligodendrociti. Dopo l'incubazione, il danno alla mielina e la morte neuronale possono essere valutati istologicamente nelle regioni di interesse.

In questo video, descriviamo un protocollo per testare l'efficacia di un vaccino acellulare contro la pertosse contro l'infezione da Bordetella pertosse nei topi. Dopo la vaccinazione, i topi sono stati sottoposti a infezione e il loro omogenato tissutale è stato coltivato per analizzare le colonie batteriche come lettura dell'immunità protettiva indotta dal vaccino.

In questo video, descriviamo un metodo per studiare la dinamica degli organelli nei linfociti B dopo la loro attivazione con microsfere rivestite di antigene.

Questo video mostra l'attivazione delle cellule B in vitro. Il processo coinvolge l'interazione dell'antigene con i recettori delle cellule B, portando al rimodellamento del citoscheletro, alla formazione delle sinapsi immunitarie, al movimento dei lisosomi, all'internalizzazione dell'antigene, all'elaborazione e alla successiva presentazione sulle molecole MHC per l'attivazione delle cellule B.

Questo video dimostra una tecnica per generare un modello murino di colite indotta da sostanze chimiche, una malattia infiammatoria intestinale. Al topo è consentito consumare una soluzione di destrano solfato di sodio (DSS) per una durata adeguata. Dopo il consumo, il DSS danneggia il muco e la barriera dello strato epiteliale nel colon, consentendo ai microbi intestinali di entrare nel tessuto sottostante, dove vengono percepiti dalle cellule immunitarie residenti per mediare una risposta...

In questo video, dimostriamo l'effetto di diverse concentrazioni di anticorpi anti-c-fms sull'osteoclastogenesi, che è il processo di formazione degli osteoclasti dai progenitori degli osteoclasti.

Questo video dimostra la quantificazione dei mediatori infiammatori durante l'infezione incubando cellule immunitarie derivate da tessuto polmonare umano con Haemophilus influenzae. La citometria a flusso viene utilizzata per misurare la fluorescenza delle citochine nei linfociti marcati, correlata con la produzione di citochine pro-infiammatorie in risposta all'infezione batterica.

In questo video, dimostriamo un test di chemiluminescenza in vitro per rilevare la generazione di specie reattive dell'ossigeno da parte dei neutrofili in seguito all'esposizione a un biofilm batterico opsonizzato.

Questo video mostra un test in vitro per studiare l'interazione neutrofilo-biofilm. I batteri patogeni incorporati nel biofilm e i neutrofili isolati sono stati marcati utilizzando etichette fluorescenti e la risposta immunitaria dei neutrofili e l'evasione della risposta immunitaria da parte dei batteri sono state valutate utilizzando un microscopio a fluorescenza.

Questo video mostra un metodo per rilevare l'attivazione dell'inflammasoma NLRP3 nei macrofagi utilizzando sonde reporter fluorescenti. Le cellule vengono trattate con ionofori di potassio e glicina per indurre l'assemblaggio dell'inflammasoma e l'attivazione della caspasi-1. Le sonde reporter fluorescenti visualizzano la caspasi-1 attivata e le cellule vengono colorate con un colorante fluorescente per la visualizzazione dei nuclei.

Questo video dimostra una tecnica per studiare la formazione di inflammasomi NLRP3 (NOD-like receptor family pyrin domain-containing 3) nei macrofagi primari tramite immunofluorescenza. I macrofagi vengono prima innescati con lipopolisaccaride batterico (LPS) per sovraregolare l'espressione della proteina NLRP3. L'esposizione dei macrofagi alla nigericina, uno ionoforo di potassio, porta all'attivazione di NLRP3 e alla formazione di inflammasomi, che vengono visualizzati tramite...

Questo video dimostra il test della lattato deidrogenasi per rilevare la morte dei macrofagi mediata dall'inflammasoma. I macrofagi sono esposti al lipopolisaccaride per il priming, seguito dall'esposizione alla nigericina per causare la morte cellulare indotta dall'inflammasoma, che è determinata dal saggio della lattato deidrogenasi.

Questo video dimostra l'induzione e la visualizzazione di trappole extracellulari neutrofile o NET in neutrofili pre-marcati utilizzando siero paziente contenente anticorpi citoplasmatici anti-neutrofili. Inoltre, l'utilizzo di un colorante di DNA impermeabile e della microscopia a fluorescenza consente la visualizzazione dei NET.

Questo video dimostra l'isolamento dei lipidi dai neutrofili umani mediante un sistema di solventi bifasici che utilizza metanolo e cloroformio.

In questo video, dimostriamo un test di citotossicità per valutare l'infezione da Cryptococcus neoformans, un fungo patogeno, nei macrofagi. La citotossicità è determinata dal rilascio dell'enzima lattato deidrogenasi citoplasmatico dovuto alla lisi dei macrofagi causata dall'infezione da Cryptococcus neoformans.

Questo video mostra un sistema di infezione basato su inserti a membrana permeabile per valutare l'impatto delle tossine batteriche secrete. Eliminando il contatto diretto tra il patogeno batterico e le cellule ospiti utilizzando una membrana permeabile, questa tecnica consente di studiare l'effetto delle tossine secrete dai batteri patogeni sulle cellule ospiti dei mammiferi.

Questo video mostra un sistema di inserti a membrana permeabile per studiare l'impatto delle tossine batteriche sulle cellule ospiti in modo controllato e isolato. Questo approccio consente l'esposizione selettiva delle cellule alle tossine mantenendo una separazione fisica che imita la naturale interazione ospite-patogeno.

Questo video dimostra il test di aderenza batterica per valutare l'aderenza batterica marcata con GFP alla coltura cellulare epiteliale per studiare la dinamica delle interazioni ospite-patogeno utilizzando l'imaging basato su microscopia a fluorescenza.

Questo video dimostra una tecnica per rilevare la risposta locale e globale degli ioni calcio all'infezione da Shigella di cellule epiteliali umane. La shigella invade le cellule ospiti e rilascia effettori di invasione, influenzando i livelli di calcio intracellulare. L'ampiezza e la frequenza del calcio citosolico locale e globale sono studiate utilizzando un indicatore fluorescente.

Questo video analizza la formazione di sinapsi immunitarie tra le cellule T nelle preparazioni di pan-leucociti non purificate e le cellule di Raji caricate con Staphylococcus aureus enterotossina B. L'arricchimento di CD3 e F-actina è osservato nella sinapsi immunitaria utilizzando la citometria a flusso di imaging.

Questo video mostra un test per studiare la regolazione della fagocitosi dei macrofagi da parte delle cellule staminali mesenchimali (MSC) in una co-coltura. Dopo la co-coltura di MSC con macrofagi, vengono aggiunte particelle di zimoso non opsonizzate coniugate a un fluoroforo sensibile al pH che vengono fagocitate dai macrofagi. Con l'aumento della fagocitosi, l'intensità della fluorescenza aumenta, consentendo la determinazione della regolazione dell'attività fagocitaria mediata dalle MSC.

In questo video, dimostriamo la somministrazione intracisternale di Neisseria meningitidis in un modello murino per generare l'infezione da meningite.

In questo video, descriviamo un metodo per identificare gli inibitori della chinasi a piccole molecole che modulano l'apoptosi di timociti immaturi double-positivi CD4+CD8+ autoreattivi. L'apoptosi è indotta nei timociti doppi positivi attivandoli con sfere magnetiche rivestite anti-CD3 e anti-CD28; Segue un trattamento con inibitori di piccole molecole e un'analisi con citometria a flusso per rilevare se gli inibitori modulano l'espressione del marcatore apoptotico.

In questo video, descriviamo una procedura per eseguire una nano-iniezione di un virus a RNA a singolo filamento a senso positivo in mosche Drosophila maschi adulti e successivamente studiamo le risposte antivirali avviate a causa dell'infezione. L'analisi della reazione a catena della polimerasi identifica la sovraregolazione di geni specifici nei moscerini infetti che indicano l'attivazione di vie di risposta immunitaria, tra cui l'interferenza dell'RNA e la segnalazione JAK/STAT.

Questo video dimostra il metodo di colorazione con ematossilina ed eosina (H&E) per valutare il danno al colon in un modello murino di colite indotta da DSS, una malattia infiammatoria intestinale. Dopo aver isolato il colon da un topo trattato con DSS e aver ottenuto sezioni del tessuto, la colorazione H&E delle sezioni aiuta a identificare il danno tissutale mediato dall'infiammazione.

In questo video, descriviamo la metodologia per la creazione di un sistema di coltura di organi intestinali ex vivo per studiare le interazioni tra frammenti di tessuto intestinale di topo e specifici batteri intestinali. Il dispositivo è costituito da due coppie di porte di ingresso-uscita, la prima che collega il lume del tessuto intestinale e fornisce la specifica sospensione batterica in esso, e la seconda che fornisce continuamente terreni ai pozzetti del dispositivo per mantenere la...

Questo video mostra una tecnica in vitro per studiare l'impatto del trattamento antimicrobico sugli aggregati di Pseudomonas aeruginosa (Pa). Le cellule Pa marcate in fluorescenza vengono coltivate come aggregati, imitando il modello di crescita durante l'infezione. Dopo aver sfidato gli aggregati con una concentrazione subletale dell'antibiotico colistina, la valutazione in tempo reale dell'interazione batterio-antibiotico viene eseguita tramite microscopia a fluorescenza.

Questo video dimostra una tecnica di quantificazione in vitro per determinare l'infezione da Listeria monocytogenes dei macrofagi mediante il test dell'unità formante colonie. Le colonie batteriche sulla piastra di agar rappresentano la popolazione batterica intracellulare che sfugge al meccanismo di difesa dell'ospite e sopravvive all'interno dei macrofagi.

In questo video, quantifichiamo la Listeria monocytogenes intracellulare ed extracellulare, un batterio patogeno intracellulare, in seguito alla loro infezione di macrofagi in coltura in vitro utilizzando la citometria a flusso.

Questo video dimostra la nano-iniezione di sospensione batterica nella cavità del corpo della mosca, con conseguente moltiplicazione batterica e infezione. La risposta immunitaria della mosca elimina alcuni batteri, mentre altri sfuggono all'autorizzazione immunitaria e sopravvivono all'interno dell'ospite causando un'infezione.

Questo video mostra una tecnica per infettare la Drosophila introducendo un batterio patogeno direttamente nella loro cavità corporea. Questo metodo aggira le barriere epiteliali e altri meccanismi di difesa passiva, consentendo l'induzione di un'infezione sistemica. Dopo l'infezione, la risposta immunitaria risultante viene valutata monitorando la mortalità delle mosche ed eseguendo saggi a valle.

In questo video, dimostriamo una tecnica per misurare la carica batterica di E. coli dopo aver iniettato E. coli nel torace di Drosophila melanogaster.

In questo video, dimostriamo il test dell'effetto citopatico per determinare la dose virale infettiva in coltura tissutale del virus Drosophila C sulle cellule Drosophila S2*. Una serie di concentrazioni virali viene utilizzata per infettare le cellule in coltura. Viene determinata la percentuale di cellule che presentano cambiamenti strutturali e questi dati vengono utilizzati per calcolare la dose infettiva della coltura tissutale.

Questo video dimostra un metodo per indurre l'infiammazione della superficie oculare e la disfunzione della ghiandola di Meibomio in un modello murino. La stimolazione del sistema immunitario del topo utilizzando un immunogeno e la successiva restimolazione con lo stesso immunogeno promuovono l'infiammazione della superficie oculare, che provoca l'ostruzione della secrezione della ghiandola di Meibomio attraverso gli aggNET prodotti dai neutrofili e porta alla malattia dell'occhio secco.

Questo video dimostra l'attivazione delle proteine caspasi nei macrofagi umani utilizzando proteine reporter di complementazione a fluorescenza bimolecolare. I pro-domini della caspasi-1 sono fusi con frammenti non fluorescenti di proteine di Venere, che vengono reclutati nei complessi dell'inflammasoma. La vicinanza degli inflammasomi induce il ripiegamento e la fluorescenza dei frammenti di Venere, confermando l'attivazione delle caspasi nei macrofagi.

Questo video dimostra l'effetto dei preparati a base di prodotti del tabacco, TPP, sulla produzione di citochine da cellule mononucleate del sangue periferico umano utilizzando la citometria a flusso. Il trattamento delle cellule con TPP riduce la produzione di citochine pro-infiammatorie, che viene stimata dopo la stimolazione con lipopolisaccaridi, seguita da immunocolorazione e analisi di citometria a flusso.

In questo video, dimostriamo la preparazione di biofilm in vitro da parte di S. aureus in una piastra multipozzetto rivestita di poli-L-Lisina. La piastra formata da biofilm può essere utilizzata per esperimenti a valle.

Questo video dimostra una tecnica in vitro per stimolare i linfociti tramite Haemophilus influenzae (NTHi) non tipizzabile e per valutare la risposta immunitaria. L'incubazione di cellule mononucleate isolate del sangue periferico (PBMC) con NTHi fa sì che le cellule batteriche stimolino i linfociti T, portando alla produzione di citochine. Dopo aver inibito la secrezione di citochine, viene eseguita la colorazione in immunofluorescenza per rilevare le citochine intracellulari accumulate nei...

Questo video dimostra la valutazione della colite indotta da sostanze chimiche tramite colorazione immunoistochimica del tessuto del colon di topo. In una sezione di tessuto colorato, la presenza di un gran numero di cellule immuno-responsive nel tessuto danneggiato rappresenta l'infiltrazione di cellule immunitarie durante la colite.

In questo video, studiamo l'effetto di un intero mezzo condizionato dal fumo, un preparato di prodotti del tabacco combustibile, sull'uccisione delle cellule K562 da parte delle cellule mononucleate del sangue periferico effettore.

Questo video dimostra una tecnica in vivo per valutare un antigene di prova inducendo un'infiammazione cutanea in un modello murino. L'antigene del test, un aptene in una soluzione di olio/acetone, viene applicato localmente sulla pelle dell'orecchio del topo e l'infiammazione della pelle viene valutata dopo un periodo adeguato.

Questo video mostra una procedura di biopsia del punzone per creare una ferita precisa in un modello murino. L'escissione espone lo strato sottocutaneo della pelle, fornendo un sito adatto per lo studio delle risposte immunitarie all'infezione patogena localizzata.