Creazione di Murine aneurismi dell'aorta addominale Sperimentale con elastasi

Questa procedura chirurgica utilizzata per creare un aneurisma dell'aorta addominale inizia con un'incisione addominale mediana. I contenuti addominali vengono spostati lateralmente e tutti i rami aortici vengono legati. Le porzioni prossimale e distale dell'aorta vengono legate.

Il cuore viene perforato con un ago e un'infusione di elastasi viene somministrata attraverso un tubo di polietilene con estremità riscaldata e affusolata. Al termine dell'infusione, l'autotomia dell'aorta è chiusa. I legami vengono rimossi, l'aorta si riempie di sangue e la cavità addominale viene chiusa.

Si lascia quindi il topo in fase di recupero e l'aneurisma sarà completamente dilatato entro 14 giorni. Ciao, sono Julian Asma del laboratorio di Fetal Cell del Dipartimento di Medicina Cardiovascolare della Stanford University. Oggi vi mostrerò la procedura per iniettare un nuovo aneurisma sperimentale dell'aorta addominale con elastasi.

Utilizziamo questa procedura nel tuo laboratorio per studiare le PE dell'arteria addominale S.So. Cominciamo. Per iniziare i tuoi esperimenti, seleziona un topo di interesse, ad esempio un topo C57 black six, e anestetizzalo con isoflurano inalato fino a quando il topo non perde conoscenza. Tieni presente che diverse linee di topi possono variare per quanto riguarda la velocità di crescita dell'aneurisma.

Rimuovere il topo anestetizzato dalla camera su un banco di preparazione adeguatamente illuminato. Rasare il pelo dall'addome, dalla fine dell'osso pubico fino alla radice delle zampe. Utilizzare una crema depilatoria per rimuovere il pelo in eccesso.

Strofinare la pelle nuda con alcol al 70% fino a quando tutti i peli sono rimossi dalla zona rasata. Quindi strofinare la pelle almeno tre volte con Betadine, alternando alcol tra un'operazione e l'altra. Ora, posizionare il topo in posizione supina sul campo operatorio per mantenerlo incosciente.

Durante l'intervento chirurgico, posizionare un tubo sul naso che eroghi iso fluorano allo stesso flusso utilizzato per indurre l'incoscienza. L'elastasi viene mantenuta sul ghiaccio ed estratta in una siringa. La siringa viene quindi bloccata e posizionata accanto al campo operatorio, e il catetere viene collegato.

È importante che la punta del catetere rimanga sterile, il che si ottiene posizionando la punta in un vial sterile. Prima di incidere il topo, assicurarsi che verrà utilizzata una tecnica sterile. Iniziare indossando guanti sterili.

Gli strumenti chirurgici, le forbici, i pinzette per aghi e le pinze devono essere sanificati prima dell'intervento chirurgico. Prendetevi un momento per prestare attenzione ai vostri preparativi e cercate di eliminare eventuali altre fonti potenziali di contaminazione durante l'intervento. Se la tecnica sterile viene compromessa durante la procedura, sterilizzate nuovamente lo strumento in un sterilizzatore a perle calde.

Una volta che tutto è pronto, iniziare l'intervento chirurgico con un'incisione addominale mediana lunga all'interno della cavità addominale. Spostare il contenuto addominale verso lo spazio addominale libero o retrarre all'esterno dell'addome con garza sterile per esporre l'aorta addominale. Utilizzare ora pinze per isolare con attenzione l'aorta addominale dal livello della vena renale sinistra fino alla biforcazione.

Nel caso illustrato, è presente un'unica branca situata al di sopra del sito in cui si pratica la legatura dell'aorta e pertanto non necessita di essere legata. Se sono presenti rami aortici compresi tra i siti delle legature aortiche distale e prossimale, legare tali rami entro un centimetro dalla biforcazione con 10 suture autologhe; posizionare suture provvisorie in seta 6.0 nelle porzioni prossimale e distale dell'aorta per arrestare il flusso sanguigno.

Eseguire ora un'autotomia alla biforcazione. Iniziare perforando la biforcazione con un ago da 30 gauge. Un tubo di polietilene conico riscaldato può essere introdotto attraverso l'autotomia AOR e fissato con un nodo.

Utilizzare la pinzetta per inserire con attenzione e delicatezza il tubo nell'aorta. Prestare attenzione a non rimuovere il layer endoteliale applicando una pressione di 100 millilitri. L'aorta è stata perfusa con elastasi mediante mercurio da un sacco di soluzione salina posizionato all'altezza di 136 centimetri.

Assicurarsi che non ci sia aria nel tubo, altrimenti la pressione non sarà esatta. La soluzione salina contiene 4,5 unità per millilitro. Elastasi pancreatica suina di tipo uno, e dovrebbe riempire l'aorta in cinque-quindici minuti.

Durante la perfusione, l'aorta si dilata tipicamente fino a raggiungere circa il 140% del suo diametro originale. Al termine, rimuovere la perfusione e chiudere l'autotomia aortica con un punto di sutura 10 aught per evitare restringimenti. Dopo la chiusura dell'autotomia, deve essere rimossa anche la legatura distale.

Se dal sito riparato dell'autotomia proviene poca o nessuna emorragia, si rimuove la legatura prossimale. Se si verifica sanguinamento, posizionare ulteriori legature temporanee con filo 6.0 alle porzioni prossimale e distale dell'aorta e aggiungere un punto di sutura in più per chiudere completamente l'autotomia aortica. L'aorta espansa si riempirà immediatamente di sangue dopo la rimozione della legatura prossimale.

Una volta terminata la procedura sull'aorta, reinserire l'intestino nell'addome. Se era stato ritratto, l'intestino rientrerà come un'unica grande unità e non sarà necessario preoccuparsi della sua geometria. Con tutti gli organi al loro posto, la ferita esterna può ora essere chiusa in due strati con sei punti di nylon aut e sutture in polipropilene.

Ora somministrare al topo un anestetico locale, ad esempio una goccia di boop allo 0,25% ICAN per centimetro di incisione. Inoltre, somministrare una dose dell'antinfiammatorio Carin a cinque milligrammi per chilogrammo mediante iniezione sottocutanea. L'intervento chirurgico è ora completato e il topo deve essere posizionato su una superficie calda dove potrà riprendere conoscenza.

Il recupero avviene di solito entro 15 minuti. Quando il topo riprende conoscenza, viene reintrodotto in una gabbia singola e monitorato periodicamente durante il recupero. Dopo l'intervento, l'aorta si dilata tipicamente fino a raggiungere circa il 140-160% del suo diametro originale.

Questa dilatazione iniziale è osservata con stabilizzazione fino al giorno sette. Una rapida dilatazione secondaria si verifica tra il giorno sette e il giorno 14. Al giorno 14, l'aneurisma può essere osservato nell'aorta infrarenale.

Vi ho appena mostrato come indurre un'aneurisma aortica addominale con elastasi nei topi. Quando si esegue questa procedura, è importante evitare la formazione di coaguli di sangue all'interno dell'aorta. Questo è tutto.

Grazie per aver guardato e buona fortuna con il vostro esperimento.