Legatura del cieco procedura di puntura

Ciao, mi chiamo Miguel Toscano del laboratorio della dottoressa Dena presso il dipartimento di Microbiologia ed Ematologia della Temple University. Oggi vi mostreremo come allestire il modello di infezione e puntura iCal nel ceppo murino C 57 Black Seas. Utilizziamo questo modello nel nostro laboratorio per simulare la sepsi umana.

Fondamentalmente, questo modello prevede una perforazione del ceco che consente il rilascio di materiale fecale nella cavità peritoneale, provocando una sepsi polimicrobica e generando così una risposta immunitaria esacerbata. In questo modello, molti organi e diversi tipi cellulari vengono danneggiati in modo irreversibile, con conseguente decesso dell'animale.

Iniziamo. Anestetizzare il topo. Il primo passo consiste nell'anestetizzare l'animale mediante iniezione intraperitoneale.

Una miscela, uno a uno, di Ketomine e xilazina. Per evitare di essere morsi dal topo e per evitare di fargli male, dobbiamo afferrare il topo dalla coda con una mano. Con l'altra mano, premiamo la schiena contro il pavimento.

Quindi possiamo afferrare il topo dalla parte posteriore della testa e girare l'animale sulla schiena per esporne l'addome. Con una siringa per insulina da 29 gauge, iniettiamo da 20 a 30 microlitri di anestetico nella cavità peritoneale. Per preparare il topo all'intervento, afferrare la parte posteriore del topo e rasare l'addome premendo sulla coda e/o sulla zampa del topo.

Verifichiamo che il topo non sia sensibile al dolore, quindi si disinfetta l'addome. Innanzitutto strofinando con soluzione di Betadine, seguito dall'asciugatura con una salvietta di alcol isopropilico per almeno un minuto. Per esercitarsi nella laparotomia, solleviamo la pelle al centro dell'addome con la pinza e pratichiamo una piccola incisione di circa un centimetro di lunghezza.

Quindi sollevare il perineo ed eseguire un'altra piccola incisione per esporre la cavità peritoneale. Utilizzando pinze curve, trattenere la membrana peritoneale. Identificare ed esporre il ceco facendolo passare attraverso la membrana peritoneale.

Posizionarlo sull'addome. Ora è il momento della legatura. Questo è un fattore importante.

Per determinare la gravità del modello, è possibile modulare la severità della procedura. Estendendo la legatura, i topi svilupperanno una setticemia più lieve. Se la legatura viene eseguita più vicino all'estremità del cieco, si avrà una setticemia di grado medio se effettuata nella parte centrale, e una setticemia grave se eseguita più vicino alla valvola ileocecale; la gravità della procedura sarà rispecchiata dalla percentuale di mortalità.

Non legare mai la valvola ileocecale. Effettuare ora la legatura utilizzando un filo di seta con un nodo doppio per renderla ben stretta; tenere fermo il cieco ed effettuare con attenzione una perforazione vicino al sito di legatura, quindi praticare un'altra perforazione più vicina all'estremità del cieco. La membrana del cieco è morbida e verrà perforata molto facilmente.

Utilizzando aghi di diversi spessori ed effettuando una o due perforazioni, possiamo anche modulare la gravità del modello. Il metodo con perforazione singola o doppia qui mostrato rappresenta una tecnica alternativa rispetto alla classica perforazione attraverso e attraverso. Il vantaggio dell'utilizzo del metodo con perforazione singola o doppia è che consente un migliore controllo della quantità di feci espulse quando il cieco viene compresso.

Tenere il ceco con entrambe le dita ed estrarre delicatamente una quantità minima di feci espellendo il ceco. Chiudere la laparotomia, quindi sollevare il peritoneo e riposizionare con attenzione il ceco nella cavità peritoneale.

Siate estremamente cauti per evitare punture accidentali del cieco con la pinza; si raccomanda l'uso di pinze più grandi. È ora di chiudere la cavità peritoneale. Utilizzando un sutura in seta, è molto importante assicurarsi che venga chiusa in modo molto accurato.

Si parte da un lato della ferita dove si esegue un nodo. Si continua con la sutura fino all'altro lato, passando la seta sotto il cappio del punto precedente. Per chiudere la cute, si possono utilizzare clip per ferite di Mitchell o clip reflex, usando lo strumento appropriato per chiudere le clip.

Posizionare tante clip quante sono necessarie per assicurarsi che la ferita sia chiusa. Rianimare i topi iniettando sottocute un millilitro di soluzione salina pre-riscaldata. Utilizzando un ago da 25 gauge, questa misura di rianimazione fluidica indurrà la fase iperdinamica della sepsi, completando la procedura.

Posizionare il topo sotto una lampada a infrarossi oppure su un tappetino riscaldante fino al risveglio dall’anestesia. Fornire cibo e acqua sul fondo della gabbia e controllare gli animali ogni otto-dodici ore per osservare segni di malattia. Iniettare buprenorfina per via sottocutanea per l’analgesia postoperatoria.

Un diverso analgesico da utilizzare è il tramadolo. I segni di sepsi, i sintomi di sepsi sono febbre, letargia, pelo irto, erezione, diarrea, raggruppamento e malessere. Gli animali molto malati mostrano una grave diminuzione della temperatura corporea e si muovono a malapena per evitare sofferenze.

Devono essere sottoposti a eutanasia in questa fase H. Quindi, questo è il modo in cui eseguiamo il modello di legatura a cispa e di puntura. Speriamo che abbiate apprezzato la dimostrazione di questa procedura e che l’abbiate trovata molto utile per la vostra ricerca prima di iniziare lo studio sugli animali. Raccomandiamo vivamente di utilizzare cervelli vecchi o non utilizzati per l’addestramento, al fine di stabilire il grado di gravità appropriato per i vostri esperimenti modificando la lunghezza della legatura, lo spessore dell’ago e il numero di punture.

Detto questo, arrivederci.