La coda di test Sospensione

Il test di sospensione della coda è un comune test comportamentale utilizzato per prevedere l'efficacia antidepressiva di diverse manipolazioni sperimentali. Questo filmato illustra le procedure di questo test. Il test di sospensione della coda è stato convalidato per il topo ed è sconsigliato per roditori di dimensioni maggiori.

Nel test di sospensione per la coda, i topi vengono sospesi per la coda. Il topo rimane sospeso per sei minuti. I comportamenti del soggetto vengono registrati durante questo periodo.

Al termine del periodo di prova di sei minuti, il nastro viene rimosso dalla coda del soggetto. Dopo il completamento del test, le registrazioni video vengono trasferite su un computer o un monitor video. Per l'analisi, un osservatore misura il tempo che un topo trascorre a dibattersi durante l'intera sessione di sei minuti.

I composti con proprietà antidepressive aumentano il tempo trascorso nell'attività di lotta. Ciò si riflette in periodi più brevi di immobilità. Ad esempio, abbiamo riportato che il litio, un farmaco stabilizzatore dell'umore, clinicamente utile come terapia aggiuntiva antidepressiva, riduce il tempo di immobilità nel test di sospensione per la coda.

Ciao, mi chiamo Sean del laboratorio del Dottor Todd Gould del Dipartimento di Psichiatria della Scuola di Medicina dell'Università del Maryland a Baltimora. Ciao, sono Chantel dello stesso laboratorio. In questo video, vi mostreremo come eseguire e valutare il test di sospensione della coda.

Il test di sospensione della coda viene utilizzato per valutare l'efficacia potenziale dei trattamenti antidepressivi. Andiamo dunque in laboratorio e vi mostriamo come eseguire l'esperimento. Sebbene non obbligatorio, utilizziamo una scatola appositamente progettata per la sospensione della coda.

Per questo test, la nostra scatola per il sospeso della coda è divisa in quattro compartimenti, ciascuno riservato a un singolo topo. Le partizioni impediscono ai topi di osservarsi a vicenda durante il test.

Tuttavia, è possibile utilizzare una mensola o un'altra struttura per sospendere i topi. Le dimensioni della scatola del test di sospensione della coda vengono scelte in modo da impedire ai topi di raggiungere e aggrapparsi ai bordi. Prima di iniziare l'esperimento, tagliare abbastanza frammenti di nastro e contrassegnare il segmento che verrà utilizzato per l'adesione alla coda.

Nel nostro laboratorio, utilizzeremo frammenti di nastro lunghi 17 centimetri. A due centimetri dall'estremità di questo frammento di nastro deve essere effettuato un segno, che verrà utilizzato per aderire alla coda. Posizioniamo la coda al centro di questa porzione di due centimetri.

Posizionare la scatola per il test di sospensione della coda e la videocamera. Prima di introdurre gli animali, la scatola deve essere accuratamente pulita con una soluzione sterilizzante per neutralizzare gli odori lasciati dai soggetti precedenti. Nel nostro laboratorio utilizziamo due scatole diverse per il test di sospensione della coda, identiche in ogni aspetto tranne che per il colore.

Per i topi albini, una scatola grigio scuro offre un buon contrasto per le registrazioni video. Per ceppi di topi dal colore più scuro, è appropriata una scatola bianca. Accendere la macchina del rumore bianco.

Dovrebbe mascherare eventuali rumori intermittenti. Portare i topi nella stanza dell'intervento per l'acclimatazione. Le condizioni della stanza devono essere mantenute costanti e prive di rumori, variazioni dell'intensità luminosa e altri possibili disturbi.

Questo periodo è generalmente di almeno un'ora. Una volta terminato il periodo di ambientamento, è possibile iniziare il test, al fine di impedire a certe linee di topi di arrampicarsi sulle proprie code. Durante il test di sospensione della coda, utilizziamo cilindri di plastica che posizioniamo sulle code.

Questi cilindri poggiano alla base della coda durante il test. Nel nostro laboratorio utilizziamo cilindri di plastica lunghi quattro centimetri, con un diametro di un centimetro e un peso di 1,5 grammi. Se si utilizzano cilindri di plastica per impedire l'arrampicata, questi devono essere posizionati sulle code prima di applicare il nastro.

Applichiamo il nastro all'estremità della coda, lasciando fuori dal nastro due o tre millimetri della coda. Fissiamo il nastro alle code dei topi nella loro gabbia di mantenimento. Utilizziamo l'estremità del nastro precedentemente segnata e ci assicuriamo che il nastro aderisca alla coda e si ripieghi su se stesso.

Dopo aver applicato il nastro, fissare ogni topo alle pareti della gabbia per evitare che i nastri collegati a diversi animali si aggroviglino. Completare questa procedura rapidamente; in caso contrario, i topi saranno sottoposti a uno stress inutile.

La registrazione deve essere avviata prima che gli animali vengano sospesi. Sospendere gli animali posizionando l'estremità libera del nastro sulla sbarra di sospensione in un ordine bilanciato tra i gruppi di trattamento e in modo da non ostruire la visuale della telecamera. Poiché i topi vengono sospesi uno alla volta, ciascun animale ha un tempo di inizio leggermente diverso per il test.

Assicurarsi di iniziare a valutare ogni topo esattamente all'inizio del periodo di sospensione. È importante non ostruire la visuale della telecamera. Poiché l'intera sessione di sospensione della coda verrà valutata con ostacoli, l'ostruzione della visuale della telecamera potrebbe portare alla perdita di dati.

Assicurarsi che tutti i capi del nastro siano perpendicolari alla sbarra di sospensione e presentino la stessa lunghezza di cedimento. Per ogni soggetto, avviare il cronometro. Il test di sospensione per la coda dura sei minuti.

Trascorsi i sei minuti del periodo di prova, rimuovere il nastro dalla fine di ogni coda e riportare i topi nella loro gabbia di provenienza. Al termine del test, registrare su video le informazioni relative al soggetto. Dopo aver riportato i topi nella stanza della colonia, la scatola di prova deve essere accuratamente pulita e disinfettata con una soluzione sterilizzante.

Ora che abbiamo terminato la fase di test, discuteremo la valutazione dei comportamenti. L'unica variabile che viene solitamente valutata nel test di sospensione per la coda è il tempo in cui gli animali rimangono immobili. Per ottenere il tempo di immobilità, misureremo il tempo in cui i topi sono in movimento e lo sottrarremo dalla durata totale del test, pari a sei minuti. Valuteremo l'intero arco di sei minuti del test.

Copriamo innanzitutto i topi che non vengono valutati, in modo che l'osservatore possa concentrarsi su un solo animale per ciascun intervallo di tempo. L'attività motoria viene misurata mediante un cronometro a schermo controllato da un dispositivo a gamepad. Qui, come si può vedere, ci sono due cronometri a schermo separati che vengono controllati contemporaneamente.

L'orologio cronometro inizia il conto alla rovescia da 360 secondi e indica la durata del test all'osservatore. Il secondo orologio cronometro misura il tempo durante il quale i soggetti rimangono in movimento. Come si può notare, il secondo orologio cronometro è coperto dal primo e solo le sue cifre decimali in millisecondi sono visibili all'osservatore.

In questo modo, l'osservatore potrà verificare se il cronometro è in funzione, ma non potrà vedere il tempo totale di mobilità fino al termine del punteggio. Questo accorgimento serve a prevenire che il bias dell'osservatore influenzi i risultati. I topi, specialmente all'inizio della sessione, manifestano comportamenti legati alla fuga.

Questi comportamenti includono tentativi di raggiungere le pareti dell'apparato e la sbarra di sospensione, forti scosse del corpo e movimenti degli arti simili alla corsa. Questi movimenti costituiscono chiaramente una forma di mobilità. Tuttavia, con il procedere del test, i movimenti diventano più sottili.

Nel nostro laboratorio, non consideriamo come mobilità i piccoli movimenti limitati alle zampe anteriori, che non comportano alcun movimento delle zampe posteriori. Inoltre, le oscillazioni simili a un pendolo, dovute al guadagno di momento durante i precedenti episodi di mobilità, non sono considerate mobilità. Vediamo ora la valutazione di una sessione reale del test di sospensione per la coda.

Viene generalmente riportato il tempo di immobilità, non il tempo di mobilità. Il tempo di immobilità può essere calcolato sottraendo il tempo totale di mobilità dal tempo del test di 360 secondi. Valutazione. Il test della sospensione della coda richiede formazione ed esercitazione.

È importante stabilire uno standard interno di laboratorio e formare nuovi osservatori fino a quando non raggiungono un elevato livello di affidabilità. In questo articolo, spieghiamo come eseguire e valutare il test di sospensione della coda. Buona fortuna con i vostri futuri esperimenti.