Mouse a breve e lungo termine di attività locomotoria analizzati da Tracking Software Video

L'obiettivo generale del seguente esperimento è quello di rilevare differenze nell'attività locomotoria a breve e/o lungo termine tra diversi gruppi di topi trattati sperimentalmente. Ciò si ottiene registrando video l'attività della gabbia domestica del topo in tempo reale. In una seconda fase, l'attività locomotoria dell'animale viene analizzata in tempo reale o da una registrazione utilizzando un software di tracciamento video.

Successivamente, i parametri locomotori segnati vengono importati in un software secondario per l'analisi statistica. La procedura può quindi chiarire gli effetti dei trattamenti o delle condizioni sull'attività locomotoria a breve e lungo termine sulla base di parametri valutati come la distanza percorsa, la velocità di movimento e la durata del movimento. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come l'attraversamento della linea e l'impianto dell'emettitore, è che fornisce un esame più approfondito dell'attività locomotoria del topo senza la necessità di una procedura chirurgica invasiva e potenzialmente confondente.

In generale, le persone che non conoscono questo metodo avranno difficoltà perché impostare gabbie e attrezzature in modo da consentire una qualità dell'immagine ottimale per il successivo tracciamento video può essere noioso e richiedere tempo per l'apprendimento. L'attività locomotoria a breve termine viene testata nelle gabbie domestiche di topi isolati con lettiera che ha un alto contrasto con il colore del codice dell'animale. Prima dell'esperimento, gli animali devono essere acclimatati alla loro lettiera per almeno 24 ore.

Per preparare la sala prove, inizia montando una videocamera con capacità di visione notturna con almeno 120 gigabyte di memoria sopra l'area di registrazione. La stanza non deve avere alcun suono ambientale superiore a 70 decibel. Se il rumore di fondo intermittente è inevitabile, utilizzare un generatore di rumore bianco per attutire tali rumori.

È anche importante che le condizioni ambientali della sala prove siano simili alle normali condizioni di stabulazione dell'animale. Prima di impostare nuovi soggetti, pulire l'area di registrazione, quindi coprire la superficie con carta da macellaio o da banco da laboratorio di colore simile alla lettiera della gabbia Posizione successiva, divisori per gabbie opache in plastica da mezzo pollice. Sulla superficie di prova, i divisori devono avere un colore simile alla lettiera ed essere puliti.

Ora porta i topi nell'area di test e posiziona le loro gabbie tra i divisori. Per facilitare l'analisi, posizionare sempre le gabbie allo stesso modo. Per il test, coprire le gabbie con plexiglass trasparente spesso un quarto di pollice.

Il plexiglass necessita di fori di almeno 11 quarti di pollice per fornire un'adeguata ventilazione. Quindi, installa le luci del morsetto della covata con lampadine rosse per illuminare le gabbie. Ora centra la visuale della telecamera sulle gabbie di prova non superare la capacità del sistema di tracciamento video.

Questo sistema è limitato al tracciamento di otto mouse in tempo reale. Ora, visualizzando il display della videocamera, regola l'angolazione e la posizione delle luci per rimuovere l'abbagliamento o i riflessi dalle parti superiori della gabbia in plexiglass. Ottenere una visione pulita dei topi priva di artefatti visivi è il passo più critico per ottenere buoni risultati.

Includi sempre sia i soggetti sperimentali che quelli di controllo in ciascun gruppo per garantire che i potenziali effetti delle differenze temporali nella LMA siano ridotti al minimo. Poco prima del test, rimuovere eventuali materiali di nidificazione e arricchimento dalle gabbie in quanto potrebbero ostruire la visuale del topo. Nel video, avviare la registrazione con una lavagna che identifichi le informazioni sperimentali rilevanti.

Per garantire la corretta identificazione del video, utilizzare il timer sul display della fotocamera per monitorare la durata del test e rimanere fuori dalla linea di vista dell'animale. Durante il tempo di registrazione. Al termine del test, rimetti tutti i materiali in ogni gabbia.

Se gli animali devono essere nuovamente sottoposti a test, restituisci loro l'accesso al cibo e all'acqua tra un test e l'altro. Memorizza le registrazioni video della sessione di test su un supporto di archiviazione compatibile con il sistema di tracciamento video, come un'unità disco rigido Nel sistema di tracciamento video, analizza i video in tempo reale. Inizialmente scegli l'intero pavimento della gabbia come regione di interesse o ROI per il monitoraggio.

Per analisi avanzate come la valutazione delle tasse Figma, creare più ROI all'interno della gabbia per studi ad alto rendimento. Analizza tutte le gabbie all'interno del video contemporaneamente con i ROI individuali di tutte le gabbie. Impostare il VTS per calcolare la distanza totale, spostare la velocità dei movimenti e la durata dei movimenti dopo che i calcoli sono stati effettuati, esportare i dati in un file di foglio di calcolo per l'archiviazione e l'analisi aggiuntiva.

I test a lungo termine vengono eseguiti proprio come i test a breve termine. Tuttavia, richiede una gabbia modificata con un nuovo punto di accesso per cibo e acqua. Per prima cosa, praticare un foro di 5,5 centimetri di diametro nella parete terminale corta di una gabbia standard.

Quindi, tagliare le aperture da mezzo pollice in una rete di acciaio zincato da un quarto di pollice e lucidare la rete per rimuovere gli spigoli vivi usando la stessa rete, costruire una tramoggia esterna per pellet alimentari che può essere collegata alla rete sopra l'apertura. Quindi, aggiungi i fori per i rivetti. Quindi coprire il foro nella gabbia con la rete e la tramoggia attaccata utilizzando rivetti in alluminio e rondelle in acciaio inossidabile.

Per fornire idratazione, costruisci una bottiglia d'acqua con un conico standard da 50 millilitri e un tappo di gomma a un foro che è troppo forato. Per consentire l'inserimento di un tubo antigoccia. Fissa questa bottiglia d'acqua alla gabbia.

Utilizzando il nastro in velcro, il tubo del sorso deve essere inserito attraverso l'apertura coperta in rete. Ora, mentre la gabbia è coperta dal coperchio in plexiglass, i topi mantengono l'accesso al cibo e all'acqua seguendo le stesse procedure descritte per il test locomotore a breve termine. Il test a lungo termine di solito dura 12 ore o per la durata della fase corrente del ciclo luce-buio.

I test dell'attività locomotoria a lungo termine vengono generalmente analizzati in tempo reale senza effettuare una registrazione video. Tuttavia, una registrazione può essere effettuata utilizzando una telecamera secondaria o tramite un registratore DVD collegato alla telecamera principale. I topi possono essere testati purché le capacità del sistema di tracciamento video siano in grado di gestire e, come per i test a breve termine, solo il materiale di arricchimento illuminato dal nido viene rimosso dalla gabbia, non la pannocchia di mais o la lettiera di segatura.

Nel VTS, configurare il sistema di tracciamento video per l'analisi in tempo reale. Imposta il ROI del monitoraggio in modo che includa l'intero pavimento per ogni gabbia registrata. Come per il test a breve termine, impostare il sistema per calcolare la distanza totale, spostare la velocità di movimento e la durata del movimento.

Quindi, dopo l'analisi, esportare i dati in un foglio di calcolo per l'archiviazione e l'analisi utilizzando saggi locomotori ripetuti a breve termine. È stato riscontrato che dopo l'iniezione di lipopolisaccaridi i topi alloggiati in una gabbia ventilata individualmente o IVC si sono ripresi dalla perdita di LMA a breve termine dall'iniezione più rapidamente rispetto ai topi alloggiati in gabbia in ambiente ambientale o in un EC. Mentre la perdita iniziale di attività locomotoria è simile tra i gruppi iniettati con LPS, il recupero dell'attività locomotoria basale è più rapido. Nell'IVC alloggiavano i topi, così come la velocità dei movimenti e la durata dei movimenti.

In questa analisi, il rilevamento di un movimento di due centimetri al secondo ha avviato il tracciamento e il rilevamento di 1,75 centimetri al secondo ha interrotto il tracciamento utilizzando le variabili di rilevamento. È stato effettuato un piccolo test di locomozione su due cicli di attività consecutivi di 12 ore. Nei topi normali, non si riscontrano differenze significative nella distanza percorsa o nella velocità dei movimenti o nella durata dei movimenti.

Se la tendenza non dovesse essere rilevabile e ripetuta con un campione di grandi dimensioni, i dati suggerirebbero che il test potrebbe essere utilizzato per sostituire i trasmettitori impiantati utilizzati per i test locomotori a lungo termine. Quando si tenta questa procedura, è importante prestare particolare attenzione alle condizioni abitative pre-ex sperimentali. Tutti gli animali da esperimento e di controllo devono trovarsi in condizioni ambientali simili, soprattutto per quanto riguarda il ciclo di luce, la temperatura ambiente e l'umidità relativa.

Inoltre, la loro esposizione a stimoli di rumore e odore dovrebbe essere ridotta al minimo Seguendo questa procedura. Altri metodi, come il test a quattro nuotate, possono essere utilizzati per rispondere a domande aggiuntive, come ad esempio se il trattamento di un particolare esperimento provoca un comportamento depressivo senza influenzare l'attività locomotoria complessiva.