A base di acido Polymalic Nano biopolimeri per il targeting di più marcatori tumorali: un'opportunità per la medicina personalizzata?

L'obiettivo generale è quello di stabilire una piattaforma su scala nanometrica aperta per un protocollo universale per sintetizzare la medicina personalizzata sulla base del corredo genetico della malattia di una persona, in particolare per il cancro. In primo luogo, produrre e purificare l'acido polimalico dal microrganismo frum polycephalum attivare chimicamente il PMLA purificato al suo pendente. I gruppi carbossilici legano i piccoli gruppi funzionali e il linker MEA mediante sostituzione dei gruppi attivati e convertono i gruppi attivati inutilizzati in gruppi carbossilici mediante idrolisi.

Quindi, aggiungere gli anticorpi e le molecole antisenso tramite i gruppi idro sulfo del distanziatore, MEA e cap. Il distanziatore inutilizzato per reazione con PDP al termine verifica la composizione e la funzione del piombo. Il nano farmaco deriva da un modello animale come i topi che trasportano un essere umano aggressivo.

I due tumori al seno positivi possono determinare l'efficacia del trattamento e anche se il trattamento è privo di effetti collaterali indesiderati. Il vantaggio principale della bioproduzione rispetto ai metodi sintetici esistenti come la polimerizzazione è che il biopolimero mantiene la piena purezza ottica e non è contaminato da sottoprodotti. Questa famiglia di nanofarmaci PolyPhen può colpire qualsiasi tipo di cellula in base a un targeting specifico e regolare l'espressione proteica.

In generale, il trattamento del cancro con nanofarmaci PHE è molto efficace in diversi modelli animali, infilzando i tumori primari del cervello e della mammella. Abbiamo avuto per la prima volta l'idea di questo metodo per bloccare la sintesi della laming specifica del glioblastoma nelle forme isof e successivamente abbiamo dimostrato il targeting e l'inibizione delle proteine HER due e triplo negative del cancro al seno per prevenire la crescita del tumore. Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla diagnosi del cancro utilizzando la risonanza ottica e magnetica.

I poli-nanofarmaci possono fornire informazioni sulla somministrazione di farmaci per il trattamento del cancro. Può anche essere applicato ad altre condizioni patologiche come malattie infettive, sollievo dal dolore e disturbi neurologici. Dopo aver coltivato una coltura di plasmodio da seme da spial su coclea, inoculare 100 millilitri di terreno di coltura basale e far crescere la coltura a 25 gradi Celsius.

L'incubatrice thermos ha dichiarato di produrre una quantità di microplasma impacchettato per gravità modia con l'esclusione della luce. Al fine di evitare la sporulazione in un recipiente del bioreattore da 10 litri, sciogliere 80 grammi di carbonato di calcio in otto litri di terreno basale, quindi trasferire il pact microplasm modia nel recipiente di reazione montato e impostare il bioprocesso per 75 ore. A 25 gradi Celsius con un flusso di aria filtrata di 10 litri al minuto e 150 giri/min agitando con un segmento.

Quando il brodo di coltura ha un pH di 4,8, interrompere la coltura per misurare la produzione di acido polimaleico. Ora raffreddare il brodo a 17 gradi Celsius e lasciare che le cellule si depositino per gravità e rimuovere il surnatante di coltura dal reattore. Regolare il pH a 7,5.

Ora pompare il surnatante dal basso attraverso una colonna di cellulosa DEAE da 1,5 litri bilanciata con 20 millimolari di tris cloridrato pH 7,5 a cinque gradi Celsius. Quindi passare tre colonne di tampone di lavaggio contenenti 0,3 molari di cloruro di sodio dal basso verso l'alto della colonna, eluire il PMLA in presenza di 0,7 molari di cloruro di sodio. Regolare la frazione elusa PMLA a 0,1 molari di cloruro di calcio e aggiungere l'80% di etanolo ghiacciato per far precipitare il calcio PMLA frazionato di dimensioni successive, il calcio PMLA utilizzando cidex G 25 e acqua.

Infine, passare ogni frazione su una colonna di luce ambrata e congelare immediatamente il flusso attraverso l'acido polimalico in azoto liquido e liofilizzare prima di conservare a meno 20 gradi Celsius. Per attivare i gruppi carbossilici del PMLA, mescolare un millimetro di unità di mala di P-M-L-A-H in un millilitro di acetone anidro e un milli mole, ciascuno di un aide idrossiCIN e cilo eil carbo ide in due millilitri di dimetilformammide dopo aver agitato a 20 gradi Celsius per tre ore, aggiungere 0,05. I millimoli di metilPega hanno una media di un millilitro di DMF seguiti da 0,05 millimoli di trietilammina.

Quindi, in modo graduale, aggiungere 0,4 millimoli di estere etilico di leucina e dopo un'ora controllare il completamento della reazione mediante risposta hyn negativa alla cromatografia su strato sottile. Allo stesso modo aggiungi 0,1 millimoli di due me capto, un'etilammina e 0,5 millimoli di TEA. Rimuovere l'estere NHS residuo mediante idrolisi spontanea con soluzione salina tamponata con fosfato.

Dissalare su una colonna PD 10 e liofilizzare per ottenere una polvere bianca, conservare questo pre coniugato secco a meno 20 gradi Celsius. Successivamente, aggiungere 30 milligrammi di anticorpo in 4,5 millilitri di cloruro di sodio da 150 millimolari in 100 millimolari di fosfato di sodio a pH 5,5. Ridurre i legami diss solfuro con cinque tris millimolari, due carbossi etilfosfina cloridrato e purificare su una colonna PD 10.

Ora sciogliere l'IDE PEG IDE in due millilitri del tampone di cui sopra, anche se a pH 6,3. Aggiungere l'anticorpo ridotto e mescolare a 20 gradi Celsius per un'ora. Concentrare a 2,5 millilitri su AVEVA spin 20 con esclusione di 30 kilodalton e poi purificare su cidex G 75.

Ora verifica il prodotto su SEC HPLC. Misurare la quantità a 280 nanometri e confermare anche l'assenza di impurità ad altre lunghezze d'onda. Successivamente, mescolare 50 milligrammi di pre coniugato con 200 MLE di PEG IDE coniugato anticorpale in cinque millilitri di tampone pH 6,3.

Regolare la concentrazione di zolfo idro a due millimolari e incubare a 20 gradi Celsius per tre ore. Per ottenere una solubilizzazione del 98%, i tre principali oligonucleotidi ammino-senso reagiscono con un volume di SPDP, purificano l'A-O-N-P-D-P su cidex LH 20 in metanolo, quindi evaporano il metanolo, dissolvono il prodotto in acqua e liofilizzano ora incubano 800 animali nan dell'aos attivato con l'anticorpo PEG pre coniugato a MEA SH durante la notte. Quando la reazione di scambio di diss solfuro è terminata, incorporare il blocco di colorante fluorescente, l'eccesso di zolfo idro con PDP e purificare su cidex G 75.

Conservare il nano farmaco finale a base di acido polimalico a meno 20 gradi Celsius per stimare il contenuto di acido poli maleico durante la produzione, procedere come segue, a 320 microlitri di campione aggiungere 160 microlitri di cloruro di idrossilammonio al 10% e 160 microlitri di idrossido di sodio al 10%. Dopo 10-15 minuti, mescolare con 160 microlitri di soluzione di cloruro ferrico al 5% e visualizzare la formazione di un colore viola scuro a 540 nanometri. Successivamente, idrolizzare il nanofarmaco durante la notte in acido cloridrico a due molari a 110 gradi Celsius utilizzando un saggio in ampolla sigillata per l'acido maleico mediante cromatografia a fase inversa.

Utilizzando campioni addizionati con standard di acido maleico. Ora scindere il nanofarmaco con 100 millimolari dihi tre etoli e misurare gli oligonucleotidi morfo antisenso mediante HPLC quantitativa in fase inversa rispetto agli standard morfo a ON. Utilizzando il nanofarmaco scisso, misurare il contenuto di anticorpi utilizzando un kit di dosaggio delle proteine per quantificare il contenuto di PEG Malik.

Per prima cosa, reagire con il tiocianato OT di ammonio, quindi estrarre con cloroformio e misurare l'assorbanza a 510 nanometri. Testare l'attività anticorpale e la coligazione di Eliza utilizzando cinque microlitri di nanofarmaco per pozzetto e 0,5 microgrammi per pozzetto dei suoi due come antigene rivestito su piastra. Infine, calcolare la percentuale raggiunta per l'oligonucleotide antisenso, EG. E anticorpi per quanto riguarda l'acido maleico.

Confrontare con la percentuale prevista dalla progettazione del farmaco. Questo approccio strategico bimodale al nanofarmaco impiega Herceptin per inibire la via di segnalazione HER two e HER two specific a ON per bloccare la trascrizione degli anticorpi del recettore HER two facilitano la transcitosi tramite TFR endoteliale del vaso tumorale. L'acido polimaleico della piattaforma nano coniugato è stato prodotto da micro plasmo coltivato e purificato attivando i gruppi carbossilici PMLA ha facilitato la sintesi dello scaffold preconiugato.

E infine, il nano coniugato di piombo. I saggi Eli SA hanno dimostrato la ritenzione di anticorpi monoclonali attivi durante la sintesi di nanofarmaci. Con entrambi gli anticorpi assemblati sulla stessa piattaforma polimerica, la microscopia confocale a fluorescenza ha monitorato l'assorbimento cellulare del nanofarmaco.

Le immagini sovrapposte a zero e tre ore sono state analizzate insieme agli endosomi marcati. I coefficienti di correlazione di Pearson per la colocalizzazione indicano il rilascio di nano farmaci dagli endosomi nel citoplasma e la dissociazione di un ON dal nanofarmaco da parte di una scissione del diss solfuro dipendente dal glutatione nel citoplasma. In vitro, il nanofarmaco principale ha inibito significativamente la crescita in modo più efficace nella linea cellulare sovraesprimente HER two.

Esperimenti in vivo su topi portatori di BT 4 74, HER due sovraesprimono il carcinoma mammario umano hanno mostrato un'inibizione della crescita superiore al 95% da parte del nanofarmaco principale contenente Herceptin. E HER due specifici A ON ex vivo Western blotting hanno indicato l'inibizione di entrambe le due sintesi di HER e la fosforilazione di una scissione KT di PARP marcata apoptosi. La regressione del tumore in risposta al trattamento farmacologico è dimostrata dal restringimento del tumore e dalla deplezione delle cellule tumorali mediante esame istologico.

Ora dovresti avere una buona comprensione di come utilizzare una nano piattaforma biocompatibile per ottenere un trattamento personalizzato efficace senza effetti collaterali e ottenere un nano farmaco con una composizione di controllo e attività funzionali verificate Una volta padroneggiati, questi sensori possono essere eseguiti con un'elevata riproducibilità dopo il suo sviluppo. Questa tecnica che utilizza la nanopiattaforma poliacida per la somministrazione mirata di oligonucleotidi antisenso apre la strada ai ricercatori nel campo della medicina ano-sensoristica personalizzata per esplorare il trattamento dei tumori mirando a specifici mercati tumorali molecolari identificati dall'analisi genetica personalizzata. Dal punto di vista farmacologico, gli agenti attivi e le cellule possono essere estremamente pericolosi.

Precauzioni come indossare maschera e guanti devono essere sempre prese durante l'esecuzione di questa procedura.