Un metodo modificato per eterotopica mouse Cuore Trapianto

L'obiettivo generale di questa procedura è trapiantare un cuore da un donatore a un topo ricevente. Ciò si ottiene rimuovendo prima il cuore dal torace del donatore e conservandolo in soluzione salina fredda. I passaggi successivi consistono nel trapiantare il cuore nell'addome del ricevente e quindi monitorare il battito cardiaco trapiantato.

Infine, il rigetto del trapianto è confermato dall'ispezione visiva e dall'analisi patologica. In definitiva, i risultati mostrano che i cuori trapiantati tra ceppi di topi non imparentati vengono respinti mentre i cuori trapiantati tra lo stesso ceppo vengono accettati. La dimostrazione video a lungo termine di questa misura è fondamentale nella fase microchirurgica e difficile da imparare a causa delle dimensioni molto ridotte degli animali donatori e riceventi.

La complicata procedura chirurgica coinvolta e la necessità di aumentare la precisione e la velocità nell'esecuzione delle operazioni del ricevente Assicurarsi sempre che tutti gli strumenti siano accuratamente puliti e sterilizzati in un bagno di etanolo all'80%. L'uso di attrezzature sterili monouso è altamente consigliabile. Dopo aver anestetizzato il topo donatore in una posizione di camera al fluoro, è supino sulla scheda operatoria.

Quindi collegare rapidamente il cono del naso, erogando l'anestetico. Assicurati di testare la qualità dell'anestesia con un pizzico del piede posteriore. Se non c'è risposta al sussulto, iniziare con la rasatura della pelle utilizzando una lama chirurgica.

Quindi sterilizzare la pelle con tre salviette alternate di clorexidina al 2% in alcol isopropilico al 70% durante l'intervento chirurgico. Monitora visivamente la respirazione e il battito cardiaco dell'animale. Regolare di conseguenza l'erogazione di isoflurano.

Inizia eseguendo una toracotomia per esporre il cuore e i vasi aprono il torace attraverso entrambi i lati della gabbia toracica. Tagliare dal bordo della costola fino all'ascella e livellare trasversalmente con lo sterno zafico. Questo crea un lembo della parete toracica.

Fissare lo sportello aperto alla scheda operativa vicino alla testa. Quindi rimuovere il pericardio intorno al cuore. Sollevare il CVA della vena inferiore con una pinza e iniettare un millilitro di soluzione salina eparinizzata fredda all'IVC prossimale al cuore.

Quindi collegare un piccolo morsetto per arteria all'IVC per evitare che la soluzione rifluisca attraverso il foro dell'ago con una garza e un applicatore di cotone. Muovi il cuore verso il basso per esporre l'aorta e l'arteria polmonare. Il seno trasverso è il canale posteriore all'aorta e al fascio dell'arteria polmonare.

Successivamente, tagliare l'aorta e l'arteria polmonare il più distalmente possibile per massimizzare la lunghezza dei vasi per l'anastomosi. Ora dividi l'IVC, la SVC destra, la SVC sinistra e le vene polmonari. Ognuno dovrebbe essere legato a parte usando filo di seta 6.0.

Innanzitutto, lega l'IVC e l'SVC destro. Quindi legare la SVC sinistra e le vene polmonari. Ora togliete il cuore tagliando tutti i vasi distali ai lacci.

Conservare il cuore in soluzione salina fredda e sterile a quattro gradi Celsius fino al trapianto. Dopo aver preparato l'animale per l'intervento chirurgico come descritto per il donatore, iniziare eseguendo una laparotomia. Taglia la linea mediana dal pube allo sterno zafico.

Usando graffette piegate in divaricatori. Apri l'addome, avvolgi le viscere in una garza calda imbevuta di soluzione salina e ritraili in alto a destra dell'addome. Successivamente, esporre l'aorta infrarenale e l'IVC tra la biforcazione iliaca e l'arteria e la vena renale sinistra.

Liberare il segmento fasciato dell'aorta e dell'IVC. Quindi dividere l'aorta e l'IVC dai vasi lombari con un dispositivo di cauterizzazione calibrato. Applicare piccoli morsetti atraumatici alle estremità prossimale e distale del segmento IVC dell'aorta liberata.

Usando un ago calibro 30, praticare un foro nella parete anteriore dell'aorta dal foro tagliato verticalmente creando un foro delle dimensioni dell'aorta del donatore. Cogli l'occasione per rimuovere eventuali coaguli di sangue dal lume dell'aorta con un risciacquo di soluzione salina eparinizzato. Ora introduci il cuore del donatore in soluzione salina fredda.

Posizionare il cuore del donatore accanto all'incisione sull'aorta del ricevente. Posizionare l'arteria polmonare del donatore accanto all'IVC del ricevente utilizzando suture di nylon da 10 oh. Anastomosi delle aorte da un capo all'altro.

Inizia dall'angolo prossimale e sutura lungo il lato sinistro fino all'angolo distale. Quindi ruota l'animale di 180 gradi. Quindi spostare il cuore e continuare le suture attraverso il lato destro della parete aortica da distale a prossimale.

Prima di chiudere l'anastomosi, sciacquare delicatamente il lume con soluzione salina per gli occhi di eparina per rimuovere i coaguli e l'aria. Quindi termina la sutura. Successivamente, praticare un'incisione verticale nella parete anteriore dell'IVC dove verrà anastos l'arteria polmonare.

In secondo luogo, utilizzare 10 oh di suture in esecuzione per l'anastomosi. I vasi che iniziano all'estremità distale della parete sinistra all'interno del lume dell'IVC all'estremità prossimale. Continuare lungo la parete laterale anteriore destra e suturare fino all'estremità distale. Di nuovo.

Dare al lume un buon lavaggio prima di completare l'anastomosi. Successivamente, posiziona pezzi di schiuma gel attorno all'anastomosi. L'emostasi si ottiene con una leggera pressione da parte degli applicatori di cotone.

Per rivascolarizzare il destinatario. Rilasciare prima il morsetto distale, quindi il morsetto prossimale. Durante l'operazione del ricevente, è fondamentale ottimizzare l'accuratezza e la velocità dell'intervento chirurgico.

Quindi il tempo di bloccaggio a croce è idealmente inferiore a 30 minuti. Per favorire il recupero, applicare soluzione salina calda a 37 gradi Celsius sul sito dell'innesto. La fibrillazione dovrebbe essere immediata e tornare spontaneamente al ritmo sinusale entro pochi minuti.

Prima di chiudere il sito chirurgico, deve essere somministrata un'iniezione di buprenorfina per via intramuscolare. Termina l'operazione chiudendo la ferita con una sutura da corsa riassorbibile per tutti gli strati di tessuto. Dopo aver chiuso la ferita chirurgica, iniettare nell'animale ricevente ampicillina e un'iniezione sottocutanea di 0,6 millilitri di soluzione fisiologica.

Per favorire l'idratazione, posizionare l'animale su un termoforo impostato a 37 gradi Celsius A fino a quando non riprende conoscenza. La maggior parte degli animali beve e persino mangia entro tre ore dall'intervento. Se dopo otto ore, il topo mostra ancora segni di sofferenza, somministrare iniezioni di buprenorfina ogni 12 ore fino a quando i sintomi non si risolvono.

Se il topo rimane in difficoltà per più di 48 ore, contattare un veterinario per i primi 10 giorni postoperatori. Monitorare direttamente il battito cardiaco innestato mediante palpazione addominale. Su base giornaliera, registrare la forza del battito da quattro in più per un innesto sano a uno in più per un battito debole a causa di un rigetto avanzato.

Registrare un innesto non battente come negativo a causa del rigetto completo dell'innesto dopo 10 giorni. Continuare a monitorare il polso cardiaco trapiantato tre volte alla settimana dopo 227 trapianti di cuore eterotopici, il 90,3% ha avuto successo per 24 ore e l'86,8% ha avuto successo per 48 ore. L'insuccesso includeva la paralisi degli arti posteriori, un cuore non battente a causa di un trapianto, lesioni ischemiche e/o trombosi e sono stati catalogati i sopravvissuti al trapianto di morte.

La causa dei fallimenti del trapianto di cuore è stata stabilita dalla patologia. L'analisi del cuore trapiantato qui contrassegnato da una trombosi a freccia e infarto del tessuto cardiaco è stata la causa dell'insufficienza di questo cuore trapiantato nella combinazione di ceppo C 57 Black six donatore e ricevente, nessun cuore è stato rigettato e i cuori trapiantati sono sopravvissuti per più di 100 giorni. In questo caso, il cuore si era leggermente ridotto di dimensioni a causa dell'atrofia muscolare secondaria al suo stato di non sostentamento vitale.

Al contrario, nella combinazione di ceppo di rigetto di DBA 2 donatore a C 57 Black 6 ricevente, questo cuore trapiantato aveva smesso di battere entro il settimo giorno e mostrava evidenza di rigetto entro 100 giorni. Lo stesso cuore era completamente fibrotico e rimpicciolito Una volta commercializzato. Questa tecnica può essere eseguita in 90 milioni o meno se eseguita correttamente, e non dimenticare che lavorare con il gas per pavimenti degli Stati Uniti può essere estremamente pericoloso.

L'uso di uno spazzino di gas anestetico è altamente disponibile.