8 aprile 2015
Questo protocollo descrive la scheda di fori modificata, che è un set-up di test comportamentale che comprende le caratteristiche di un campo aperto e di una scheda di fori tradizionale. Questa configurazione consente l'analisi differenziale del comportamento incondizionato di piccoli mammiferi da laboratorio e l'analisi delle capacità cognitive.
L'obiettivo generale dei seguenti esperimenti è misurare il comportamento incondizionato di piccoli mammiferi da laboratorio e analizzare le loro capacità cognitive. Ciò si ottiene posizionando gli animali nella tavola della buca modificata per osservare e segnare il loro comportamento incondizionato con o senza la presenza dei loro compagni di gabbia. Inoltre, un oggetto nuovo e familiare o un pellet di cibo può essere inserito nell'apparecchio prima del test, che può essere utilizzato per misurare il riconoscimento degli oggetti o l'inibizione dell'assunzione di cibo.
Una terza applicazione di questo metodo consiste nel posizionare l'animale nella versione cognitiva dell'intero tabellone modificato in cui la ricompensa è messa in coda con un identificatore colorato contrastante. Al fine di misurare le capacità cognitive del soggetto del test, i risultati mostrano uno spettro di comportamenti incondizionati. Poiché il metodo combina più dimensioni comportamentali in un unico paradigma, che contiene le caratteristiche di un tradizionale pannello di fori e di un test in campo aperto, il vantaggio principale di questa tecnica è che supera gli svantaggi di una batteria di test riducendo il numero di animali utilizzati, eludendo i possibili effetti dell'ordine di test e riducendo l'effetto tempo e i costi. Il test deve essere eseguito nella normale stanza di stabulazione durante la fase di buio, la fase più attiva dell'animale ai fini di questo test video viene eseguita in condizioni di luce intensa.
I test comportamentali devono essere eseguiti su animali che sono stati abituati al loro ambiente e alla manipolazione da parte dello sperimentatore. Posiziona la scheda contenente i cilindri al centro della scatola sperimentale. Quindi posiziona una luce scenica sopra la tavola per creare un contrasto nell'intensità della luce tra la tavola e la scatola e aumentare il carattere avverso della tavola.
Per iniziare, posiziona l'oggetto familiare nell'apparecchio a due centimetri di distanza da un nuovo oggetto nell'angolo di fronte al punto di partenza. Quindi rimuovere l'animale da testare dalla gabbia di casa e posizionarlo rivolto verso il muro in un angolo specifico dell'apparato. Lascia che l'animale esplori liberamente per circa cinque minuti.
Chiedi a un osservatore esperto di valutare i parametri comportamentali utilizzando un software di punteggio comportamentale. Utilizzare i parametri elencati in questa tabella e misurare anche il tempo che l'animale impiega per avvicinarsi all'oggetto nuovo e familiare o all'alimento nuovo e familiare. Pulire l'apparecchio con acqua di rubinetto e un tovagliolo di carta dopo ogni prova.
Al fine di evitare una distorsione basata su segnali olfattivi, posizionare i compagni di gruppo nel compartimento del gruppo per 10-30 minuti prima di testare l'animale sperimentale per consentire l'abitazione. Quindi posiziona l'animale sperimentale nel compartimento del test e lascialo esplorare liberamente l'intera tavola modificata per cinque minuti o per tutto il tempo richiesto dal tuo protocollo. Ancora una volta, chiedi a un osservatore esperto di valutare in tempo reale i parametri comportamentali utilizzando il software di punteggio comportamentale utilizzando i parametri elencati nella tabella uno come prima.
Prima di iniziare questo esperimento, familiarizza gli animali con una ricompensa molto appetibile. Qui viene utilizzato un pezzo di mandorla. Offri la ricompensa con una pinzetta nella gabbia di casa una volta al giorno per due giorni consecutivi prima dell'esperimento, inserisci un divisorio per ridurre le dimensioni della scatola a 50 per 50 centimetri.
Per i test, topi, posiziona una scheda più piccola al centro della scatola. Questo diagramma mostra l'impostazione della scheda fori modificata. Il prossimo profumo, tutti e 10 i cilindri con un sapore da cui gli animali sono attratti, come la vaniglia e l'esca, tutti i cilindri con la ricompensa posta sotto una griglia in modo che non possa essere rimossa.
Cilindri Q3 con un anello colorato che contrasta con il PVC e esca quei cilindri con una ricompensa rimovibile. Ancora una volta, posiziona l'animale nello stesso angolo dell'apparato e chiedi a un osservatore esperto di segnare dal vivo. I parametri comportamentali utilizzando un software di punteggio comportamentale.
Misurare i parametri elencati nella tabella due in aggiunta a quelli precedentemente mostrati nella tabella uno, ad eccezione dei parametri relativi al riconoscimento degli oggetti o all'inibizione dell'assunzione di cibo. Eseguire quattro prove di allenamento al giorno con un intervallo di prova costante fino a stabilire un tempo costante per la raccolta di tutti e tre i pezzi di mandorla. Pulire l'apparecchio con acqua di rubinetto e un tovagliolo di carta dopo ogni prova per evitare distorsioni basate su segnali olfattivi per testare l'apprendimento inverso.
Una volta che l'animale è completamente addestrato, metti in esca tre cilindri diversi o tanti cilindri diversi come richiesto dal tuo protocollo e testa l'animale sul numero richiesto di prove. Le prime quattro immagini mostrano i risultati del paradigma dei test cognitivi che misura il funzionamento cognitivo dei topi neri C 57 a sei J con ischemia cerebrale lieve etichettata HI 45, ischemia grave ipossia, etichettata HI 75 e topi di controllo fittizi. Questo grafico mostra la latenza media per completare le quattro prove di un giorno di test.
Questo grafico mostra il numero di visite a un buco chiuso in ogni giorno di test. Una misura degli errori di memoria a breve termine. Qui vengono mostrate le visite alle buche non battute.
Questa è una misura degli errori di memoria a lungo termine. Qui vengono mostrati i dati relativi al numero di errori di omissione. Un errore di omissione è definito come il numero di cilindri con esca non visitati.
Per confermare che il gruppo I 45 non aveva alcun deterioramento cognitivo, questo gruppo è stato testato contro i controlli fittizi. In un compito di inversione, i tre fori battuti sono stati assegnati a tre cilindri diversi e gli animali sono stati testati per quattro prove. L'effetto di inversione diventa evidente quando si confronta l'ultima prova della prima fase con la prima prova della fase di inversione.
Questa immagine mostra la latenza per completare lo studio per entrambi i gruppi ed è evidente un chiaro effetto complessivo del trattamento. Ciò significa che c'è una ridotta flessibilità cognitiva nel gruppo HI 45 che era rilevabile utilizzando l'intera scheda modificata con il compito di inversione. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come utilizzare l'intera scheda modificata sia nella versione generale che in quella cognitiva.
Questo protocollo descrive la tavola forata modificata, un test comportamentale che combina caratteristiche di un campo aperto e di una tavola forata tradizionale. Permette l'analisi differenziale di comportamenti incondizionati e capacità cognitive in piccoli mammiferi da laboratorio.
Il paradigma della tavola forata modificata (mHB) consente un'analisi comportamentale e cognitiva completa nei piccoli mammiferi da laboratorio, supportando la validazione precoce dei bersagli e la riduzione dei rischi meccanicistici nella scoperta di farmaci neuropsichiatrici e del sistema nervoso centrale. Integrando molteplici dimensioni comportamentali in un singolo saggio, la mHB riduce l'uso di animali, minimizza gli effetti di confondimento legati all'ordine dei test e semplifica la selezione dei bersagli pertinenti per il sistema nervoso centrale.
Il paradigma mHB si inserisce nel percorso di scoperta che va dalla validazione iniziale del target all'identificazione del lead e alla valutazione comportamentale preclinica, in particolare nei portafogli focalizzati sul sistema nervoso centrale.