Utilizzo dell'embrione di pollo come potente strumento nella valutazione delle cardiotossicità dello sviluppo

Ciao a tutti. Sono Qixiao Jiang, professore associato presso il Dipartimento di Tossicologia, Scuola di Sanità Pubblica dell'Università di Qingdao. A nome del mio gruppo di ricerca, presenterò le risorse dell'utilizzo dell'embrione di pollo nello sviluppo della nostra valutazione della cardiotossicità.

L'embrione di pollo è un modello di sviluppo classico che ha molteplici vantaggi come la facile manipolazione, l'alta accessibilità, il sistema indipendente chiuso, eccetera. Lavorare con più inquinanti ambientali, come l'acido tannico fenolico. Scarico diesel, in particolare la questione sui nanotubi di carbonio.

Abbiamo un metodo di esposizione multipla stabilito in laboratorio, ma per una causa più grande, anche le valutazioni funzionali vengono eseguite di routine. In questo video, ti mostrerò i dettagli, i metodi di esposizione e i metodi di valutazione funzionale morfologica. Non esitate a contattarci se siete interessati.

Grazie. Ecco i nostri metodi di esposizione che posso presentarvi. Ora il primo metodo che sto per introdurre è un'iniezione di cellule d'aria, in cui inietterai direttamente nella cella d'aria.

Pulire la superficie delle uova con una soluzione di poli-ioduro. Questa è una soluzione di poli-ioduro disponibile in commercio, diluita con acqua deionizzata, 1/5. E poi, asciugo il guscio d'uovo con carta velina, senza strofinare.

È importante perché lo scrubbing romperà il rivestimento dello strato protettivo all'esterno del guscio. Pulito tutte le uova nella stanza buia e segnare la cella d'aria con una matita. Escludere le uova con crepe sul guscio.

Escludere anche le uova con celle d'aria sul lato. Se questo ha una punta smussata, è altamente improbabile che si schiudano normalmente. Disinfettare l'area della cella d'aria, così come la sonda metallica, con il 75% di alcol.

Asciugarli e quindi praticare un piccolo foro al centro dell'area della cella d'aria con la sonda. Non infilare la sonda in profondità nella cella d'aria. Invece, rompere il guscio solo con la punta della sonda.

Se il foro non è ancora abbastanza grande, rompere nuovamente il guscio in prossimità del foro esistente, fino a quando non è abbastanza grande da consentire l'inserimento della punta. Inserire la punta della pipetta nel foro con la punta che tocca la membrana interna. Lentamente, iniettare la miscela e tenerla lì per almeno 10 secondi.

Questo per consentire all'olio erogato di essere completamente erogato. E poi rimuovere la punta. Ora, sigilla il buco con un pennello e una goccia di paraffina fusa.

Fare attenzione a non gocciolare paraffina fusa sulla memoria interna. Una volta sigillate, mettere le uova nell'incubatrice fino a quando non raggiungono lo stadio embrionale desiderato. Il secondo, il metodo che sto per introdurre è la Micro iniezione.

Prima di tutto, le uova devono essere pulite e maneggiate come descritto nella sezione di iniezione d'aria. Questa procedura deve essere eseguita in cappuccio sterilizzato. Sterilizzare l'area delle cellule d'aria e gli strumenti con acetone.

Praticare un piccolo foro al centro dell'area della cella d'aria con la sonda metallica. Non infilare la sonda in profondità nella cella d'aria o la memoria interna potrebbe essere danneggiata. Quindi, utilizzare lo stesso processo per ingrandire attentamente il foro fino a quando il diametro è di circa due millimetri.

Ciò può consentire la conferma del rapporto della memoria interna. Quindi caricare la soluzione in microiniettore e inserire con attenzione l'ago attraverso il foro nella membrana interna per circa tre millimetri totali. Erogare delicatamente la soluzione e quindi rimuovere l'ago.

Tenere l'ago il più perpendicolare possibile. Sigillare sottile il foro con un piccolo pezzo di nastro. Coprire completamente il foro per prevenire la disidratazione e la morte dell'embrione durante la successiva incubazione.

Il terzo metodo che sto per introdurre è l'infusione di cellule d'aria. dove si instilla un contaminante gassoso nella cella dell'aria. Pulire e maneggiare le uova come descritto nella sezione di iniezione delle cellule d'aria.

E poi puoi leggere le uova fino al giorno embrionale 17. Maneggiare le uova al giorno embrionale 17 per contrassegnare l'area delle cellule aeree. Al giorno embrionale 18, togliere le uova dall'incubatrice, sterilizzare l'area delle cellule aeree e gli strumenti, con acetone.

E poi praticare con cura due piccoli fori su due lati della cella d'aria. Uno è per iniezione di gas o aerosol. L'altro è per espandere la nostra aria.

Controllare attentamente le dimensioni dei fori, in modo che il lato del foro di iniezione sia appena sufficiente per l'inserimento dell'ago del catetere, mentre il diametro del foro di espansione dovrebbe essere un po 'più grande. Circa un millimetro di diametro. Ora questo è il sacchetto campione che usiamo per contenere il gas o l'aerosol bersaglio.

Puoi sostituire con qualsiasi dispositivo tu usi. Versare delicatamente 10 ml di gas o aerosol in una siringa. E poi, attacca con attenzione la siringa al nostro ago del catetere con il telecomando dell'ago interno in modo che sia morbido.

Inserire delicatamente questo ago del catetere nel foro di infusione. Una volta che è lì, applicare pressione contro l'ago del catetere. Questo per ridurre al minimo la perdita dal sito di iniezione.

Un altro dito può essere messo in giro con il foro di espellere per la conferma dell'infusione. Se si esegue l'infusione delicatamente, il flusso d'aria dal foro di espellere deve essere facilmente percepito. Questa è l'aria originale nella cella d'aria che viene espulsa.

Al termine dell'infusione, sigillare immediatamente entrambi i fori. Questi nastri e il ritorno delle uova alla tua incubatrice. Posso introdurre il nostro processo di valutazione degli endpoint.

Anestetizzare completamente gli animali con pentobarbital 33 mg/kg. Iniezione IP testata dalle aperture. Quindi posizionare i polli sul tavolo operatorio.

Sterilizzare l'area dell'addome e gli elettrodi con etanolo. Quindi, inserire due elettrodi ad ago da due lati dell'addome sub continuamente. Assicurarsi che gli aghi non entrino nella cavità dell'addome sollevando un po 'la pelle.

E inserisci l'ago da lì. Una volta inserito, spingere con attenzione l'ago in avanti fino a raggiungere il lato della cavità toracica. Assicurarsi che l'ago non vada in profondità nel corpo o scuota dalla pelle.

Quindi effettuare le misurazioni con uno strumento elettrocardiografico. Possono essere utilizzati anche altri strumenti del Seminario in grado di ECG. Questo è il nostro secondo metodo di valutazione del punto finale è quello di mappare per Motrin.

Questa è la sezione trasversale del cuore nel modo di HME. Questo è il ventricolo giusto con cui misureremo. Per fare questo, usiamo due righelli.

Righello 1 e righello 2. Ora copiamo semplicemente il righello uno sullo schermo e lo ridimensionamo alla dimensione appropriata e quindi lo ruotiamo. E lo spostiamo in modo che le due estremità della linea orizzontale riposino sulle 2 estremità delle 3 pareti del ventricolo destro.

E ora abbiamo sette linee di misurazione che attraversano la nostra parete a tre ventricoli destro. Ora copiamo anche il righello secondario nell'immagine. Lo ridimensionamo anche un po 'e lo ruotiamo e lo sostituiamo in modo che venga posizionato allo stesso modo.

Questa linea orizzontale va parallela alla parete esterna del ventricolo destro. E quello perpendicolare attraverserebbe il punto in cui le linee della sostanza bianca del sovrano incontrano la parete interna o il ventricolo destro. E poi facciamo punti di misurazione in modo che possa essere misurato in seguito con l'immagine J.Ripetiamo questo processo 7 volte per campione, in modo che la nostra misurazione rappresentativa del ventricolo destro.

Ti mostrerò un riepilogo dei risultati attuali. Questa è l'iniezione di PFOA nell'uovo prima dell'incubazione, e puoi vedere che con l'aumento di quelli dell'iniezione la concentrazione sierica di LPF nel siero è aumentata efficacemente. Per la dimostrazione, l'efficacia, della micro iniezione.

Puoi vedere che A è controllo, e il B, è dove l'antivirus esprime in grande fluorescenza la proteina q è stata iniettata. Puoi vedere una forte fluorescenza. E questa è la dimostrazione dell'efficacia dell'infusione di epitelio.

Puoi vedere che con l'infusione sono stati osservati drammatici cambiamenti della fibra ottica nel tessuto del miocardio. Ok. E puoi anche vedere che gli intervalli R-R dei polli da cova 0, 1 e 2 settimane. È anche cambiato significativamente dopo l'infusione con scarico diesel.

Indicando che si tiene conto di questo, questo metodo. Qui, puoi anche vedere che l'efficacia dell'infusione di epitelio in questo esempio. puoi vedere che i ventricoli giusti del cuore sono aumentati efficacemente dopo essere stati infusi con lo scarico diesel.

E anche, naturalmente, qui stiamo usando i metodi istomorfometrici. Ti mostriamo e basta. Questo è abbastanza efficace. Ok.

Questi sono tutti i metodi che vi presenterò. Spero che questo possa facilitare il lavoro di altre persone con l'embrione di pollo come potente strumento di ricerca nella tossicologia dello sviluppo. Buona Giornata.