17 marzo 2023
In questo protocollo, la tecnologia di lavorazione dell'olio di montone di Epimedii folium (EF) è stata ottimizzata applicando una metodologia sperimentale di superficie di progettazione-risposta Box-Behnken ed è stato studiato preliminarmente l'effetto dell'EF grezzo e ottimizzato estratto dall'acqua sullo sviluppo embrionale del pesce zebra.
In questo studio, abbiamo adottato un metodo di lavorazione ampiamente utilizzato e acquisito una tecnica persistente stabile e affidabile. Il risultato ha mostrato che la tossicità di Epimedii trasformati era ridotta. Il metodo della superficie di risposta richiede meno esperimenti e cicli più brevi, che non solo evitano i problemi esistenti nella statistica matematica tradizionale, ma aiutano anche gli utenti a selezionare le condizioni ottimali.
Questo metodo può anche essere ampiamente utilizzato nell'industria chimica, nell'ingegneria biologica, nell'industria alimentare, nella preparazione della medicina cinese, nell'estrazione della medicina cinese e così via. Dopo aver preparato la soluzione ed eseguito la cromatografia, selezionare i parametri chiave nell'elaborazione EF, come la quantità di olio di montone, la temperatura dell'olio di montone e la temperatura di frittura come fattori influenti. Utilizza i punteggi completi dei contenuti icariin, EA, EB, EC e BI come indici di valutazione.
Utilizza il software di analisi della superficie di risposta per progettare gli esperimenti sulla superficie di risposta di Box-Behnken, esplorare la superficie di risposta quadratica e costruire un modello polinomiale del secondo ordine. Selezionare il nuovo design Box-Behnken e impostare l'opzione dei fattori numerici su tre. Impostare i fattori A, B e C.Fare clic su continua, quindi impostare l'opzione delle risposte su uno e fare clic su continua per completare il progetto.
Elaborare l'EF in base ai parametri specifici, ad esempio, per l'ordine numero uno, dove l'olio di montone raffinato come 15% volume per volume, quindi riscaldarlo a 50 gradi Celsius per fonderlo. Aggiungere l'EF grezzo al montone fuso. Soffriggere a fuoco delicato fino a quando non è uniformemente lucido, quindi rimuovere e raffreddare l'EF. Preparare le soluzioni di prova dei prodotti trasformati e analizzarle utilizzando HPLC come descritto nel manoscritto.
Registrare i tempi di ritenzione e le aree di picco di ciascuna composizione chimica e calcolare il contenuto di icariina, EA, EB, EC e BI in ciascuna soluzione di prova rispetto a una curva standard esterna. Calcola i punteggi completi dei 17 gruppi sperimentali utilizzando la formula di calcolo del punteggio completo. Importare i risultati completi del punteggio per i 17 gruppi di esperimenti nel software di analisi dei dati per analizzare i dati sperimentali.
Sotto gli elementi di valutazione, selezionare l'opzione di ordine del processo quadratico e l'opzione del tipo di modello polinomiale. La superficie di risposta della quantità di olio di montone e la temperatura di frittura erano più ripide rispetto agli altri fattori testati e le linee di contorno tendevano ad essere più ellittiche, indicando che l'interazione tra questi due fattori era più significativa delle interazioni tra altri fattori. Il cromatogramma HPLC della sostanza di riferimento mista, dei prodotti trasformati grezzi Epimedii Folium ed Epimedii Folium dimostra che il contenuto di BI nell'EF grezzo è basso, mentre aumenta dopo la lavorazione.
Il gruppo grezzo mostra evidenti deformità spinali, curvatura del corpo, edema pericardico e deformazione epatica a 150 microgrammi per millilitro di concentrazione di farmaco, mentre tali cambiamenti erano rari nei pesci giovani nel gruppo trasformato. Tutti i pesci zebra nel gruppo di farmaci grezzi sono morti 24 ore dopo la somministrazione di 200 microgrammi per millilitro di farmaco, mentre la mortalità nel gruppo elaborato era solo del 6,67% La somministrazione di 200 microgrammi per millilitro di EF ha causato la morte di tutti i pesci zebra nel gruppo di farmaci grezzi dopo 72 ore, mentre nel gruppo elaborato, 500 microgrammi per millilitro di EF hanno causato la morte di tutti i pesci zebra. La concentrazione letale mediana dei due gruppi sperimentali a 72 ore dopo la fecondazione ha mostrato che la LC 50 era di 151,3 microgrammi per millilitro nel gruppo grezzo e 219,8 microgrammi per millilitro nel gruppo elaborato.
La cosa più importante nell'esperimento è selezionare i fattori del metodo della superficie di risposta e determinare i parametri di questi fattori.
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Questo studio ha ottimizzato la tecnologia di lavorazione con olio di mutton delle foglie di Epimedii folium (EF) utilizzando un disegno sperimentale di tipo Box-Behnken. Gli effetti di EF estratto con acqua, sia in forma grezza che ottimizzata, sullo sviluppo embrionale del pesce zebra sono stati indagati in via preliminare.
L'ottimizzazione della lavorazione con olio di montone di Epimedii folium mediante metodologia della superficie di risposta affronta critiche sfide legate alla sicurezza e alla riproducibilità nello sviluppo di farmaci botanici. La valutazione quantitativa della riduzione della tossicità e dell'uniformità dei componenti supporta una previsione affidabile nell'interfaccia tra scoperta precoce e studi preclinici. Questo flusso di lavoro consente un avanzamento dei medicamenti tradizionali nei moderni processi biotecnologici farmaceutici adeguato al rischio.
Questo flusso di lavoro ottimizzato per l'elaborazione e la valutazione della tossicità collega le fasi iniziali di scoperta, screening e valutazione preclinica della sicurezza per i candidati farmaceutici di origine botanica.