2010年2月2日
視運動性応答は、広く幼虫ゼブラフィッシュの視覚機能を評価するために使用されています。それにもかかわらず、仔魚のための標準プロトコルは、まだ大人に容易に適用されていません 1月5日。ここで、我々の研究室で確立される新しいプロトコルを使用して、成人ゼブラフィッシュのOKRを測定する方法を紹介します。
皆さん、こんにちは。USTCのMean Jingです。ご存知の通り、光学的運動反応(OKR)とは、動物が格子状のパターンを追って眼球を動かす行動テストのことです。
その周囲を移動します。この行動は広く利用されてきました。ゼブラフィッシュ幼魚の視覚機能を評価します。
しかしながら、標準的なプロジガルを用いて仔魚を固定する方法は、成魚には容易に適用できません。そこでこのビデオでは、成魚のOKRを記録することを可能にする新しいプロジガルについて紹介します。また、比較のために、仔魚のOKRテストと成魚のOMRテストについても実演します。
OMRとは、運動反応(motor response)のことです。それでは、私たちがカスタマイズしたOKRアプリの画面をお見せしましょう。いい tampilan ですね。
この外観では、モーターによって駆動されるグレーティングベースがあります。グレーティングチューブはこのグレーティングベースの上に設置されており、ベースと共に回転します。グレーティングベースの上にはチャンバープレートが配置されていますが、これは回転せず、円形ランプを用いてグレーティングを照らします。
以上です。フィッシュチャンバーをチャンバープレートにセットすれば、準備完了です。こんにちは、Suiです。
こんにちは、Wです。私たちはUSPCの神経発生およびELLの研究に従事しています。本日は、ゼブラフィッシュのハイテストのスウィープについてご紹介します。それでは、始めましょう。
まず、成体ゼブラフィッシュを用いたOKRテストの実施方法を説明します。スポンジを魚用チャンバーに入れ、水を注ぎます。スポンジを軽く絞り、気泡を取り除いてください。
ここでは、ピンを用いて魚を固定する方法を段階的に説明します。まず、魚を軽く動かして背鰭が上を向いていることを確認し、尾部を伸ばして体を真っ直ぐにします。動脈クランプで尾鰭を固定し、モデリングクレイを用いてクランプをチャンバーに貼り付けます。
固定後、チャンバーにさらに水を注ぎ、魚に向けて水を吹きかけて覚醒させます。これでようやく準備が完了し、いよいよ本番の試験であるOKRテストへと進みます。
画面上部にある2つの物体は、ピンヘッド上の回折格子の反射に過ぎないことに注意してください。それでは、幼魚のOKRテストをどのように行ったかを見ていきましょう。オスとメスの魚を交配タンクに入れ、産卵させます。
次に、卵を回収してガラスシャーレに移します。仔魚の固定にはメチルセルロース溶液を使用します。この溶液は、加熱後、速やかに冷却させる必要があります。
これを氷水に入れ、透明になるまで静かに振ります。次に、20 mLのメチルセルロースをディッシュに入れます。溶液中に気泡がないことを確認してください。
溶液中に幼魚を一列に並べます。目盛り(グレーディング)の反射を確認できるよう、視野内に1 µLの小さな気泡を導入します。以上が、野生型ゼブラフィッシュ幼魚のOKR行動のデモンストレーションです。
最後に、成体ゼブラフィッシュを用いたOMRテストの方法を説明します。まず、魚を捕まえ、フィッシュチャンバーに入れます。次に、フィッシュチャンバーを所定の位置に設置します。
次に、テスト開始前に魚が中心部を通過できないよう、チャンバーの中央に白いシリンダーを設置します。魚をこの照明条件に1分間適応させることが推奨されます。以上で、成体ゼブラフィッシュを用いたOMRテストのデモンストレーションを終わります。
ここでは、成ゼブラフィッシュにおけるOKRテストの実施方法について説明しました。このテストでは、メチルセルロースの代わりにピンを用いてゼブラフィッシュを固定することを試みました。この手法を用いることで、4時間以上にわたって持続する強力な反応を記録することができました。
これにより、実験者は十分な時間を確保できます。
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視覚運動反応(OKR)は、ゼブラフィッシュ幼魚の視覚機能を評価するために用いられる行動テストです。本記事では、既存の手法の限界を解消し、成体ゼブラフィッシュでOKRを測定するための新しいプロトコルを紹介します。
成体ゼブラフィッシュの視覚機能を評価することで、感覚処理および網膜の健康に関連する神経科学的ターゲットのメカニズム的なリスク低減が可能になります。視覚運動反応(OKR)アッセイは、創薬ワークフローにおけるターゲット検証のための、行動に基づいた定量的な読み出しを提供します。この手法は、遺伝学的または薬理学的な操作を、疾患に関連するシステムにおける機能的な視覚出力に結びつけることで、予測的な信頼性をサポートします。
OKRアッセイは、ターゲット仮説の検証から前臨床バリデーションに至るディスカバリーのコンティニュアムに適合しており、特に神経科学および感覚モダリティのプログラムに適しています。