診断剖検及びラット及びマウスで選択された組織とサンプル集

この手順の全体的な目的は、げっ歯類の基本的な剖検を行うことです。まず、動物に関する基本情報を記録します。次に、内臓を検査します。

3番目のステップは、臓器や腸間膜リンパ節などのサンプルを採取することです。最終的に、動物の健康状態は組織病理学やその他の手法を通じて判定されます。一般的に、剖検に慣れていない人は、実務を通じて齧歯類の解剖学的構造を習得する必要があるため、苦労することがあります。

これらの手法は、研究コロニーにおける動物の健康状態に関する重要な疑問を解決するのに役立ちます。さまざまな組織の位置や、正常組織と異常組織の見分け方を習得するには時間がかかるため、これらの技術を視覚的に示すことが不可欠です。動物を安楽死させる前に、個体の履歴に関する情報を収集し、身体状態、行動、性別、年齢、体重、系統などの現在の特性を記録してください。

この記録は、動物を安楽死させる前に組織を検査する担当者にとって極めて重要な年齢データとなります。適切な個人用保護具を必ず使用してください。解剖台、ピンセット、はさみ、容器用ラベル、固定液、培地、および回収容器を準備します。

動物を安楽死させた後、身体状態を評価し、皮膚や被毛の異常、衰弱、および脱水の有無を確認します。また、人工的な操作、インプラント、または手術による瘢痕の痕跡がないかを確認してください。次に、解剖顕微鏡を用いて、すべての外開口部を詳細に検査します。

これらには、耳、目、鼻、口、肛門、および生殖器が含まれます。次に、動物を解剖板の上に仰向けに置き、ピンセットで皮膚を持ち上げ、ハサミを使用して肛門から顎まで皮膚を切開します。続いて、皮膚を側方に反転させ、腹壁と肋骨を切り開きます。

肋骨格の両側を外側に向かって2か所切開し、胸腔内臓を露出させます。横隔膜を切断します。次に、胸骨の上部を横方向に切断して、肋骨格を取り除きます。

次に、露出した胸腔および腹腔の器官を観察します。色の変化、異常な臭い、大きさの相違、および器官の欠損や脱落がないかを確認してください。器官表面の硬さを調べ、組織塊や液体で満たされた嚢胞がないかを確認します。

また、いずれの体腔内にも液体が存在するかを確認してください。続いて、胃腸管の検査を行います。腸間膜にリンパ節の腫大や組織塊がないかを確認してください。

胃腸管の内容物を記述し、壁の肥厚、腫瘤、または出血がないか注意深く確認してください。腎臓内部を検査するために、メスを用いて、左腎臓を縦断切片に、右腎臓を正中線からずらして横断切片にしてください。実質に異常がないかを確認します。

次に、雄の尿生殖器系を観察します。精嚢、精巣、精巣上体、および尿管を確認してください。また、雌では、子宮、卵巣、および尿管を確認します。

尿生殖系に閉塞、液体貯留、出血、またはその他の異常がないかを確認します。これらの検査が完了した後、さらなる検討のために標的臓器を分離して摘出します。通常、摘出時に心臓、肝臓、腎臓、および脾臓を回収します。

各臓器を固定液に浸すか、あるいは凍結保存や免疫組織化学染色など、これらの組織を必要とするプロトコルの最初のステップに従って適切な固定を行ってください。一般的に、組織は10%NBFなどの保存液に、固定液20：組織1の体積比で浸漬させます。ラットを扱う場合は、鼻腔吸引の前に気管支吸引を行ってください。

まず、皮下組織の皮膚を頸部から反転させ、唾液腺と頸部筋肉を露出させます。次に、それらの組織を除去して気管を露出させます。気管に3 mmの切開を加え、1 mLのサンプリング液を満たしたピペットを気管腔内へ、四分の一方向に向けて挿入します。

サンプリング液を気管から肺へとゆっくり3回注入（フラッシュ）します。その後、サンプリング液を吸引し、ピペットを気管から取り出します。液のすべてがピペットに戻るわけではありません。

したがって、さらに液体が必要な場合は、この工程を繰り返してください。マウスでの試験において、鼻腔吸引液または気管支吸引液のサンプルを採取するには、滅菌済みのハサミを用いて鼻咽頭ATUにアクセスします。

側頭下顎関節を切断し、下顎骨を上顎骨から反転させて、鼻咽腔を露出し、鼻吸引液を採取します。1 mLのサンプリング液を充填したピペットを、マウスの鼻咽腔またはラットの気管腔に挿入します。ピペットを頭側に向かせて押し込みます。

チップを鼻腔蓋に接触させます。そこで、サンプリング液をゆっくりと注入してください。液が鼻腔に入ると、鼻孔にメニスカスが形成され、半透明の口腔蓋を通しても確認できるはずです。

ただし、液体が口から流出した場合は、ピペットの向きを調整してください。完全に注入し終えたら、鼻腔からサンプリング液をピペット内に回収し、ピペットを抜きます。まず、鉗子で気管を把持し、鉗子の直上で切断します。

次に、気管をそっと上に引き上げながら組織の接続部を切り離し、胸部組織全体を摘出します。次に、肺を作業面に平らに置き、気管に縫合糸または紐をゆるく結びつけます。結び目を強く締めすぎないようにしてください。締めすぎると、気管に針を通すことができなくなります。

次に、シリンジに固定液を満たし、気管を針に固定しながら、針を気管の開口部に挿入します。鉗子を用いて、肺が完全に膨らむまでゆっくりと固定液を注入します。注入する固定液の量は、動物の齢、系統、および健康状態によって異なります。

組織の充填不足であれば平坦に見え、充填しすぎた場合は、充填後に組織から泡状の液体が漏れ出します。固定液が肺から逆流するのを防ぐため、気管を囲む縫合糸または紐を締め付けます。その後、膨張させた肺を固定液に入れます。死体を清潔な解剖台の上に腹臥位で置き、ハサミとピンセットを使用して、方腹（calver）上の皮膚と筋肉を取り除きます。

次に、小型のハサミを用いて死体の首を切り離します。大後頭孔に下刃を挿入し、頭蓋骨の中線を上向きに切り開きます。その後、ピンセットで頭蓋骨を左右に広げて脳を露出させます。

病理学者が頭蓋骨内で脳の切片を作成することを希望する場合は、脳を露出させた状態で頭蓋骨を直ちに10%NBFに浸してください。そうでない場合は、ピンセットまたは指で鼻の周りから頭部を掴み、重力で組織が頭蓋骨から脱落するように、ゆっくりと頭蓋骨を反転させます。嗅球から始めて、湾曲ピンセットを脳の外縁に沿って慎重に滑り込ませます。

ピンセットで神経を軽くつまみながら、頭蓋骨に沿って小脳に向かって滑らせます。脳を固定液に入れた後、まず腸の大きなコンマ型の盲腸を確認して、腸間膜リンパ節を探します。腸間膜リンパ節は、盲腸に隣接する腸間膜にある黄色い卵形または球形の組織の塊です。

これらは周囲の腸間膜や脂肪よりもわずかに厚く、質感が硬いことが多いです。最初は組織を区別するために解剖用ルーペが有用かもしれませんが、経験を積めば不要になります。ピンセットとハサミを用いて腸間膜リンパ節を単離し、培養、PCR、または組織病理学的検査に使用するための保存チューブに移してください。

プロトコールの完了後、病理学者や研究者は、安楽死時の客観的および主観的な状態に関する書面報告書を入手できます。また、固定前の組織に関する客観的な記述、固定液に浸漬された主要な腹腔内および胸腔内器官すべて、脳、腸間膜リンパ節、ならびに鼻腔および気管支吸引物のサンプルが得られます。習熟すれば、簡略化した剖検を30分未満で完了させることが可能です。

この手順を遂行する際は、動物の状態および組織の状態に関する観察事項を記録することを忘れないでください。このビデオを視聴することで、灌流後の肺、腸間膜リンパ節、および脳の採取を含む、齧歯類の完全な剖検方法について十分に理解できるはずです。