$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
ポリドーパミン層を備えた組み立てられたパーフルオロアルコキシコーティングされた白金線から始めます。
このプローブを、ポリドーパミンに固定化して免疫プローブを形成する標的ペプチド特異的抗体を含む溶液に浸します。
免疫プローブを洗浄し、塩化銀接地電極を備えたフローチャンバーに入れ、回路を確立します。
まず、バッファーを導入し、電圧を印加して免疫プローブを活性化し、バッテリーまたはコンデンサとして機能し、エネルギーを電荷として蓄えるようにします。
電気信号を記録してベースラインを生成します。
次に、バイオセンサーを標的ペプチドを含む溶液にさらします。
これらのペプチドはプローブ上の抗体に結合し、局所電荷とバイオセンサーに蓄えられたエネルギーに変化を引き起こします。
電気信号を記録します。シグナルの増加は標的ペプチドの存在を示し、このシグナルの大きさは標的ペプチド濃度と相関します。
まず、長さ25センチのパーフルオロアルコキシコーティングされた白金線を切断します。次に、メスを使用して、白金線に食い込まないように注意しながら、一方の端から約5ミリメートルのパーフルオロアルコキシコーティングを剥がします。次に、白金線の剥がした端を金メッキの 1 ミリメートルのオス コネクタ ピンに挿入します。次に、針ペンチを使用して、白金線の剥がれた端の周りのコネクタピンの歯を圧着し、白金線を金メッキのコネクタピンにはんだ付けします。
次に、50ミリグラムのドーパミン塩酸塩を50ミリリットルの10ミリモルPBSにpH6で添加し、撹拌して混合することにより、ドーパミン溶液を調製します。ドーパミンを完全に溶解した後、白金線の先端をドーパミンを添加したばかりのPBSが入った容器に入れます。塩化銀ディスク電極をヘッドステージのグランドチャネルに接続します。次に、ドーパミンを添加したPBSと白金線を含む容器に塩化銀ディスクを置きます。
先に進む前に、ヘッドステージの基準チャネルにワイヤーシャントを接続します。インタラクティブなデータ収集ソフトウェアを開き、開始電位をマイナス0.6ボルト、終了電位を0.65ボルト、スキャンレートを0.04ボルト/秒、蒸着時間を420秒に設定して、ノコギリ電着コマンド電位プロトコルを設定します。
ポリドーパミンの沈着が完了したら、塩化銀粉砕ペレットと白金線の先端を容器から取り出します。ワイヤーチップをpH 7.4のPBSを含むマイクロチューブに2〜5分間入れ、ワイヤーチップがマイクロチューブの側面または底面に接触しないようにします。次に、目的の抗体とpH 7.4のPBSを1対20の比率で適切なサイズの容器で組み合わせて、抗体溶液を調製します。
次に、白金電極のポリドーパミンを沈着した先端を室温で2時間抗体溶液に浸し、白金線の先端が溶液中に浮遊し、マイクロチューブの内面に置かないようにします。静電容量性免疫プローブの機能的な先端をフローチャンバーに入れ、プローブの感覚先端を損傷する可能性があるため、電極の先端を邪魔しないように注意してください。
最初の実験テストの前に、TBS標準実行を実行して容量性免疫プローブをコンディショニングし、電圧プロトコルの場合、正のステップ電位を110ミリボルトに、負のステップ電位をマイナス5ミリボルトに設定し、ステップ持続時間を20ミリ秒に設定し、取得期間を600秒に設定します。
次に、同じTBSを使用して目的のペプチド溶液を作成します。過融合液の組成を維持するには、過融合液をTBSとペプチド添加TBSの間で切り替えることができるマニホールドシステムをセットアップします。TBS標準パラメータを使用し、取得時間を360秒に設定して、ペプチドセンシングデータ取得プロトコルを設定します。