に自然免疫とサーカディアン規制Photobehaviorを勉強する光プアッセイショウジョウバエ幼虫

次の実験の全体的な目的は、明暗選好テストを使用して、ショウジョウバエ溶岩の自然および概日写真の振る舞いをテストすることです。これは、まず実験用幼虫を定義された明暗条件下で飼育し、幼虫の初期概日時計を確立することによって達成されます。次に、幼虫は一定の暗闇に切り替えられ、幼虫の概日時計が自由に動くことができます。

L 3の摂食段階に達すると、溶岩はグループに分類され、さまざまな概日時間で光の好みがテストされます。選好指数の計算と、時点と実験グループとの比較に基づいて、自然光と概日光の選好を示す結果が得られます。この方法は、光センシングの自然的および概日的調節と写真の挙動の処理に関する洞察を提供するだけでなく、嗅覚、破毀院、化学療法、サーモタクシーなどの他のシステムにも適用できます。

同様に、学習テストや記憶テスト用に変更できます。手順をデモンストレーションするのは、アリーナとBMAです 私の研究室の卒業生へ 卵を収集するには、交配する成虫のハエを新鮮なファイルに12時間産み、それらを新しいバイアルに移します。12時間ごとに大人を移し続け、12時間の明るいサイクルと12時間の暗いサイクルを繰り返します。

12時間の卵のコレクションをインキュベーターに保管します。実験のために、動物を初期のL3幼虫の段階から育てます。これらは、卵から84〜108時間利用可能な給餌laeです。

LAEの正しい病期分類を行うことは、実験の成功にとって重要です。L 3の後半から、LAEは視覚行動の概日成分をテストするために写真の行動を変更しました。テストの48時間前、主観的な幼虫の直前に、夜明け、収集した幼虫を段ボール箱に入れます。

その後、実験まで48時間、ボックスを一定の暗闇のインキュベーターに移し、これらの幼虫は専用のスペースに邪魔されずにいなければなりません。4つの象限に分割された20センチメートルの正方形を使用して、9センチのペトリ皿の蓋を準備します。目安として。

10センチ四方のアルミホイルを反対側の象限に接着し、黒いテープで覆います。フタの縁は必ず覆ってください。次に、テーブルの上の光源の下にある20センチメートルの正方形を4つの象限に分割します。

シート上のテストディッシュの円周をマークして、一貫した変位のガイドとして機能します。LEDを取り付けますamp 鉄製のサポートスタンドを使用して、ペトリ皿の上。テストプレート全体が均一に照らされるように高さを調整します。

テストサイトでの光強度を350〜760ルクスに調整するには、ランプの高さをさらに調整するか、調整可能な電源を使用します。実験室には赤色光照明が必要であり、動物が飼育されている場所と同じ温度でなければなりません。小瓶は、絶え間ない暗闇の中で2日間放置された。

食べ物の上部5ミリメートルからへらで彼らの食べ物の溶岩を集めます。ペトリ皿の蓋の外側に食べ物を広げます。食べ物に水を加え、へらでやさしく混ぜます。

絵筆を使って新しい皿に水道水を一滴加えます。幼虫を水滴に移して洗います。次に、濡れた絵筆を使用して、濡れた絵筆を使用して幼虫を収集します。

早期摂食のL 3幼虫のみを選択し、後期の放浪L 3幼虫を避けてください。選択した幼虫を試験プレートの中心に移します。給餌L 3匹の幼虫は、開いて外側に突き出た前方球形を持っています。

指のような形で。後部の球形には、それぞれ3つの開口部と4つの大きな枝分かれした毛のグループがあります。唾液腺は2番目の腹部セグメントまで伸びています。

30匹の幼虫を試験板の中央に置いたら、準備した蓋で覆います。LEDランプを点灯します。タイマーを開始し、幼虫がプレート上を自由に動き回るのを5分間待ちます。

次に、蓋をすばやく取り外して、暗闇と明るい象限の幼虫の数を数えます。各溶岩の位置をマークすると、カウントが容易になります。簡単な写真は、幼虫が壁を這ったり、寒天に借用したりするなど、不明瞭な光の好みを示す幼虫を中立的な好みとしてカウントし、光の好みのインデックスを計算するときに幼虫の総数に追加するのにも役立ちます。

幼虫を数えた後、プレートを捨てて、次の実験のために新しいテストプレートを使用します。遺伝子型ごとに10〜15回の試行を行った後、プロトコルに従って解析を進めます。広東ES溶岩の明るく暗い好みは、2つの異なる概日時間で比較されました。

CTゼロとCT12は、主観的には、標準的な条件下で48時間、夜明けと夕暮れの幼虫またはうめき声を上げ、その後3日間、一定の暗闇に切り替わります。350ルクス未満の明暗試験では、CTゼロで試験した幼虫では、CT12で試験した幼虫と比較して、光の光感受性が高いことが明らかになりました。この式を使用すると、CTゼロ溶岩の暗さの好みは0.36に対して0.52でした。

CT 12幼虫は、ウィルコクソン試験を使用してインデックスを比較し、0.023の有意なP値を生成します。このビデオを見た後、この目標までのさまざまな回路と時間ポイントで栄養幼虫の光の好みをテストする方法をよく理解しているはずです。ステージFに3匹のoph幼虫を同伴させ、その羞明行動をテストし、統計的比較のために光選好指数を計算できるはずです。