齧歯類網膜とリモート四肢虚血プレコンディショニングの保護効果に機能を評価するために電図を用いて、

この手順の全体的な目標は、正常な光で損傷したラットと遠隔性虚血性の前処理されたラットおよび軽傷ラットで視覚機能をテストすることです ERGを使用して、それによって網膜に対する遠隔肢虚血の保護効果を実証します。これは、最初に暗くし、ラットを12時間適応させることによって達成されます。2番目のステップは、LED光刺激とデジタルアンプを使用してベースラインの暗適応ERGを記録することです。

次に、ラットを明るく連続的な光にさらすことにより、網膜ストレスにさらします。最後のステップは、光損傷ラットと遠隔肢虚血の前処理されたラットのERG記録を比較し、A波で見られる光受容体応答とB波で見られる網膜内応答を測定することです。最終的に、暗順適応ERGは、暗所視視覚機能を評価するために使用されます。

したがって、この方法は、遠隔虚血ベースの神経保護に関する洞察を提供できます。また、他の形態の網膜損傷や疾患の薬理学的試験、および視覚障害のある動物のスクリーニングにも適用できます。この手順を開始するには、ラットを暗闇で12時間適応させ、次にケタミンキシラジンカクテルの注射で麻酔します。

動物が意識を失ったら、足を少しつまんで麻酔の深さを確認し、反射反応がないことを確認します。次に、アトロピンを一滴とプロクスメタンを角膜に一滴塗ります。長さ10センチの黒い糸にカットします。

次に、糸でループを作り、眼球をわずかに前方に引き寄せ、角膜をまぶたから離すために、少しきつく編むように、ループを目の赤道に滑り込ませます。続いて、角膜にカーマー点眼薬を塗ります。ネズミを加熱されたプラットフォームの上の吸収性寝具の上に置き、頭をガンツフェルトの開口部に置きます。

次に、内部温度プローブを直腸に挿入して体温が摂氏37度に維持されていることを確認し、コードをラットの尾にテープで固定して温度プローブを所定の位置に固定します。次に、参照電極を後肢に皮下挿入します。負極が口から滑り落ちないように、負極を口にしっかりと入れてください。

接続リード線を安定した面に取り付けます。次に、正極を角膜の中心に配置し、ミクロンマニピュレータを使用して電極が角膜に優しく接触していることを確認します。電極が配置されたら、ガンツフェルドと動物を含む穴のセットアップを不透明な材料で覆い、暗順応を維持します。

取得ソフトウェアで。サンプリング レートとして 2 キロヘルツを設定し、収集前のサンプリングには 5 ミリ秒、収集時間を 100 から 1000 ミリ秒に設定します。次に、バンドパスフィルターを1〜1000ヘルツに設定し、フラッシュ後100ミリ秒の期間サンプリングがトリガーされるようにします。

次に、録音ベースラインを確認します。外部ノイズはありませんが、アンプのノイズと呼吸振動を示します。次に、テストフラッシュを実行します。

これは、テストフラッシュに応答した典型的なERG波形です。それが終わったら、動物が10分間暗闇に再適応するのを待ちます。次に、安定した信号のベースラインを再確認します。

その後、録音を開始します 録音セッションの最後に、動物の体温の安定性を確認します。電極を取り外してから、カーマーポリマーを角膜に再塗布します。その後、動物が完全に可動して活動的になるまでヒートパッドで回復させてから、動物の飼育に戻ります。

この図は、暗順応ERGからの波とB波の測定を示しています。ここに示されているトレースは、暗く順応した目の角膜から、T ゼロで示された時間に与えられた明るい閃光に記録されています。波の振幅は、基線から最初の谷まで測定されます。

B波の振幅は、A波の谷から次の正のピークまで測定されます。レイテンシは、スティミュラスアーチファクトからトレース上の関心のあるポイント(A波の谷など)まで測定されます。生の優勢なERG信号は、光刺激の増加とともに増加します。

波は、約0.4ログの暗所視カンデラ秒/メートルの2乗で明らかになり、ツインフラッシュパラダイムを使用して、混合ERG信号をコーンとロッドの応答に分離しています。一度マスターしたら。この手法は30分以内に行うことができます。