シンプルでコンピュータ支援嗅覚テストマウス用

次の実験の全体的な目標は、マウスの生来の嗅覚弁別、嗅覚の好み、または回避と嗅覚の感受性をテストすることです。これは、マウスを新規の誘引剤または控訴物質、および中性の臭いである水にさらすことによって達成されます。その間、ビデオカメラは行動セッションを記録します。

次に、提供されたマクロを使用して画像Jでビデオを分析して、臭気と水のパラメーターに費やした時間を取得します。結果は、事後コンピュータ支援分析に基づいて、異なる遺伝子型間で水と比較した匂いに対する嗅覚に対する選好または回避行動を示しています。専用のアリーナや嗅覚の使用に対する嗅覚テストの主な利点は、おなじみのアリーナを使用しているため、迅速な完了と簡単なセットアップであることです。

さらに、それは手順を示す安価なハードウェアを使用しており、私の研究室の学生によると、エマニュエル・アブリーになります。この実験では、生後3〜5か月のオス、C 57 black、6匹の野生型、およびトランスジェニックマウスを使用します。このデモンストレーションでは、2つのノックアウトラインとリッターメイトコントロールを使用しています。

実験アリーナでは、清潔で滅菌されたマウスケージと3cmの寝具を使用してください。次に、カメラのセットアップを準備します。ケージの床から58cm上に置き、カスタマイズされた三脚マウントに取り付けます。

ケージの位置がどこにあるべきかを示すために、カウンターにいくつかのマークを付けます。中央の画像の場合は、320 x 240 ピクセルのビデオを約 15 フレーム/秒で記録するようにカメラを設定します。テストを行う人は、各香りの濃縮物を準備し、可能な限り溶剤に保管しています。

選好試験では、ピーナッツオイルにピーナッツバターの体積比10%の溶液を作ります。回避テストのために、メチル酪酸に98%の溶液を持っています。感度試験は、試験の1〜2日前に同系統のマウスから雌の尿を採取します。

ケージグリッドの上に腹を乗せて女性を拘束し、尿の滴をプラスチック皿に集めます。正規化するために、複数の女性からサンプルを収集します。個人差があるため、すべてのサンプルを1.5ミリリットルのチューブに引き抜き、摂氏マイナス20度で保管します。

動物を慣れさせるには、1つを掃除されたケージに入れて探索させます。5分間、テストケージの環境はホームケージの環境のようでなければなりません。各テスト日に1回、慣れフェーズを繰り返し、慣れ期間が終了したら、録音を開始し、心地よい香りの60マイクロリットルをピペットで動かします。

この場合、反対側の壁の1つの壁にピーナッツバターを入れ、同量の水をピペットで注ぎます。ニュートラルな香りで、各壁に約10センチメートルの滴を塗ります。次に、動物を2分間探索させてから、記録を停止し、マウスをホームケージに戻します。

テストする各マウスでこのプロセスを繰り返します。常に新しいテストケージを使用しています。すべての好みテストを実行した後3〜5日、新しいテストケージを使用して回避テストを実施します。

マウスごとに、回避テストを実行します。引き付けテストのように、2つのメチル酪酸である回避の香りと心地よい香りだけを取り替えてください。感度試験では、同じマウスの試行間で1つのケージを再利用できます。

したがって、ケージの水側に印を付け、試行の合間に70%エタノールを浸した紙で短い壁を掃除する準備をします。実験当日は、10倍希釈シリーズで尿を4濃度にします。回避試験のような二重蒸留水を使用して、各動物を5分間その試験ケージに慣れさせます。

次に、各マウスを最初に最高希釈率(1〜10, 000)で尿にさらします。記録中に、尿希釈液をテストケージに塗布し、反対側の壁に水を加えます。他のテストと同様に、動物に探索させます。

2分間。その後、動物を清潔なマウスケージに移します。すべての動物が最低濃度を経験した後、すべてのテストケージの壁を清掃し、次に最も濃縮された尿を使用して各マウスでテストを繰り返します。

純粋な尿がテストされるまで、このプロセスを続けます。実験のためのすべてのデータを収集した後、画像Jのビデオを開き、説明されたプロトコルを使用してテキストプロトコルで提供されている調整および処理の詳細を確認します。2つの異なるノックアウトライン。

グループBとCは、同腹仔で作られたコントロールと比較されましたグループA.Aの無指向性の学生のT検定は、遺伝子型内の臭いと水の間で費やされた時間を比較します。一元配置イノバを使用して遺伝子型間の挙動を比較します。実験群ともに、B、Cともに吸着臭に対する選好性は示さず、回避試験では、反発性の2つのメチル酪酸臭に対する反応は、A群とB群で予想通りであったが、C群はこの臭気に対する回避行動を示さなかった。

感度試験では、引力の閾値は、水よりも好ましい尿である水と過ごした時間から尿と過ごした時間を差し引くことによって得られました。一方、Bとcは、好みを示すために100倍の濃度が必要でした。一度習得すると、この技術は適切に実行されれば数時間で完了し、この手順に従って、嗅覚学習や消光などの他の方法を実行して、嗅覚の可塑性と学習を調査することができます。