改変非縫合カフ技術を用いたマウス子宮頸動脈大動脈移植モデル

私はミュンヘンのLMUの一般、内臓および移植外科の研究室のマーティン・リルです。今日は、改変された非縫合カフ技術を用いたマウスヘテロトピック大動脈移植モデルを紹介します。まず、ミダゾラム、メデトミジンおよびフェンタニルの腹腔内注射でレシピエント動物を麻酔する。

小動物のための電気ヘアクリッパーで頸部横領域のすべての毛をクリップし、手順の間に目が乾燥するのを防ぐために綿棒で眼科軟膏を適用します。動物を顕微鏡下の加熱パッドの上のサピーヌの位置に置き、皮膚敏感な石膏ストリップで手術台に脚をそっとテープで貼ります。頭を後ろに傾け、アルコールで手術場を数回スクラブします。

小さいはさみで下顎骨の下顎に頸部切開から皮膚切開を作る。血管ペディクルの双極性焼灼器を介して顎下腺の右下葉を取り除き、その後マイクロハサミで切除します。右上と下側の双極性焼灼器を介して右胸膜筋を取り除き、その後の切除をマイクロハサミで除去し、一般的な頸動脈にアクセスします。

周囲の結合組織を細かい鉗子で引き離すことによって、一般的な頸動脈を可能な限り遠位および近位に動員する。一般的な頸動脈の真ん中の周りでお互いの間に最小限の距離で2つの7-0シルク合字を結び、合字の間に細かいマイクロハサミで共通の頸動脈をトランセクトします。袖口を通して近位合字の端を渡し、小さい動脈クランプでそれを固定する。

できるだけ合字に近い細かいマイクロハサミで合字を取り除き、容器の壁を傷めないように注意しながら、30ゲージ針でヘパリン化生理液剤で内腔を洗い流します。細かい血管拡張剤を使用して開いたルーメンを遠ざけ、ポリアミドチューブの上にそっと引っ張ることによってカフ上の頸動脈切り株を反転させる。逆頸動脈を緩く事前に結ばれた7-0シルクループで直します。

頸動脈の他端と他のカフで同じ手順を行います。遠位の連結端をカフを通し、小さな動脈クランプで固定します。できるだけ合字に近い細かいマイクロハサミで合字を取り除き、容器の壁を傷めないように注意しながら、30ゲージ針でヘパリン化生理液剤で内腔を洗い流します。

細かい血管拡張剤を使用して開いたルーメンを遠ざけ、ポリアミドチューブの上にそっと引っ張ることによってカフ上の頸動脈切り株を反転させる。逆頸動脈を緩く事前に結ばれた7-0シルクループで直します。レシピエント動物を脇に置き、大動脈セグメントが剥離されるまで生理食動物で上の2分の2を保湿します。

ドナーマウスをレシピエント動物と同じ方法で麻酔します。小動物のための電気ヘアクリッパーで腹部と胸部領域のすべての髪をクリップし、手順中に目が乾燥するのを防ぐために綿棒で眼科軟膏を適用します。動物を顕微鏡下の加熱パッドの上のサピーヌの位置に置き、皮膚敏感な石膏ストリップで手術台に脚をそっとテープで貼ります。

アルコールで手術場を数回スクラブします。小さいはさみで中線腹腔切多術を行い、下の静脈を露出させるために腸を少し上に押し上げます。30ゲージ針を使用して、ヘパリン化生理満行の1ccでIVCを注入します。

腹部大動脈とIVCを小さいはさみで腎動脈の下に切り、ドナー動物を外装する。血液を吸収するために腹部に圧迫をゆるやかに置きます。はさみで肋骨の両側分転を介して胸部切り取り術を行い、前胸壁を外科用クランプでクラニカルに傾けて、隔膜を露出する。

IVCと食道をダイヤフラムの真上にマイクロハサミで切ります。切ったIVCと食道を持つ鉗子で上向きに拍動し、底部からマイクロハサミで切除して胸部大根と後方遠心にアクセスして心臓と肺を取り除きます。周囲の結合組織と脂肪を細かい鉗子で引き離し、肋間動脈を損傷しないように注意することで、周囲の組織から胸部大動脈を動員する。

胸部大動脈からすべての枝を双極性の焼灼鉗子で焼灼し、マイクロハサミを使って横隔膜と大動脈弓の間の大動脈セグメントを切除する。残りの血液や血栓を取り除き、移植片をレシピエント動物に移すために血管壁を損傷しないように注意しながら、30ゲージ針でヘパリン化された生理食動物で切除された大動脈セグメントを洗い流します。ドナー大動脈セグメントの近位端を細かい鉗子で倒れた頸動脈の上の近位カフの上に引っ張り、すぐに緩く事前に結ばれた7-0シルクループでそれを固定する。

大動脈移植片の遠位の自由端をマイクロハサミでトリムし、2つのカフ間の距離に合うようにします。ドナー大動脈セグメントの遠位端を細かい鉗子で反転頸動脈の上の遠位カフの上に引っ張り、すぐに緩く事前に結ばれた7-0シルクループでそれを固定する。逆行灌流を可能にするために、最初に遠位クランプを取り外します。

止まり止めを得た後、近位クランプを取り外して吻当を完了する。最後に、6-0連続縫合で創傷を閉じます。28日後、動物は屠殺され、移植片は組織学的染色のために保存される。

これらのヴァン・ギーソンの大動脈セクションの染色に示されるように、完全にMHCミスマッチの同種移植大動脈はBalb/cドナーから黒人6人のレシピエントに、顕著な神経内皮過形成を発症し、明るさの狭化をもたらした。一方、黒人6人のドナーから黒人6人のレシピエントへのシンゲン大動脈移植は、わずかネオインティマル過形成しか発症しなかった。SM22に対する免疫蛍光染色は、この図に示すように、血管平滑筋細胞のマーカーであり、この緑色蛍光における、ネオインティマが主に血管平滑筋細胞から成っていることを示している。

マウス大動脈移植は、後期移植不全の最も一般的な原因である慢性移植脈管病のモデルとして機能する。同一性腹部モデルと比較して、当社の修飾カフ技術は、高い成功率につながるより少ない微小外科的要求である。また、カフの一定の直径に起因して、他の微小外科的移植モデルに見られる血管吻合の変動は無視され得る。

さらに、レシピエント動物が大動脈セグメントが植え替える前に最初に調製されるので、暖かい虚血時間は実験群全体で一定に保たれる。私たちの変更されたモデルは、他の研究室がマウスの大動脈移植を確立するのに役立つはずです。