2023年11月17日
本稿では、ハイブリダイゼーション、連鎖反応、RNA、ホールマウント蛍光 in situ ハイブリダイゼーション(HCR、RNA、WM-FISH)を行い、蚊の触角と上顎触覚における化学感覚受容体遺伝子の空間的および細胞的分解能に関する洞察を明らかにするために必要な方法と試薬について説明します。
私たちのグループでは、蚊の化学感覚系に興味を持っています。蚊の味覚と嗅覚を標的にすることで、蚊が私たちを見つけて噛むのを止めることができることを願っています。ハイブリダイゼーション連鎖反応蛍光in situハイブリダイゼーションは最近の開発です。
この技術は、感度が高く、頑健で、複数の遺伝子ターゲットをマルチプレックス化できるため、これらの遺伝子の発現と局在をネイティブ環境内で同時に可視化することができます。特殊トランスクリプトミクスは、空間生物学の分野で用いられている最先端の手法です。この技術は数千の遺伝子を多重化することができ、これらの遺伝子の発現を同時に可視化することができます。
私たちのプロトコルは、アンテナ内のどのニューロンが50ほどの可能なイオン性受容体のいずれかを発現するかを直接視覚化することを可能にします。これは、この古典的な因子受容体がどのように行動を媒介するかについての理解を導くための基本的なロードマップを提供します。触角のような昆虫の嗅覚器官内の嗅覚ニューロンは、通常、保護キチン質の殻の中に埋もれています。
このため、これらのニューロンにおける嗅覚受容体の発現を可視化することは非常に困難です。私たちのプロトコルは、キチナーゼ処理と最先端の蛍光およびシースループロトコルを組み合わせて使用し、これらの課題を克服します。
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本記事では、蚊の触角および小顎鬚における化学感覚受容体遺伝子の空間的および細胞的な発現を解明することを目的とした、ハイブリダイゼーション連鎖反応RNAホールマウント蛍光in situハイブリダイゼーション(HCR RNA WM-FISH)の詳細なプロトコルを提示します。高度な蛍光技術を用いることで、本研究は化学感覚系と、それが蚊の行動や環境との相互作用に及ぼす潜在的な影響を明らかにします。
蚊の嗅覚器官における化学感覚遺伝子発現の空間マッピングは、ベクトルコントロール戦略に向けた高解像度のターゲット検証を可能にします。HCR RNA WM-FISHプロトコルは、堅牢でマルチプレックスな遺伝子発現検出を提供し、初期探索における予測の信頼性を高め、メカニズム解明によるリスク低減を支援します。この機能は、感覚経路を解析し、病原体媒介昆虫における分子ターゲットの優先順位を決定しようとするバイオファーマチームにとって直接的に有用です。
本プロトコルは、初期のターゲットバリデーションからアッセイ開発、そしてベクター生物学におけるトランスレーショナルリサーチに至るまでのディスカバリー・コンティニュアム(探索の連続性)に組み込まれています。