長期にわたる片側性尿管閉塞の回復後の長期的な構造的および機能的転帰を評価するためのマウスモデル

私の研究室は、腎障害後の長期転帰を改善するためのメカニズムと治療法に取り組んでおり、このプロトコルの具体的な焦点は、尿路閉塞の回復後の長期転帰を研究するためのツールを開発することです。私たちは、片側性可逆性尿管閉塞のマウスモデルを開発し、腎臓の尿路閉塞を逆転させることの長期的な機能的および構造的転帰を評価できるようにしました。他の方法では、複数の手術や顕微手術の専門知識が必要ですが、ほとんどの検査室ではアクセスできません。さらに、これは片側性閉塞であるため、他のほとんどの方法では、分割腎機能検査を行わずに回復の機能評価を行うことはできません。実際には2つしかありません。1つ目は、各実験で近位尿管の同じ位置に血管クランプを一貫して配置することであり、2つ目は、尿管や腎臓に損傷を与えることなく、数日後に血管クランプを取り外すことです。

[レイチェル]まず、麻酔をかけたマウスの手術側を消毒剤で準備します。はさみと鉗子を使用して、皮膚と皮下層を通る正中線に沿って1.5センチメートルの縦方向の背側切開を行います。腎臓の上の左脇腹の筋肉と筋膜を小さく切開します。次に、鉗子で左腎臓を外側にします。鈍い鉗子を使用します。下極の脂肪と尿管近くの結合組織を注意深く解剖します。尿管領域を見つけます。次に、尿管とその結合組織を腎椎弓根から分離して、腎静脈と動脈がクランプに含まれないようにします。クランプアプライヤーを使用して血管クランプを開き、尿管の腎盂の真下に配置します。クランプのマークを使用して、すべてのマウスに均一な圧力がかかるようにします。次に、生理食塩水を浸した滅菌綿棒を使用して、クランプで腎臓を後腹膜腔にそっと押し戻します。次に、吸収性縫合糸を使用して筋肉層を縫合します。スキン クリップを使用して、スキン レイヤーを閉じます。尿管クランプを取り外すには、創傷クリップを取り外し、元の切開部を使用してクランプにアクセスするために形を変えずに手術領域を洗浄します。筋肉層を再開し、後腹膜腔を露出させます。鉗子を使用して、腎臓を外側にせずに後腹膜腔にクランプを慎重に配置します。クランプアプライヤーを使用して、鉗子を使用して周囲の組織を引き離しながらクランプをそっと開き、安全に取り外します。次に、腎臓を外部化して、腎盂に閉塞がないか検査します。腎盂の腫れは水腎症を確認します。生理食塩水を浸した滅菌綿棒を使用して腎臓を後腹膜腔に押し戻し、示されているように切開部を縫合します。対側腎摘出術を行うには、元の皮膚切開を使用して背側部位を再開します。サイズでは、右脇腹の筋肉と腎臓の上の筋膜。次に、鉗子を使用して右腎臓を外部にします。滑らかで湾曲した鉗子で右腎臓を持ち、周囲の組織から解放された上下の極を解剖します。腎臓を解放した後、二重の外科用結び目を使用して腎血管と尿管の周りにフォロシルク縫合糸を結びます。腎臓が暗くなるまで約30秒待ちます。次に、滑らかな湾曲した鉗子で持ち、湾曲したハサミを使用して結び目の遠位に切断して取り外します。生理食塩水を浸した滅菌綿棒を使用して、残りの腎椎弓根を後腹膜腔にそっと押し戻し、縫合糸とクリップを使用して筋肉と皮膚の層を閉じます。典型的な生存率と腎機能の測定は、可逆的な片側尿管閉塞の 84 日後に行われました。機能研究では、可逆的片側尿管閉塞と腎摘出術単独を、血中尿素窒素、経皮糸球体濾過率、および 18 時間の水分欠乏後の尿浸透圧を比較しました。尿浸透圧値は、同じ時点で腎摘出対照マウスよりも著しく低かった。